静脉注射咪达唑仑对蛛网膜下腔出血大鼠脑神经炎症和损伤的改善作用及其机制.pdf

山东医药2023 年第 63 卷第 26 期静脉注射咪达唑仑对蛛网膜下腔出血大鼠脑神经炎症和损伤的改善作用及其机制孟元元1，刘艳1，张华强1，周民1，姚玲玲21 武汉科技大学附属普仁医院麻醉科，武汉430000；2 湖北文理学院附属医院 襄阳市中心医院疼痛科摘要：目的探讨咪达唑仑（MDZ）对蛛网膜下腔出血（SAH）大鼠脑神经炎症和损伤的改善作用，及其对环腺苷酸（cAMP）/蛋白激酶A（PKA）/环腺苷酸应答元件结合蛋白（CREB）信号通路的调节作用。方法取Wistar大鼠65只，随机分为假手术组10只及造模组55只，造模组通过向枕大池二次注入血液的方法建立SAH模型，假手术组向枕大池注入等体积生理盐水。将造模成功的50只SAH大鼠随机分为SAH组、MDZ低剂量组、MDZ中剂量组、MDZ高剂量组、MDZ高剂量+H-89组，每组10只。MDZ高、中、低剂量组分别经颈静脉注射0.30、0.15、0.05 mg/kg MDZ，同时腹腔注射等体积生理盐水；MDZ高剂量+H-89组经颈静脉注射0.3 mg/kg MDZ，同时腹腔注射5 mg/kg PKA抑制剂H-89；SAH组、假手术组颈静脉及腹腔注射等体积生理盐水；每天1次，连续3 d。干预结束后，对大鼠进行神经功能评分；采集静脉血，ELISA法检测炎症因子肿瘤坏死因子（TNF-）、白细胞介素（IL）-1、IL-6水平；每组随机选取3只大鼠，干/湿法评估脑水含量；剩余大鼠进行SAH等级评分，HE染色观察脑组织形态学变化；Western blotting法检测cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达。结果与假手术组相比，SAH组海马区神经元细胞核碎裂、坏死现象，神经功能评分、cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达降低，IL-1、IL-6、TNF-、脑含水量、SAH等级评分增加（P均0.05）；与 SAH 组相比，MDZ高、中、低剂量组神经元损伤有不同程度缓解，神经功能评分、cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达增加，IL-1、IL-6、TNF-、脑含水量、SAH等级评分降低（P均0.05）；与MDZ高剂量组相比，MDZ高剂量+H-89组神经元损伤加剧，神经功能评分、cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达降低，IL-1、IL-6、TNF-、脑含水量、SAH等级评分增加（P均0.05）。结论MDZ可减轻SAH大鼠脑神经炎症，抑制早期脑损伤；其机制可能与cAMP/PKA/CREB通路激活有关。关键词：咪达唑仑；cAMP/PKA/CREB通路；蛛网膜下腔出血；神经炎症；动物实验doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.26.006 中图分类号：R743.35 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2023）26-0026-05Effects and mechanism of intravenous injection of midazolam on neuroinflammation and brain injury in rats with subarachnoid hemorrhageMENG Yuanyuan1，LIU Yan，ZHANG Huaqiang，ZHOU Min，YAO Lingling1 Department of Anesthesiology，Puren Hospital Affiliated to Wuhan University of Science and Technology，Wuhan 430000，ChinaAbstract：Objective To investigate the effects of midazolam（MDZ）on neuroinflammation and brain injury in rats with subarachnoid hemorrhage（SAH）and its regulatory effect on cyclic adenosine monophosphate（cAMP）/protein kinase A（PKA）/cAMP-response element binding protein（CREB）signaling pathway.Methods Sixty-five Wistar rats were randomly grouped into the sham operation group（10 