六小时笔记-生化.pdf

?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_生物化学常考点?蛋白质的空间构象=一级结构(氨基酸的排列顺序)主要?+分子伴侣(热休克蛋白70即Hsp70和伴侣蛋白)?+异构酶(蛋白质二硫键异构酶、肽脯氨酰基顺-反异构酶)?分子伴侣:参与蛋白质折叠成正确的空间构象(一)蛋白质的结构与功能螺旋的结构(蛋白质二级结构):?顺时针(右手螺旋)?每3.6个氨基酸残基螺旋上升一圈，?螺距0.54nm?氢键(维系键)方向与螺旋长轴基本平行?形态特点:氨基酸侧链伸向螺旋外侧，主链伸向螺旋内侧蛋白质在280nm和DNA在260nm吸收光谱的机制?蛋白质：芳香族氨基酸如色氨酸、酪氨酸共轭双键?DNA:核苷酸碱基中的共轭双键?a.含有共轭双键的氨基酸具有紫外线吸收性质苯环-C=C-C=C-=芳香族AATrp（色）?最强Tyr（酪）Phe（苯丙）?最弱280nm?b.具有强烈的紫外吸收260nm处有最大吸收值?测定溶液中DNA或RNA的含量?A260/A280测定核酸纯度?原因:碱基?核苷核苷酸核酸?-C=C-C=C-?(有共轭双键)蛋白质变性?变性:本质是蛋白质特定空间构象(二、三、四级)的破坏，蛋白质的理化性质和生物学活性丧失?(1)破坏的键:非共价键，二硫键?不破坏的键:肽键(一级结构氨基酸序列不变)?Pr变性只留下肽键?vs?DNA变性:只破坏了氢键?溶解度，黏度(2)改变（“水煮蛋”）?结晶能力消失?生物学活性丧失?易被蛋白酶水解280nm处吸光值(共轭双键暴露在外)(有争议)N：16%只有Z-?DNA是左手，其余都是右手螺旋主链的空间结构：肽单元平面谷胱甘肽的作用：保护巯基酶不被氧化特别是色氨酸煮鸡蛋?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_等电点及应用?两性解离NH2+H(质子)H-C-RNH3COOCOOH+OHH-C-R某一PH等电点（PI）兼性离子（电中性）（1）PH=PI?兼性离子（电中性）PH（正常PH?7.357.45）PI（血浆蛋白PI5.0）?带负电荷（相当于加OH）?PHpI蛋白质带负电荷(相当于往溶液中加入OH)pH2?营养价值真核生物蛋白质的降解:?ATP非依赖溶酶体降解途径(外来蛋白、膜蛋白、长寿蛋白)?ATP依赖泛素化降解途径(异常蛋白和短寿蛋白)脑、骨骼肌：-磷酸甘油穿梭【没考过】?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_?蛋白质的降解?AA?非选择性(差)?非依赖ATP?非泛素化标记?降解对象:外来pr、膜pr、长寿pr?“外贸厂”?选择性(好)?依赖ATP?标记(泛素)?泛素化?降解对象:异常pr、短寿pr产生?两个途径?(真核生物)1、溶酶体2、蛋白酶体泛素?Pr拆嘌呤核苷酸循环(心肌、骨骼肌，因L-谷氨酸脱氢酶活性很弱，不能发生联合脱氨基);?联合脱氨基是肝和肾等组织中主要的脱氨基方式嘌呤核苷酸循环:心肌/骨骼肌中L-谷氨酸脱氢酶活性很低，不能进行联合脱氨基氨基酸?谷氨酸?天冬氨酸转氨酶1?转氨酶2?NH2?NH2?NH2-酮戊二酸?草酰乙酸?苹果酸腺苷酸代IMP?NH3腺苷酸代琥珀酸合成酶AMP腺苷酸代琥珀酸裂解酶延胡索酸腺苷酸脱氨酶(ADA)(淋巴c丰富)O琥珀酸氨基甲酰磷酸合成酶I和II的比较(重点)?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_尿素循环的过程;氨的转运?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_芳香族氨基酸代谢:生成儿茶酚胺、黑色素等?芳香族AA代谢:苯丙、色、酪?均为生糖兼生酮?二氢生物碟呤?辅酶:四氢生物蝶呤NADPH苯丙AA?酪AA?苯丙AA?转氨酶?苯丙酮酸?苯丙酮尿症(-酮酸)对CNS有毒性，患儿智力低下苯丙AA羟化酶?多巴?