近亲血缘关系对亲权鉴定的影响.pdf

综 述近亲血缘关系对亲权鉴定的影响*朱素敏 综述,毛 伟 审校(重庆市血液中心输血研究一所,重庆 4 0 0 0 5 2)摘 要 本文就近亲血缘关系干扰亲权鉴定风险及研究进展进行综述。结论:近亲血缘关系干扰亲权鉴定,容易引起误判。评估近亲干扰尤其是同胞血缘关系对亲权鉴定的影响将具有一定的实际意义。实际检案中怀疑近亲干扰时,可联合应用多种检测策略降低误判率。关键词 亲权鉴定;近亲;全同胞D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 9-5 5 1 9.2 0 2 3.2 5.0 0 6文章编号:1 0 0 9-5 5 1 9(2 0 2 3)2 5-0 0 1 6-0 3文献标识码:A 脱氧核糖核酸(D e o x y r i b o n u c l e i c a c i d,D NA)是染色体的重要组成部分,可组成遗传指令。D NA分子利用腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和鸟嘌呤来编码遗传信息。除了这四种典型的碱基外,D NA分子中还含有多种修饰过的碱基,它们可以控制和调控基因的表达和染色体的结构。人类染色体基因组D NA中大约有3.01 09个碱基对,其中9 9.9%的碱基序列是相同的,0.1%是不同的。不同碱基序列中存在大量短串联重复序列(s h o r t t a n d e m r e p e a t,S T R),通常由16个碱基单元组成一段D NA重复序列,由于核心单位重复数目在个体间呈高度变异性并且数量丰富,构成了S T R基因座的遗传多态性,被广泛应用于法医学、人类学、遗传学、谱系研究等研究领域。S T R目前在法医亲权鉴定工作中应用了数十年,且针对常见的三联体和二联体亲权鉴定、个体识别、全同胞鉴定等案件建立了较为成熟的检验策略和标准体系。随着社会的发展,法医亲权鉴定工作也面临一些新的形势和挑战,如近亲干扰风险1。1 近亲干扰风险1.1 亲缘误判风险 与随机个体比较,有亲缘关系的个体间有更大的机会具有相同的等位基因。亲权鉴定中被检父(母)与孩子真正的亲代有亲缘关系时,则可能存在检出的不符合遗传规律基因座的个数很少、甚至没有的情况,将存在误判风险。C h a n g等2分析了7,8 1 8,9 6 9对不相关对和7 5对近亲属对的S T R数据,发现非亲 属 间 随 机 假 匹 配 的 概 率 为4.2 21 0-6,但子女与亲本一级亲属间虚假或模糊父权结果的发生率高达1 8.6 7%。通过调查研究表明,若被检父与孩子为无关个体时,检测TH 0 1等1 5个常用S T R基因座,有9 8.3%的案例会出现3个或以上不符合孟德尔遗传定律的基因座,9 9.7%会出现2个或以上矛盾基因座,而有0.3%会出现1个或0个矛盾基因座;若被检父与孩子可能生父存在近亲血缘关系时,出现3个或以上不符合孟德尔遗传定律的基因座的比率会下降到6 3.4%,出现 2个或以上矛盾基因座的比率则下降为8 5.1%。这表明,在被检父与孩子可能生父存在近亲血缘关系时,有1 4.9%的案例表现为1个或0个基因座矛盾。而仅出现1个矛盾基座时,很容易怀疑为S T R突变,从而造成误判。因为S T R s的突变率受多种因素的影响,相对较高。H u a n g等3对8 7 0 8例中国汉族亲权鉴定样本中2 8个常染色体S T R的突变率进行了分析,发现有2 7个位点发生了2 7 9个突变,其中一步突变2 7 3个占比9 7.8%,二步突变5个占比1.8%,三步突变1个占比0.4%,总体平均突变率为1.1 91 0-3。父源突变率明显高于母源突变率,他们的比率为6.0 4:1,且随父源年龄增加,突变率有增加趋势。1.2 蓄意隐瞒风险 在实际检案中,为了形成假亲子关系,并非孩子父母但却与孩子有其他血缘关系的个体(近亲)蓄意代替孩子真正的亲代参加亲权鉴定的情况也时有发生。近些年,随着二胎政策放开,一些单独家庭积极生育二胎,导致同胞间年龄相差较大,若因上户、上学、出国(办理以家庭为单位的签证时,亲子关系的签证比兄弟姐妹关系的签证要容易的多)等其他涉及利益事项隐瞒同胞关系,代替真正亲代参与鉴定,也将形成误判。美国的移民案例进行的回顾性分析,估算出移民案件中有兄弟姐妹谎称亲子关系而不被发现,及不能给出明确的证据驳回亲子关系的案例,同时发现用于鉴别同胞和亲子关系时共享1个或2两个位点的比率比父权指数和同胞指数更具优势。1.3 大数据风险 在需要进入D NA数据库比对的个体识别、亲权鉴定案件中,随着D NA数据库的信息量越来越大,出现库内多个体同时与库外一被鉴定人D NA分型一致,或库内多个体同时与被鉴定人不能排除亲子关系的可能性也逐渐增大,该类情况已经被报道多次。不相关的个体之间随机但完美的假匹配也可能导致错误,在利用大型数据库搜索拐卖儿童案61现代医药卫生2 0 2 3年7月第3 9卷增刊1 J M o d M e d H e a l t h,J u l y 2 0 2 3,V o l.3 9,S u p p l 1*基金项目:重庆市九龙坡区科学技术局科技计划重点项目(2 0 1 9-0 2-0 1 0-Z)。件时,出现一个不相关的人和孩子所有S T R基因座的都是偶然配合的,可能会被误判作为亲生父母。