rats）and model group（55 rats）.In the model group，we established the SAH rat models by injecting blood into the occipital cistern twice，while rats in the sham surgery group were injected with equal volume of normal saline into the occipital cistern.The 50 successfully modeled SAH rats were randomly grouped into the SAH group，low-dose MDZ group，medium-dose MDZ group，high-dose MDZ group，and high-dose MDZ+H-89 group，with 10 rats in each group.The rats in the high-，medium-，and low-dose MDZ groups were injected with 0.30，0.15，and 0.05 mg/kg MDZ via jugular vein，respectively，while the same volume of normal saline was inject基金项目：湖北省自然科学基金项目（WJ2019A132）。第一作者简介：孟元元（1985-），女，主治医师，主要研究方向为手术麻醉与复苏。E-mail：通信作者简介：姚玲玲（1987-），女，硕士研究生，主治医师，主要研究方向为手术麻醉与复苏。E-mail：开放科学（资源服务）标识码（OSID）26山东医药2023 年第 63 卷第 26 期ed intraperitoneally；the rats in the high-dose MDZ+H-89 group received intravenous injection of 0.3 mg/kg MDZ and intraperitoneal injection of 5 mg/kg PKA inhibitor H-89；the rats in the SAH group and sham operation group were injected with equal volume of normal saline into the jugular vein and abdominal cavity，once a day，for 3 consecutive days.After the intervention，the rats were scored for neurological function；venous blood was collected，and the levels of inflammatory factors tumor necrosis factor（TNF）-，interleukin-1（IL-1）and interleukin-6（IL-6）were detected by ELISA.Three rats in each group were randomly selected，and the brain water content was evaluated by dry/wet method.The remaining rats were scored by SAH，and HE staining was applied to observe the morphological changes of brain tissues；Western blotting was applied to detect the expression of cAMP/PKA/CREB pathway-related proteins.Results Compared with the sham operation group，the neurons in the SAH group showed nuclear fragmentation and necrosis，the neurological function score，the expression levels of cAMP，p-PKA/PKA，and p-CREB/CREB decreased，and the IL-1，IL-6，TNF-，brain water content and SAH score increased（all P0.05）.Compared with the SAH group，the neuron injury in the high-dose，medium-dose，and low-dose MDZ groups was