老年骨质疏松性椎体骨折患者血清miR-15b和miR-122表达变化及其意义.pdf

山东医药2023 年第 63 卷第 25 期老年骨质疏松性椎体骨折患者血清miR-15b和miR-122表达变化及其意义陈明浩，李永全，马金超天津市泰达医院骨科，天津300457摘要：目的探讨老年骨质疏松性椎体骨折（OVF）患者血清微小RNA-15b（miR-15b）、微小RNA-122（miR-122）表达变化及其意义。方法选择老年OVF患者93例（观察组），同期体检健康的志愿者93例（对照组），采集所有研究对象入组后清晨空腹外周静脉血，离心留取血清，采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-15b、miR-122表达。采用 Pearson相关分析法分析老年 OVF患者血清 miR-15b表达与血清 miR-122表达的关系。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-15b、miR-122表达对老年OVF的诊断效能。结果除骨密度外，两组性别、年龄、BMI以及合并高血压和吸烟史例数比较差异均无统计学意义（P均0.05）。观察组血清miR-15b相对表达量低于对照组，血清miR-122相对表达量高于对照组（P均0.05）。老年OVF患者血清miR-15b相对表达量与骨密度呈正相关关系（r=0.776，P0.05），血清miR-122相对表达量与骨密度呈负相关关系（r=-0.745，P0.05）。ROC曲线分析显示，血清miR-15b、miR-122表达单独和联合诊断老年OVF的曲线下面积（AUC）分别为0.760、0.810、0.922，血清miR-15b、miR-122表达联合诊断老年OVF的AUC高于二者单独（Z分别为2.217、2.033，P均0.05）。结论老年OVF患者血清miR-15b低表达、血清miR-122高表达，二者表达变化可能共同促进老年OVF的发生、发展；血清miR-15b、miR-122表达对老年OVF均具有一定诊断价值，二者联合时诊断价值更高。关键词：老年骨质疏松性椎体骨折；微小RNA-15b；微小RNA-122doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.25.013 中图分类号：R683 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2023）25-0053-03骨质疏松性骨折是在骨质疏松症基础上，由非暴力因素引起的一种脆性骨折。其中，椎体骨折是骨质疏松性骨折中最常见的类型，在中老年人群中的发病率非常高。骨质疏松性椎体骨折（OVF）可导致脊柱稳定性降低，继而引起下肢功能障碍，致残率较高，严重影响老年患者的生活质量1。目前，临床通常使用抑制骨吸收药物和促进骨形成药物来治疗OVF，但疗效一般。因此，提前预测老年 OVF发生具有重要的临床意义。微小 RNA（miRNA）是一类内源性非编码单链小分子RNA，能够在转录后水平调控基因的表达，在细胞发育、分化及内环境稳定等方面发挥重要作用。miR-15b是miR-15/16家族中的一员，能够参与细胞增殖、分化、凋亡等生命活动。近期研究发现，miR-15b能够参与调控骨形成和骨代谢过程，与骨骼疾病有一定相关性2-4。miR-122定位于人染色体18q21.31，是在肝脏生理和病理过程中发挥重要作用的特异性miRNA。有研究报道，miR-122还可参与骨形成和骨分化过程5。但目前miR-15b、miR-122 与老年 OVF 的关系尚不完全清楚。本研究探讨了老年 OVF 患者血清 miR-15b、miR-122表达变化及其意义。现报告如下。1 资料与方法 1.1临床资料选择2019年2月2022年2月天津市泰达医院骨科收治的老年OVF患者93例（观察组）。纳入标准：符合椎体骨折临床表现，并经X线、CT、MRI等影像学检查证实6；经双能X线骨密度仪检测，符合骨质疏松症诊断标准；年龄60岁。排除标准：继发性OVF者；合并其他脊柱疾病者；合并心、肝、肾等重要脏器严重疾病者；近1个月内服用过影响骨代谢药物者。