辣木叶多酚提取及抗氧化能力研究.pdf

第10 期（总第5 8 6 期）2023年10 月文章编号：16 7 1-9 6 4 6（2 0 2 3）10 b-0015-04农产品加工Farm Products Processing辣木叶多酚提取及抗氧化能力研究No.10Oct.李天娇，*程碧君，张芳玮，张峻旗，董禹辰（吉林农业科技学院食品工程学院，吉林吉林132 10 1)摘要：通过单因素试验和正交试验研究辣木叶多酚提取工艺及辣木叶多酚抗氧化能力。确定了辣木叶多酚提取的最佳条件。在乙醇体积分数为7 0%，料液比为1：15（g：m L），浸提时间为12 0 min，浸提温度6 5 条件下，辣木叶多酚得率为0.5 15 4%。体外抗氧化试验表明，辣木叶多酚对DPPH自由基、羟基自由基均具有良好的清除作用，其抗氧化能力优于维C。关键词：辣木叶；多酚；提取；抗氧化；DPPH中图分类号：TS202.1Study on the Extraction and Antioxidation of Polyphenols fromLI Tianjiao,CHENG Bijun,ZHANG Fangwei,ZHANG Junqi,DONG Yuchen(College ofFood Engineering,Jilin Agricultural Science and Technology College,Jilin,Jilin 1321,China)Abstract:In order to determine the extraction technology of polyphenols from Moringa oleifera leaves,it was determinedwhether it had antioxidant effect.The optimum conditions for extracting polyphenols from Moringa oleifera leaves weredetermined by the combination of single factor and orthogonal test.The results showed that the optimum conditions forextracting polyphenols were 70%,the ratio of material to liquid was 1:15(g:mL),the extraction time was 120 min,theextraction temperature was 65,a n d t h e e x t r a c t io n r a t e o f p h e n o l w a s 0.5 15 4%,a n d t h e a n t io x id a n t t e s t s h o w e d t h a t t h epolyphenols of Moringa oleifera leaf had good scavenging effect on DPPH free radical and hydroxyl radical.Key words:Moringa oleifera;polyphenols;extraction;antioxidation;DPPH文献标志码：AMoringa oleifera Leavesdoi:10.16693/ki.1671-9646(x).2023.10.032辣木，广泛分布于热带地区，在广东、海南等地区有种植区。种子可以提取高级润滑油，辣木叶子可以作为汤的调味料，味道鲜美。新采摘的辣木叶还可以作为野菜食用。辣木有许多药用价值，如用于治疗偏头痛、头晕、呼吸不畅、上火、尿黄、胃胀气、食欲不振、胃肠区挛，以及各种癌症 2-3。辣木叶富含矿质元素、维生素、糖苷和多酚类化合物等活性物质。辣木叶具有良好的抗氧化、抑菌、降低血压、血脂和血糖，并改善机体的内脏器官、抑制人体内的DNA分子损伤、良好的调节胃肠道微生物等多种生物活性 4-5 。选择辣木叶为研究对象对辣木叶多酚进行提取。经过试验获得了最佳工艺条件，采用DPPH自由基清除、羟自由基清除试验研究辣木叶多酚抗氧化性能。探索辣木叶多酚的提取方法，并研究辣木叶多酚的抗氧化能力，对辣木叶多酚的开发利用提供借鉴。收稿日期：2 0 2 2-0 9-2 6基金项目：川菜发展研究中心科研项目（CC22Z30，CC2 1Z0 1)；吉林农业科技学院博士启动基金项目（吉农院合字第 校2 0 19 0 2 7 7)号）。作者简介：李天娇（19 8 4 一），男，博士，讲师，研究方向为植物资源开发与利用。通讯作者：程碧君（19 8 7 一），女，博士，讲师，研究方向为食品生物制造与功能性食品。1材料与方法1.1 材料与试剂辣木叶，市售；没食子酸、福林酚、DPPH、邻苯三酚等，天津市致远化学试剂有限公司提供。1.2仪器与设备AL204型电子天平，梅特勒托利公司产品；ST-02A型多功能粉碎机，上海树立仪器仪表有限公司产品；DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司产品；UV-8000A型可见分光光度计，尤尼柯仪器有限公司产品。1.3试验方法1.3.1辣木叶多酚的提取将新买的新鲜辣木叶子洗净，除去表面的异物，放在托盘中，用保鲜膜包起来，在表面上打几个小孔，保持通风。最后，放人干燥箱中，干燥至恒定16质量，取出干燥的辣木叶子，用破碎机粉碎，过筛(40目），放入密封袋中，放在阴?干燥地方备用。称取辣木叶粉1.0 g，按不同的料液比加人不同体积分数乙醇。放人试管中，用玻璃棒搅拌均匀，在恒温水浴中振荡提取。然后放入离心机中，以转速4 0 0 0 r/min离心10 min。上清液放人5 0 mL容量瓶中为后续测试做准备回。