alleviated to varying degrees，the neurological function score，the expression levels of cAMP，p-PKA/PKA，and p-CREB/CREB increased，and the IL-1，IL-6，TNF-，brain water content and SAH score decreased（all P0.05）.Compared with the high-dose MDZ group，the neuron injury in the high-dose MDZ+H-89 group was aggravated，the neurological function score，the expression levels of cAMP，p-PKA/PKA，and p-CREB/CREB decreased，and the IL-1，IL-6，TNF-，brain water content and SAH score increased（all P0.05）.Conclusion MDZ can alleviate neuroinflammation and inhibit early brain injury in SAH rats，which may be related to the activation of cAMP/PKA/CREB pathway.Key words：midazolam；cAMP/PKA/CREB pathway；subarachnoid hemorrhage；neuroinflammation；animal experiment研究表明，蛛网膜下腔出血（SAH）发病后72 h内发生的早期脑损伤是导致患者高病死率和高致残率的主要原因，其发生与多种病理机制相关，而神经炎症被认为在SAH后早期脑损伤中发挥重要作用1-2。环腺苷酸（cAMP）作为重要的第二信使，介导许多细胞内信号级联反应，包括蛋白激酶A（PKA）/环腺苷酸应答元件结合蛋白（CREB）信号通路。动物实验表明，cAMP/PKA/CREB信号通路与抑郁症及认知功能障碍的发病机制密切相关3。已有研究发现，TGR5激动剂INT-777通过激活cAMP/PKA信号通路减弱SAH发病后脑损伤中神经炎症，改善SAH后的短期神经行为功能4。咪达唑仑（MDZ）作为一种常用的麻醉剂，具有水溶性、起效快、作用时间短等特点，并对人脑的神经基础产生药理学作用5，但目前尚无研究报道MDZ对SAH发病后的神经保护作用。2022年3月12月，我们对SAH大鼠给予MDZ进行干预，观察其对神经炎症的影响，探讨其作用机制与cAMP/PKA/CREB信号通路的关系。1 材料与方法 1.1材料1.1.1实验动物8周龄健康雄性 Wistar大鼠 65只，体质量280320 g，购自广州检验检测认证集团有限公司，许可证号：SYXK（粤）2022-0299。饲养条件：室温（22 1），湿度60%5%，12 h昼夜循环。自由饮食饮水。本研究经动物护理和使用委员会批准，并按照 实验动物护理和使用指南 进行。1.1.2主要试剂与仪器MDZ购自浙江恩华药业股份有限公司；PKA抑制剂H-89购自美国MedChemexpress公司；肿瘤坏死因子（TNF-）、白细胞介素（IL）-1、IL-6蛋白质提取试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司；ECL 试剂购自美国 Amersham Biosciences 公 司；cAMP、p-PKA、p-CREB、PKA、CREB一抗购自英国Abcam公司。Synergy LX多功能酶标仪购自美国BioTek公司；BX61光学显微镜购自日本Olympus公司。1.2动物分组与SAH模型制备将大鼠随机分为假手术组10只和造模组55只，参照文献6方法制备SAH模型。腹腔注射4%戊巴比妥钠麻醉大鼠，俯卧位固定。在枕外隆凸附近切开，剪开浅层肌肉，显露颈夹肌间隙，对环枕膜、枕骨进行初步定位。抽取股动脉血3.5 mL，在2 min内注入枕大池，注入后保持 30低头 30 min，使血液沉积在脑底血管。间隔48 h后，同样方法抽取另一侧股动脉血注入枕大池。当观察到大鼠脑底基底池部位有明显的血液存在，并有脑脊液漏出，表明SAH造模成功。假手术组进行上述同样操作，向枕大池注入等体积生理盐水。1.3药物干预方法取 SAH 造模成功的 50 只大鼠，随机分为 SAH 组、MDZ 低剂量组、MDZ 中剂量组、MDZ高剂量组、MDZ高剂量+H-89组，每组各10只。MDZ高、中、低剂量组分别经颈静脉注射0.30、27山东医药2023 年第 63 卷第 26 期0.15、0.05 mg/kg MDZ，同时腹腔注射等体积生理盐水；MDZ高剂量+H-89组经颈静脉注射0.3 mg/kg MDZ，同时腹腔注射5 mg/kg H-89；SAH组、假手术组颈静脉及腹腔注射等体积生理盐水。