同期选择在天津市泰达医院体检健康的老年志愿者93例（对照组）。本研究经天津市泰达医院伦理委员会批准（批准文号：1900136），所有研究对象或其家属知情同意并签署书面知情同意书。1.2血清 miR-15b、miR-122 表达检测采用实时荧光定量PCR法。观察组入院次日，对照组体检当日，采集清晨空腹外周静脉血，离心留取血清，-80 冰箱保存。采用TRIzol法提取血清总RNA，经 UPT-100 紫外可见分光光度计鉴定，提取的总RNA纯度和浓度合格。按TaKaRa反转录试剂盒说明，将总 RNA 反转录合成为 cDNA。以 cDNA 为模板，按ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix说明53山东医药2023 年第 63 卷第 25 期进行PCR扩增。引物序列：miR-15b上游引物5-ATGAACTTTCTCTGTCTTGG-3、下游引物 5-TCACCGCCTCGGCTTGCTCACA-3，miR-122 上 游 引 物5-AATACCAAGTCTGCGGCTTAAGC-3、下游引物5-ACCTCCGACCAAAAGATTCCT-3，U6 上游引物5-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3、下游引物5-GGAACGCTTCACGAATTTG-3。PCR 反应体系共 20 L：cDNA 模板 2 L，2 SYBR Green Master Mix 10 L，上下游引物各0.5 L，ddH2O补足至20 L；反应条件：95 预变性 3 min，95 变性 30 s、60 退火30 s、72 延伸30 s共45个循环。反应结束，绘制熔解曲线，获取循环阈值（CT）数。以U6为内参，采用2-CT法计算目的基因相对表达量。1.3骨密度检测老年 OVF 患者入院次日采用EXA-3000双能X线骨密度仪检测腰椎、全髋关节和股骨颈的骨密度，计算腰椎、全髋关节和股骨颈三个部位骨密度的平均值。1.4统计学方法采用SPSS25.0统计软件。符合正态分布的计量资料以-x s表示，结果比较采用独立样本t检验。计数资料比较采用2检验。相关性分析采用Pearson相关分析法。诊断效能分析采用受试者工作特征（ROC）曲线，曲线下面积（AUC）比较采用Z检验。P0.05），观察组骨密度低于对照组（t=7.755，P0.05）。2.2两组血清 miR-15b、miR-122 表达比较观察组与对照组血清miR-15b相对表达量分别为0.82 0.22、1.03 0.29，血清miR-122相对表达量分别为1.25 0.39、1.02 0.26。观察组血清 miR-15b相对表达量低于对照组，血清miR-122相对表达量高于对照组（t分别为5.380、4.732，P均0.05）。2.3老年OVF患者血清miR-15b、miR-122表达与骨密度的关系Pearson相关分析显示，老年OVF患者血清miR-15b相对表达量与骨密度呈正相关关系（r=0.776，P0.05），血清 miR-122相对表达量与骨密度呈负相关关系（r=-0.745，P0.05）。2.4血清miR-15b、miR-122表达对老年OVF的诊断效能分析结果ROC曲线分析显示，血清miR-15b表达诊断老年OVF的AUC为0.760（95%CI：0.6920.819），最佳截断值为 0.98，此时其诊断老年 OVF的灵敏度为 87.10%、特异度为 63.44%、Youden 指数为0.505；血清miR-122表达诊断老年OVF的AUC为 0.810（95%CI：0.7460.863），最佳截断值为1.17，此时其诊断老年OVF的灵敏度为83.55%、特异度为 65.59%、Youden 指数为 0.491；血清 miR-15b、miR-122 表达联合诊断老年 OVF 的 AUC 为 0.922（95%CI：0.8750.956），其诊断老年 OVF 的灵敏度为 82.80%、特异度为 91.40%、Youden 指数为0.742。血清 miR-15b、miR-122 表达联合诊断老年OVF的AUC高于二者单独（Z分别为2.217、2.033，P均0.05）。