多巴胺?NA?A左旋多巴?帕金森病治疗SAM酪AA羟化酶MSH，ACTH黑色素(黑素C)?白化病Addison病Cushing综合征肝硬化肝病面容羟苯丙酮酸?尿黑酸?延胡索酸?+?乙酰乙酸尿黑酸尿症分解?草酰乙酸?生酮AA生糖兼尿黑酸氧化酶TCAG儿茶酚胺酪AA酶T3/T4(八）核苷酸的代谢嘌呤和嘧啶的合成原料(没有PRPP)。嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的合成原料(有PRPP)。苯丙酮尿症缺乏苯丙氨酸羟化酶白化病缺乏酪氨酸酶?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_阿糖胞苷作用机制:抑制CDPdCDP(抑制核苷酸还原酶)嘌呤和嘧啶的合成原料及抗代谢物质:dUMPdTMP:5-氟尿嘧啶，甲氨蝶呤?(没有氮杂丝氨酸和阿糖胞苷)?dUDP?dUMP?dTMPUMP?UDP?MTX?FH2还原酶?UTP?CTP?CDP?dCTP?氮杂丝氨酸?阿糖胞苷?核苷类似物?阿糖胞苷?胞苷相似CDP?dCDP核苷酸还原酶胸苷酸合酶CTP合酶核苷酸还原酶5-FU血浆蛋白的功能:?绝大多数血浆蛋白(如清蛋白)是肝脏合成，球蛋白是浆细胞合成?除清蛋白外，几乎所有的血浆蛋白均为糖蛋白?清蛋白运输的物质:脂肪酸、Ca、胆红素、磺胺类药物(九)非营养物质代谢肌酸和血红素的原料:?肌酸:甘氨酸、精氨酸、SAM(S-腺苷甲硫氨酸)(“赶紧?sm”)?血红素:甘氨酸、琥珀酸CoA、Fe成熟红细胞代谢途径及意义(只有以下三条代谢途径):?糖酵解:是红细胞获得能量的唯一途径?磷酸戊糖途径:是红细胞产生NADPH(并不是NADH)的唯一途径?2，3-BPG旁路:主要功能是调节血红蛋白的运氧能力(亲和力)与胆红素竞争性地结合清蛋白的物质：磺胺药、胆汁酸、水杨酸、脂肪酸等黄疸病人不可用合成时需要S-腺苷甲硫氨酸(SAM)提供甲基的物质:?肉碱、肾上腺素(不是去甲肾上腺素)、肌酸、胆碱;?此外，还有真核生物成熟mRNA5-端帽子结构mGppp?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_三种黄疸特点:?a.溶血性黄疸:血中游离胆红素增加为主(结合胆红素也增加);?尿胆素(原)和粪胆素(原)增加?但血结合珠蛋白通常会减少(尤其是血管内溶血)，且尿中无胆红素(结合胆红素)?b.阻塞性黄疸(由胆道阻塞引起):血中结合胆红素增加为主(游离胆红素也增加);?尿结合胆红素升高(浓茶色尿)，尿胆素(原)和粪胆素(原)减少(陶土色)。?c.肝细胞性黄疸:血中游离胆红素和结合胆红素高，尿(结合)胆红素增加;?尿胆素(原)增加(轻度肝损伤时)?使尿胆素原排泄减少的因素:胆道阻塞(梗阻性黄疸)、酸化尿液、肝功能衰竭(肝c性黄疸)?使尿胆素原排泄增加的因素:溶血(胆红素生成增加)、碱化尿液、轻度肝功能损伤(肝c性黄疸)增加或减少尿胆素原排泄的因素(三种黄疸?+?尿PH)?(1)溶血性:IBil?DBil?胆素原?(粪/尿)?(2)肝C性(肝脏功能受损)?轻度(早期/中期)?重度?(3)梗阻性:?VS?肠梗阻:?（4）尿PH?酸化:?碱化:三种黄疸?溶血性黄疸?肝C性黄疸?梗阻性黄疸?血?IBil?DBil?TBil?DBil/TBil?0、5?尿胆素原?尿胆素?(大小便颜色深)?“金灿灿”?尿结合胆红素?（-）早/中期晚期?不一定?(大便颜色:白陶土色)(+):浓茶色?(+):浓茶色尿三胆两极分化肠梗阻时尿胆素原?可排泄增加黄疸必考?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_胆红素合成原料的来源:五种血红蛋白、肌红蛋白、过氧化物酶、过氧化氢酶、细胞色素真核生物和原核生物DNA聚合酶的功能?原核生物DNA复制中(DnaA，DnaB，DnaC，DnaG，?SSB和拓扑异构酶的作用)(十)DNA的合成半保留复制的意义:遗传稳定性意义?(1)保留了亲代全部遗传信息?