每天1次，连续3 d。1.4神经功能评估末次给药2 h后，参照改良的Garcia神经功能评分系统7，从自主活动、四肢运动对称性、前肢伸展、攀爬抓握、双侧躯干触觉反应、触角反应6个方面评估各组大鼠的神经功能，最低3分，最高18分，评分越低表示神经功能损伤越严重。1.5血清炎症因子检测采用ELISA法。采集大鼠静脉血，使用 ELISA 试剂盒检测 IL-1、TNF-、IL-6含量，具体步骤按照试剂盒说明。1.6脑含水量检测采用干/湿法。各组随机取3 只大鼠，在深度麻醉下将大鼠斩首，摘除大脑，取出同侧脑组织，立即使用电子天平称取湿重。将脑组织置于100 恒温烘箱中48 h至恒重，使用电子天平称取干重。以（湿重干重）/湿重100%计算脑含水量。1.7SAH等级评分取各组剩余的7只大鼠，对大脑基底表面的6个区域进行SAH等级评估。0级：无蛛网膜下腔血液；1 级：少量蛛网膜下腔血液；2 级：具有肉眼可见的中度血块；3级：血块阻塞了所有动脉。1.8脑组织形态学观察采用 HE染色。SAH 等级评分结束后，取部分海马区脑组织，加入4%多聚甲醛固定，脱水、石蜡包埋、切成4 m厚的切片。石蜡切片脱蜡、复水、苏木精染色60 s，1%盐酸乙醇染色3 s，最后伊红染色1 min。使用中性树胶将切片密封到载玻片上，光学显微镜400倍视野下观察组织形态学损伤情况。1.9脑组织 cAMP/PKA/CREB 通路相关蛋白检测采用Western blotting法。取剩余部分脑组织，使用蛋白质提取试剂盒提取蛋白质。通过 SDS-PAGE分离样品中的蛋白质，湿转移至PVDF膜，5%脱脂牛奶封闭，4 下与 cAMP、p-PKA、p-CREB、PKA、CREB一抗（稀释浓度均为1 1 000）孵育24 h。用 Tris 缓冲盐水洗涤后，加入二抗，室温孵育 1 h。加入ECL试剂使印迹条带可视化，用Image J软件进行定量分析。1.10统计学方法采用SPSS27.0统计软件。数据分布的正态性通过Kolmogorov-Smirnov检验进行分析，呈正态分布的计量资料以-x s表示，两组间比较采用t检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用 SNK-q检验。P0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1各组大鼠神经功能评分比较假手术组、SAH组、MDZ低剂量组、MDZ中剂量组、MDZ高剂量组、MDZ高剂量+H-89组神经功能评分分别为（21.23 2.14）、（5.55 0.56）、（8.92 0.90）、（14.24 1.44）、（18.42 1.85）、（9.25 0.93）分。与假手术组比较，SAH组神经功能评分降低（P0.05）；与SAH组比较，MDZ低、中、高剂量组评分均升高，其中高剂量组高于中、低剂量组，中剂量组高于低剂量组（P均0.05）；MDZ高剂量+H-89组评分较MDZ高剂量组降低（P0.05）。2.2各组大鼠血清IL-1、TNF-、IL-6水平比较与假手术组比较，SAH组血清IL-1、TNF-、IL-6水平升高（P均0.05）；与SAH组比较，MDZ低、中、高剂量组IL-1、TNF-、IL-6水平降低，且高剂量组低于中、低剂量组，中剂量组低于低剂量组（P 均0.05）；MDZ高剂量+H-89组血清IL-1、TNF-、IL-6水平较MDZ高剂量组升高（P均0.05）。见表1。2.3各组大鼠脑含水量比较假手术组、SAH组、MDZ低剂量组、MDZ中剂量组、MDZ高剂量组、MDZ高剂量+H-89组脑含水量分别为58.15%2.06%、82.77%3.11%、72.88%2.61%、67.88%2.39%、60.21%2.09%、76.08%2.47%。与假手术组比较，SAH 组脑含水量升高（P0.05）；与表1各组大鼠血清炎症因子水平比较（ng/mL，-x s）组别假手术组SAH组MDZ低剂量组MDZ中剂量组MDZ高剂量组MDZ高剂量+H-89组n101010101010IL-10.88 0.096.82 0.69a4.62 0.47b2.55 0.26bc1.04 0.11bcd4.72 0.48eIL-60.38 0.0442.15 4.23a27.82 2.79b12.35 1.24bc4.62 0.48bcd25.46 2.55eTNF-0.72 0.086.72 0.68a4.21 0.43b2.16 0.23bc1.15 0.12bcd4.33 0.45e注：与假手术组比较，aP0.05；与SAH组比较，bP0.05；与MDZ低剂量组比较，cP0.05；与MDZ中剂量组比较，dP0.05；与MDZ高剂量组比较，eP0.05。28山东医药2023 年第 63 卷第 26 期SAH组比较，MDZ低、中、高剂量组脑含水量降低，且高剂量组低于中、低剂量组，中剂量组低于低剂量组（P 均0.05）；MDZ 高剂量+H-89 组脑含水量较MDZ高剂量组增加（P0.05）。