1.3.2制作标准曲线没食子酸标准溶液的质量浓度为0.1mg/mL，取出6 个15 mL比色管，6 个比色管依次加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 m L没食子酸溶液，各管补加蒸馏水至1mL，然后在每个比色管中加人1.5 mL福林酚试剂，加入3mL的质量浓度为7 5 g/mL碳酸钠试剂，最后加人蒸馏水至体积为10 mL，静置2 h，在波长7 5 2 nm处测定其吸光度，制作标准曲线，以1号管测得的吸光度为空白，以没食子酸标准品质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，最后得到多酚标准曲线回归方程YI。1.3.3多酚得率计算辣木叶多酚产量按照以下公式计算图：100%.多酚得率(%)=C-V式中：C-提取液中多酚的质量浓度，mg/mL；V一一提取液的体积，mL;M称取的辣木叶粉的质量，mg。1.3.4单因素试验和正交试验分别考查乙醇体积分数、料液比、浸提时间、浸提温度对辣木叶多酚得率的影响。根据单因素结果，设计四因素三水平正交试验，根据辣木叶片多酚的得率，确定最佳提取条件。辣木叶多酚提取正交试验设计见表1。表1辣木叶多酚提取正交试验设计A乙醇体积分数B料液比C浸提时间D浸提温度水平1%1602653701.3.5体外抗氧化试验(1）D PPH 自由基清除试验。准确配制DPPH浓度为0.2 mo1/L，辣木叶多酚溶液1mL加人到干净的试管中，加人3mLDPPH溶液，混合均匀，放在黑暗中静置30 min，在波长5 17 nm处测得吸光度为Al。另一试管中加入3mL无水乙醇溶液，并将1mL不同质量浓度的辣木叶多酚溶液加人试管中，混合均匀后，在黑暗中静置30 min，在波长5 17 nm处测定吸光度为A2另取试管放人3mLDPPH溶液和1mL无水乙醇溶液，混合后，将其置于黑暗中30 min，在波长5 17 nm处的吸光度为Ao，以相同浓度的维C作农产品加工为对照试验。(2）羟基自由基清除试验。量取1mL不同质量浓度的辣木叶多酚溶液，分别加入5 个试管中，依次加人浓度为9 mmol/L的FeSO4溶液1mL和质量分数为8.8%的H,0z溶液1mL，浓度为9 mmol/L的水杨酸溶液1mL，振荡至完全混合，然后在37 的水浴中放置30 min，在波长5 10 nm处测量吸光度为Ai，另外取5 个试管用蒸馏水代替H,O2，其他条件不变，吸光度为A2。取另一试管用蒸馏水代替辣木叶多酚溶液，其他条件不变，测定吸光度为Ao，以相同浓度的维C 代替作为对照试验I。清除率=1-(Ar-A,)Ao1.4统计分析试验结果采用平均值标准差（Xs）表示，使用SPSS17.0统计软件进行方差分析，以pBDC，说明最佳提取条件为A,BC,D2，即最佳条件为乙醇体积分数7 0%，料液比1：15（g：mL)，提取时间12 0 min，提取温度6 5。根据这种组合进行验证试验。此时得率为0.5 15 4%。2.3辣木叶多酚体外抗氧化试验2.3.1DPPH自由基清除测定DPPH自由基清除测定见图6。10090%/率塑影80706050400.2图6 DPPH自由基清除测定由图6 可知，在不同质量浓度的辣木叶多酚条件下，清除率呈现良好的上升状态，且无拐点出现。选择抗氧化剂维C作为试验的对照品。在维C的质量浓度逐渐提高，清除率呈上升状态，说明维C具有一定的清除DPPH的能力，但辣木叶多酚清除DPPH的效果优于维C。因此可以看出，辣木叶多酚溶液具有很强的清除DPPH自由基的能力。2.3.2羟基自由基清除测定羟基自由基清除测定见图7。由图7 可知，在不同质量浓度的辣木叶多酚条件下，清除率呈良好的上升状态。维C的质量浓度多酚得率/%0.396 20.422 00.320 61223311321320.45930.41930.456 70.442 10.391 50.446 10.067 80.026 80.40.6质量浓度/mgL-l-辣木叶多酚；-维C3122310.445.40.451 10.410.90.040 20.80.466 40.50220.416 00.515 40.445 80.437 91.01880706050403020100.2图7 羟基自由基清除测定逐渐提高，清除率呈上升状态，表明维C对羟基自由基具有一定的清除能力，但维C对羟基自由基的清除效果不如辣木叶多酚。3结论选用辣木叶片为原料，采用乙醇提取辣木叶片中的多酚。试验表明，乙醇提取辣木叶多酚的最佳工艺条件为乙醇体积分数7 0%，料液比1：15（g：mL），提取时间12 0 min，提取温度6 5。在此条件下，多酚的得率可达0.5 15 4%。经过DPPH自由基和羟自由基清除抗氧化能力试验表明，辣木叶片多酚具有较强的抗氧化能力，为辣木叶片多酚的体外抗氧化试验提供了应用指导，为抗氧化产品的开发提供了技术依据，为合理开发辣木叶资源提供了有效途径。参考文献：1 陈瑞娇，彭珊珊，王玉珍.辣木叶多酚乙醇提取工艺的研究 食品研究与开发，2 0 16，35（4)：38 8-4 0 3.2 王志巧，罗晓丽，贾江新.辣木提取工艺研究】食品农产品加工科技，2 0 14，33（8)：2 0-2 2.3 张辛怡，林聪，刘洋.辣木叶对牛奶生产性能及抗氧化免疫指标的影响 J】.动物营养学报，2 0 17，32（3）：628-635.4陶虹，蔡丽娟.响应面试验优化辣木叶多酚超声辅助提取工艺及其抗氧化活性 食品科学，2 0 16，4 4（2)：24-30.0.40.6质量浓度/mgL-1-辣木叶多酚；-维C2023年第10 期0.81.05 6岳秀洁，李超，扶雄.超声提取辣木叶多酚优化及其抗氧化活性.食品科技，2 0 16，4 3（8）：2 2 6-2 31.7陈晨，胡文忠，田沛源.超声辅助提取辣木叶多酚工艺优化及其抗氧化活性分析 食品科学，2 0 14，32（6)：12-17.8Smirnoff N,Cumbes Q J.Hydroxyl radical scavenging activityof compatible solutes 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