(2)遗传的保守性/稳定性?(3)DNA复制的高保真性?(4)物种的稳定性?半不连续复制:解链与其中一条链合成方向相反;冈崎片段证明实验：密度梯度离心?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_逆转录酶的研究意义;着色性干皮病发病的分子基础:XP类基因缺陷（核苷酸切除修复系统缺陷）真核生物和原核生物复制的特点:?前者为多复制子复制，有“四短”(复制起始点、RNA?引物、冈崎片段、催化速率)，后者为“四长”。?【DNA复制】原核生物?真核生物复制oriRNA引物DNA-pol冈崎片段端粒/端粒酶一个，长(245bp)?多个，短(11bp)?单复制子?多复制子长?短至少5种（，.）?至少15种（、.）催化速率快(2500dNTP/s)?催化速率慢(50dNTP/s)?无?有(复制终止时端粒酶催化?合成染色体末端的端粒结构)长(1000-2000核苷酸)?短(100-200核苷酸)15min端粒酶(蛋白质+RNA构成):特殊逆转录酶，需要引物(染色体53链)，合成端粒(重复的TG序列);维持真核生物染色体结构的稳定性，避免缩短补充/发展了中心法则加深RNA病毒致癌认识进行基因操作制备cDNAcDNA文库法获取目的基因意义容易患皮肤癌?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_(十一)RNA的合成?区别模板链、编码链、领头链、随从链a.模板链：在DNA双链中，转录时作为RNA合成模板的一股单链称为模板链b.编码链：在DNA双链中，与模板链相对应的另一股单链被称为编码链前导链、后随链(均指的是DNA子链)模板链、编码链(均指的是DNA母链)c.前导链(领头链)?DNA复制时，沿着解链方向生成的子链，DNA的合成是连续进行的，这股链称为前导链。d.后随链(随从链)复制方向与解链方向相反的子链，DNA的合成是不连续进行的，这股链称为后随链。原核生物的RNA聚合酶的亚基及功能;抑制剂(利福平/利福霉素抑制亚基)真核生物三种RNA聚合酶的产物;抑制剂(鹅膏蕈碱)原核生物启动子序列(-10区，Pribnow盒);原核生物羽毛状图形(转录与翻译同时进行的现象)真核生物顺式作用原件:?TATA盒(Hogness盒)结合TFIID?GC盒结合SP1?CAAT盒结合C/EBP?增强子结合可诱导因子(HIF-1，MyoD)与最终产物只有T/U不一样真核生物:启动子,增强子，沉默子，绝缘子食品工程?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_mRNA加工修饰(加帽、加尾、去除内含子、连接外显子、RNA编辑等);45S-RNA分解产物原核生物转录终止机制:依赖因子和非依赖因子的转录终止(一串寡聚U)(3)终止依赖?(Rho)的转录终止?P?蛋白质因子?因子?结合?polyC(RNA3)?RNA-pol构象改变?停顿下来?因子解旋酶活性?DNA-RNA解离?RNA释放park?非依赖性因子RNA3端形成鼓槌状/茎环/发夹结构?RNA-pol构象改变?停顿下来3UUUUUU?A-U不稳定前体rRNA(45s-rRNA)的加工修饰?DNA?45s-rRNA?5.8s、18s、28s-rRNASnoRNA?+?PrSnoRNPRNA-polI(十二)蛋白质的合成遗传密码子的特性?(尤其是连续性移码突变、摆动性生物遗传稳定性、简并性同义突变的意义、?镰状细胞贫血错义突变)?肽酰转移酶（核酶、转肽酶）：真核28S?RNA，原核23S?RNA(1)方向性:从5?3方向阅读不管是DNA合成(复制/逆转录)，RNA合成(转录)，?遗传密码的阅读方式都是(2)连续性:密码子被连续阅读，不间断，从起始密码子?终止密码子?若可读框中插入/缺失了非3的倍数核苷酸?可造成移码(框移)突变(3)简并性(现象)?61种密码子编码20种AA?多种密码子决定同一种AA?编码同一种AA的密码子称为同义密码子?