2.4各组大鼠 SAH 等级评分比较假手术组、SAH组、MDZ低剂量组、MDZ中剂量组、MDZ高剂量组、MDZ高剂量+H-89组大鼠SAH等级评分分别为（0.00 0.00）、（17.11 1.72）、（11.34 1.14）、（7.24 0.73）、（4.26 0.43）、（11.83 1.19）分。与假手术组比较，SAH 组评分升高（P0.05）；与SAH组比较，MDZ低、中、高剂量组评分均降低，且高剂量组低于中、低剂量组，中剂量组低于低剂量组（P均0.05）；MDZ高剂量+H-89组评分较MDZ高剂量组增加（P0.05）。2.5各组大鼠脑组织海马区形态学变化假手术组海马组织神经细胞排列整齐，结构正常；SAH组神经元细胞核碎裂，出现细胞坏死现象，MDZ低剂量组、MDZ中剂量组、MDZ高剂量组神经元细胞损伤逐渐减轻，MDZ高剂量组趋于正常化；MDZ高剂量+H-89组较MDZ高剂量组神经元细胞损伤加重。见OSID码图1。2.6各组大鼠脑组织cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达水平比较SAH组cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 表 达 水 平 较 假 手 术 组 降 低（P 均0.05）；MDZ低、中、高剂量组较 SAH组增加（P均0.05）；MDZ 高剂量+H-89 组较 MDZ 高剂量降低（P均0.05）。见表2。3 讨论 早期脑损伤是SAH后不良结局的主要原因，包括SAH后脑水肿、血脑屏障破坏、神经细胞的凋亡等病理变化8。神经炎症是SAH诱导的早期脑损伤中关键的病理过程之一9。研究显示，抑制神经炎症可减轻大鼠SAH后的脑水肿和神经元损伤，缓解早期脑损伤，进而改善 SAH 的预后10-11。因此，在SAH的情况下，针对神经炎症的治疗将减弱早期脑损伤并有利于改善神经系统预后。MDZ是一种苯二氮类药物，主要通过苯二氮受体作用于脑干和边缘系统，属于新型神经毒剂抗惊厥药。除了抗癫痫作用外，MDZ还具有抗炎作用，可以抑制神经炎症因子释放12。研究发现，MDZ可通过减少BV-3小胶质细胞中的NLRP3炎症小体活化和促炎细胞因子释放来发挥神经保护作用13。TANG 等14报道，MDZ对缺氧/复氧引起的脑损伤具有神经保护作用。此外，临床研究显示，咪达唑仑联合芬太尼的镇静镇痛能够改善重症SAH患者的脑代谢，具有较好的治疗效果15。二次枕大池注血是目前构建SAH模型较为理想且最为认可的造模方式，具有操作简单、成功率高、动物病死率低等优点。脑水肿是SAH后的重要早期病理生理改变，也是导致SAH患者神经功能障碍的重要因素；神经炎症反应可导致神经元细胞功能损伤和线粒体功能异常，是SAH后脑水肿发生发展的关键机制。本研究采用二次枕大池注血法构建SAH大鼠模型，通过Garcia评分、脑含水量、SAH等级评分等评估MDZ对大鼠神经功能及早期脑损伤的影响。结果显示，SAH大鼠神经功能评分降低，脑含水量、SAH等级评分以及神经炎症因子均增加，表明SAH大鼠神经功能受损；MDZ干预能够降低SAH大鼠脑含水量、SAH等级评分以及神经炎症因子水平，减轻SAH后的神经功能损伤，改善脑水肿，表明MDZ是一种有效的抗SAH后早期脑损伤的神经保护药物。cAMP作为重要的第二信使，参与学习记忆过程和突触长期可塑性的改变；CREB是cAMP胞核内核蛋白，海马区磷酸化的CREB是调节中枢神经系统的重要核内转录因子，具有多种生物学功能，包括参与调节学习、记忆能力、改善认知功能等，是多种信号转导通路的关键调节成分16。CREB 主要对PKA等信号发生应答反应，cAMP激活PKA后，活化的 PKA 进入细胞核，可磷酸化激活 CREB17。JIN等18报道，在脓毒症大鼠模型中，激活cAMP/PKA/CREB信号轴可通过减少海马体内小胶质细胞的数量、中性粒细胞浸润和炎症因子（如 IL-1、IL-6 和TNF-）的表达，抑制神经炎症来预防认知障碍。XIN等19报道，抑制SAH后的cAMP-CREB途径可诱导少突胶质细胞分化和髓磷脂损伤。HU等4报道，在 SAH 大鼠模型中，INT-777 可通过激活 cAMP/PKA信号通路，抑制神经炎症，减轻脑水肿和 SAH后的神经功能缺损；而PKA抑制剂H-89可逆转INT-表2各组大鼠脑组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达比较（-x s）组别假手术组SAH组MDZ低剂量组MDZ中剂量组MDZ高剂量组MDZ高剂量+H-89组n777777cAMP/-actin1.08 0.110.25 0.03a0.44 0.05b0.69 0.07bc0.93 0.10bcd0.43 0.05ep-PKA/PKA0.99 0.100.18 0.02a0.39 0.04b0.62 0.07bc0.92 0.10bcd0.38 0.04ep-CREB/CREB0.94 0.100.11 0.02a0.33 0.04b0.65 0.07bc0.89 0.10bcd0.36 0.04e注：与假手术组比较，aP0.05；与SAH组比较，bP0.05；与MDZ低剂量组比较，cP0.05；与MDZ中剂量组比较，dP0.05；与MDZ高剂量组比较，eP0.05。