3 讨论 骨质疏松症是一种以骨量减少、骨组织微结构破坏为特征，导致骨脆性增加和易于骨折的代谢性骨病7-8。骨质疏松性骨折是在骨质疏松症基础上，由非暴力因素引起的一种脆性骨折，以OVF最为常见9。OVF可导致脊柱稳定性降低，继而引起下肢功能障碍，致残率较高，严重影响老年患者的生活质量1。近年来，随着人口老龄化日益加剧，老年OVF的发病率呈明显上升趋势。因此，寻找与老年OVF发生密切相关的特异性标志物，从而尽早预防和诊治，对提高老年OVF患者生活质量具有重要意义。miRNA是一类内源性非编码单链小分子RNA，在体内稳定存在，不直接参与基因的翻译和表达，可作为疾病诊断的非侵入性生物标志物10。miR-15b是miR-15/16家族中的一员，定位于人染色体3q25，能够参与细胞增殖、分化、凋亡等生命活动。既往研究报道，miR-15b 可参与子宫内膜癌、食管癌的发生、发展11-12。黄高翔等13通过筛选衰老性骨质疏松症小鼠胫骨组织中具有差异性表达的miRNA，发现miR-15b在衰老性骨质疏松症小鼠体内的表达发生波动，其不仅能够作为骨细胞分化的正向调节因子来调节骨细胞的分化、重聚等过程，还能参与调控骨细胞的增殖和凋亡。结果表明，miR-15b与骨骼疾病的发生、发展密切相关。miR-122是一种肝脏特异性 miRNA，定位于人染色体 18q21.31。miR-122能够通过调节机体胆固醇和脂质代谢，参与肝癌、病毒性肝炎、酒精性肝病等肝脏疾病的发生、发展14-15。近年研究发现，miR-122与骨细胞的形成、分化和成熟等生理过程密切相关16。但 miR-15b、miR-122是否参与老年OVF的发生、发展目前尚不54山东医药2023 年第 63 卷第 25 期完全清楚。本研究结果发现，观察组血清miR-15b相对表达量显著低于对照组，血清miR-122相对表达量显著高于对照组。结果表明，miR-15b、miR-122可能参与老年OVF的发生、发展，与张逢乐等17、李毛召等18研究结果一致。究其原因，miR-15b、miR-122可能通过调控相关的信号分子影响骨质疏松症的发生、发展，最终导致椎体骨折发生。本研究结果发现，老年OVF患者血清miR-15b相对表达量与骨密度呈正相关关系，血清miR-122相对表达量与骨密度呈负相关关系。骨密度降低会导致骨质疏松症发生，继而导致椎体发生骨折的概率增加。而老年OVF患者血清miR-15b、miR-122相对表达量均与骨密度密切相关，故二者与老年OVF的发生亦存在一定相关性。本研究ROC曲线分析显示，血清miR-15b、miR-122表达单独和联合诊断老年OVF的AUC分别为0.760、0.810、0.922，血清miR-15b、miR-122表达联合诊断老年OVF的AUC显著高于二者单独。提示血清miR-15b、miR-122表达对老年OVF均具有一定诊断价值，二者联合时诊断价值更高。综上所述，老年OVF患者血清miR-15b低表达、血清miR-122高表达，二者表达变化可能共同促进老年OVF的发生、发展；血清miR-15b、miR-122表达对老年OVF均具有一定诊断价值，二者联合时诊断价值更高。但关于miR-15b、miR-122在老年OVF中的具体作用机制仍需进一步研究。参考文献：1李泉，刘丹.两种不同药物对骨质疏松性椎体骨折术后老年患者疗效的影响 J.中国骨质疏松杂志，2020，26（9）：1358-1363.2ZHU L P，ZHOU J P，ZHANG J X，et al.miR-15b-5p regulates collateral artery formation by targeting AKT3（protein kinase B-3）J.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2017，37（5）：957-968.3张晋雷，薄延桥.新生儿缺氧缺血性脑病血清miR-15b、miR-424表达水平及其临床意义 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