密码子特异性取决于前两位，第三位改变往往不改变AA序列(4)摆动性(本质):mRNA(密码子)与tRNA(反密码子)之间碱基配对不严格，存在摆动?多种密码子对应一种反密码子导致简并性同义突变简并性和摆动性意义:?降低基因突变的生物学效应，有利于维持生物表型稳定?(5)通用性:所有生物共用一套遗传密码?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_蛋白质的生物合成干扰(常见抗生素的作用位点，白喉毒素的作用机制)?消耗ATP的过程：氨酰RNA合成；?不需要消耗能量的过程:成肽!白喉毒素可使真核生物eEF-2(延长因子，elongation?factor)失活干扰素可使真核生物eIF-2(起始因子，initiation?factor)失活(十三)基因表达调控乳糖操作子(重点):真正的诱导剂半乳糖(结合阻遏蛋白)，?没有葡萄糖和cAMP升高时被激活当培养基无G时，细菌（大肠杆菌）利用乳糖，cAMP结合CAPCAP激活CAP结合位点使RNA-pol向下游移动操纵序列启动子调节基因我老头亮?错义突变?是指碱基置换造成了氨基酸编码改变。如镰形红细胞贫血患者发生的碱基置换(点突变)。?无义突变?是指碱基置换造成正常密码子变为终止密码子。?同义突变?是指碱基置换不改变氨基酸编码。【12、13年未考】【每年都考】色氨酸操纵子:衰减子模式增强子:?与被调控基因位于同一条DNA链上，属于顺式作用元件(包括启动子、增强子、沉默子、绝缘子，?没有操纵子和衰减子)?是组织特异性转录因子的结合部位?能够在基因的上游或下游起作用，还能远距离实施调节作用?作用与序列的方向性无关?对启动子没有严格的专一性，统一增强子可以影响不同类型启动子的转录【押题】?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_(十四)细胞信号转导EGF-EGFR/HER-2信号转导通路的基本过程(Ras-MAPK通路，必须熟练掌握)?酪氨酸激酶?EGF/胰岛素(I)/IGF/生长因子?GH(生长激素)/EPO(促红素)/INF(干扰素)?R?EGFR肺腺癌/大肠癌?吉非替尼?西妥昔单抗TPKJAK(招募型受体)SATA?Tyr-P?SH2?Grb2(接头蛋白)?SH3?SH3?SOS?(富含Pro模体)GTP-Ras(小G蛋白/低分子量G蛋白)(GTP酶活性)?RAF(MAPKKK)?MEK（MAPKK）?ERK(MAPK)MAPK级联反应丝/苏氨酸激酶细胞核，调节基因转录第二信使:cAMP、cGMP、IP3、DG(DAG)、Ca酪氨酸激酶活性成分(EGFR、胰岛素受体、ABL、SRC、KIT、JAK、FMS、TPK)?丝/苏氨酸激酶活性(MAPK级联:RAF、ERK、MEK，PKA、PKC、PKG等)?GTP酶:RAS蛋白和三聚体G蛋白(十五)其他章节基因工程获取目的基因的方法:化学合成法?、cDNA文库法(逆转录酶)、?基因组DNA文库法?、?PCR(聚合酶链反应，最常用最简单)克隆载体:最基本特性(能自我复制)?常用载体(质粒、M13噬菌体、酵母人工染色体，但没有病毒RNA和细菌如大肠杆菌拟核区DNA)特别喜欢考多选?:?/VX?Qya?/?/?七以安_?七以安_原癌基因的分类及编码产物：?编码转录因子:FOS、MYC、JUN?编码生长因子:SIS、INT-2?编码酪氨酸激酶类生长因子受体:EGFR、ERB-B、HER-2、FMS、KIT原癌基因活化的机制(获得启动子或增强子，染色体易位，基因扩增，点突变)在体内具有抗氧化作用的维生素有:?维生素A、C、E?+?硫辛酸?(无维生素K?)转化、转染和感染的定义和区别重组DNA转入受体(宿主)细胞(转)?1、转化:目的基因?细菌(大肠杆菌)，真菌(酵母菌）?2、转染:目的基因?真核细胞(动物细胞，酵母除外)?3、感染:目的基因+病毒(载体)?噬菌体DNA?逆转录病毒(RNADNA)?宿主细胞?腺病毒DNA直接导入?直接导入看对象看载体【押题】