29山东医药2023 年第 63 卷第 26 期777对SAH后神经行为结局的神经保护作用。以上研究表明 cAMP/PKA/CREB 通路是改善 SAH 后脑损伤和神经功能障碍的重要治疗靶点。本研究结果显 示，SAH 后 大 鼠 脑 组 织 cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 表达显著下降，说明 cAMP/PKA/CREB信号通路被抑制；伴随着神经炎症因子水平IL-1、TNF-、IL-6和脑组织含水量的增加以及严重的神经元损伤，再次证实cAMP/PKA/CREB信号通路抑制与SAH后早期脑损伤的发生发展有关。给予不同剂量 MDZ 干预后，大鼠海马组织中 cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达上调，神经炎症因子水平降低，神经元损伤得到缓解，推测MDZ可以通过激活cAMP/PKA/CREB通路抑制炎症反应，改善SAH大鼠神经元损伤。为验证该实验推测，本研究在MDZ干预的基础上应用PKA抑制剂H-89进行实验，结果发现H-89明显减弱了MDZ对SAH大鼠的神经保护作用，提示MDZ抑制神经炎症、缓解早期脑损伤的作用可能是通过激活cAMP/PKA/CREB通路实现的。综上所述，MDZ能够抑制神经炎症，减轻SAH大鼠早期脑损伤，改善其神经功能，其机制可能与激活 cAMP/PKA/CREB 通路有关。本研究仅从动物水平进行了初步探究，后续可考虑从体外细胞水平进行深入研究。此外，SAH的发病机制复杂，MDZ能否通过其他信号通路对SAH发挥神经保护作用仍需进一步探讨。参考文献：1ROSTGAARD N，OLSEN M H，CAPION T，et al.Inflammatory markers as predictors of shunt dependency and functional outcome in patients with aneurysmal subarachnoid hemorrhageJ.Biomedicines，2023，23，11（4）：997.2XIE Z，HUANG L，ENKHJARGAL B，et al.Recombinant Netrin-1 binding UNC5B receptor attenuates neuroinflammation and brain injury via PPAR/NFB signaling pathway after subarachnoid hemorrhage in ratsJ.Brain Behav Immun，2018，69：190-202.3WANG X L，GAO J，WANG X Y，et al.Treatment with Shuyu capsule increases 5-HT1AR level and activation of cAMP-PKA-CREB pathway in hippocampal neurons treated with serum from a rat model of depression J.Mol Med Rep，2018，17（3）：3575-3582.4HU X，YAN J，HUANG L，et al.INT-777 attenuates NLRP3-ASC inflammasome-mediated neuroinflammation via TGR5/cAMP/PKA signaling pathway after subarachnoid hemorrhage in rats J.Brain Behav Immun，2021，91：587-600.5WANG J，SUB P，LIANG P.Neuropsychopharmacological effects of midazolam on the human brain J.Brain Inform，2020，7（1）：15.6马朝晖，李贵福，罗望池，等.改良“二次枕大池注血法”构建Wistar大鼠蛛网膜下腔出血模型 J.中国神经精神疾病杂志，2012，38（3）：190-192.7但敏，陈理.芍药苷对蛛网膜下腔出血早期脑损伤大鼠NLRP3炎症小体表达的影响 J.卒中与神经疾病，2023，30（2）：154-164.8ROMOLI M，GIAMMELLO F，MOSCONI M G，et al.Immunological profile of vasospasm after subarachnoid hemorrhageJ.Int J Mol Sci，2023，24（10）：8856.9SRIRAM S，CUTLER C，AZAB M，et al.Neuroinflammation and subarachnoid hemorrhage：a revised look at the literatureJ.Clin Res Commun，2022，5（3）：14.10QIU X，TAO Q，ZHANG L，et al.Deletion of BAK1 alleviates microglial necroptosis and neuroinflammation after experimental subarachnoid hemorrhage J.J Neurochem，2023，164（6）：829-846.11QU W，CHENG Y，PENG W，et al.Targeting iNOS alleviates early brain injury after experimental subarachnoid hemorrhage via promoting ferroptosis of M1 microglia and reducing neuroinflammation J.Mol Neurobiol，2022，59（5）：3124-3139.12WELZEL B，SCHMIDT R，JOHNE M，et al.Midazolam prevents the adverse outcome of neonatal asphyxia J.Ann Neurol，2023，93（2）：226-243.13FENG H，LIU Y，ZHANG R，et al.TSPO ligands PK11195 and midazolam reduce NLRP3 inflammasome activation and proinflammatory cytokine release in BV-2 cells J.Front Cell Neurosci，2020，14：544431.14TANG Z，YANG F，DONG Y，et al.Midazolam contributes to neuroprotection against hypoxia/reoxygenation-induced brain injury in neonatal rats via regulation of EAAT2J.Brain Res Bull，2020，161：136-146.15孙可心.咪达唑仑联合芬太尼对重症蛛网膜下腔出血患者脑代谢的影响 J.中国当代医药，2021，28（31）：99-102.16QIU Y，WANG Y，WANG X，et al.Role of the hippocampal 5-HT1A receptor-mediated cAMP/PKA signaling pathway in sevoflurane-induced cognitivedysfunction in aged ratsJ.J Int Med Res，2018，46（3）：1073-1085.17HOU Z，YANG X，LI Y，et al.Electroacupuncture enhances neuroplasticity by regulating the orexin a-mediated cAMP/PKA/CREB signaling pathway in senescence-accelerated mouse Prone 8（SAMP8）miceJ.Oxid Med Cell Longev，2022，2022：8694462.18JIN P，DENG S，TIAN M，et al.INT-777 prevents cognitive impairment by activating Takeda G protein-coupled receptor 5（TGR5）and attenuating neuroinflammation via cAMP/PKA/CREB signaling axis in a rat model of sepsisJ.Exp Neurol，2021，335：113504.19XIN Y，CHEN J，ZHANG H，et al.Dexras1 induces dysdifferentiation of oligodendrocytes and myelin injury by inhibiting the cAMP-CREB pathway after subarachnoid hemorrhage J.Cells，2022，11（19）：2976.（收稿日期：2023-05-22）30