原因可能为D NA 数据库样本量增大后出现随机匹配的几率增加及数据库中录入了一些有某种血缘关系个体。我国公安机关 D NA 数据库由前科人员库、现场库、打拐库等 8 个子库构成,在库容和实际破案效能上均居世界首位,更需重视近亲干扰的问题。2 近亲关系研究2.1 近亲干扰存在的问题 目前,亲权鉴定意见的形成主要是通过遗传标记系统的排除概率(p r o b a b i l i-t y o f e x c l u s i o n,P E)和 父 权 指 数(p a t e r n i t y i n d e x,P I)、不符合遗传规律基因座的个数与特征情况等综合考虑,有些案例还需要根据具体情况增加检验伴性遗传标 记(如X-S T R、Y-S T R等)。Y染 色 体 上 的S T R或单核苷酸多样性(s i n g l e n u c l e o t i d e p o l y m o r-p h i s m,S N P)单倍型也可以提高非亲属男性之间的辨别能力。S N P位点也是遗传标记,可用于遗传分析,与S T R标记相比,S N P在人类基因组中的数量更多,突变率更低,适用于高通量技术分析。但当亲权鉴定中有近亲关系干扰时,则存在以下问题:1.在近亲代替孩子的真正亲代时,由于矛盾基因座的数量可能较少或者为0,很容易误判为突变。2.常用P E公式、P I公式没有考虑近亲干扰的情况。3.在面对同一父系或同一母系的近亲干扰时,伴性遗传标记系统也失去作用。2.2 常用检测策略 法医鉴定领域关于近亲的研究,主要是鉴定两个体间是否具有某种近亲关系,先假设一种目标亲缘关系的前提下,通过一些方法获得遗传标记检测结果的似然比率值,然后评估对亲缘关系假设的支持程度,常用检测策略主要有以下几种。状态一致性评分法(i d e n t i t y b y s t a t e s c o r e I B S)是基于两个个体间共有等位基因的计数进行关系鉴定的一种方法,需计算对于每一个短串联重复序列(S T R)基因座而言,两名有争议个体之间的状态一致性等位基因的个数。两名个体在同一基因座上可出现相同的等位基因,这种可能来源于遗传也可能来源于随机匹配的一致性被称为状态一致性,该等位基因也被称为状态一致性等位基因。该方法是生物学全同胞关系鉴定技术规范推荐的方法,具有不需要使用基因频率数据,不涉及复杂的计算,分析简便、直观、快速等优点,缺点是当允许的错判率较低时,存在无法判定的“灰色区域”比例较大。I TO 法也是一种适合于计算两个亲属间具有各种血缘关系机会的方法,在全同胞鉴定中具有很高的应用价值,且检测基因座越多,系统效能越高,并能降低错判风险。特殊血缘关系的鉴定应根据具体情况综合应用各种遗传标记,在分析共享等位基因的基础上得到不排除的结论后,可进一步使用I TO法根据具体情况建立判别假设,获得客观可靠的鉴定意见。父权指数(P I)和叔父指数(A I)相比法,有学者认为经比较使二者之比率(o d d s r a t i o)O R=P I/A I1 0 0:1才能认定父权关系。但是该方法缺少对遗传标记系统效能和遗传变异方面综合性的考虑,因此在涉及假亲子关系矛盾基因座数量很少时,作用有限。目前,在法医分析中,有些学者利用S N P基因芯片来识别个体的亲属。L o n g J4利用全基因组高密度S N P微阵列对1 8 0个样本进行分析后得出非亲缘个体S N P总错配率是亲子个体的8-1 0倍,总错配率大于5.3%的个体被定义为无亲缘关系,总错配率小于0.6%的个体被定义为有亲子关系。运用高通量测序技术检测S N P并计算染色体共享指数(i n d e x o f c h r o m o s o m e s h a r i n g I C S)可以对三代以内直系或旁系血亲进行亲缘关系判定,也是今后一个发展方向。对于基于似然比(L R)计算的亲缘关系检验结果的判读,须确定截断点,建立合适的L R的截段点,提高准确性、敏感性和特异性也是一研究热点。基于大规模平行测序(m a s s i v e l y p a r a l l e l s e q u e n c i n g,MP S)的基因分型结果显示,MP S可以提供额外的等位基因序列结构,可以用来推断突变的起源。S N P作为一种补充标记,可以提供有效的信息,明确亲缘关系。法医系谱技术利用全基因组芯片或测序生成的 S N P 数据对两个个体之间的共祖片段(I d e n t i t y b y d e s c e n t,I B D)长度进行测量,从而推断其父系或母系的 1-9 级亲缘关系,这种识别个体的方法也被称为“长距离家族关系搜索”。家族性D NA分析背后的原理描述的是生物相关个体,比如父母、兄弟姐妹或近亲与不相关的个体相比会在测试的位点上共享更多的等位基因。在案件中应用该技术手段,可以缩小家系排查范围,为案件侦查提供指向性线索。法医普系研究和Y-S T R数据库搜索的优势在于利于识别远亲的家族。S T R、S N P及基因序列发生的插入或缺失改变(i n s e r t i o n-d e l e t i o n I n D e l)组合系统的策略,以合理控制检验成本和过程,在亲缘关系检测中具有重要价值。在这项研究中,纳入了6 0个S T R s,3 0个I n D e l s、4 7 2个S N P s,联合应用鉴别全同胞兄弟姐妹的特异性不低于9 9.9 9%,区分同父异母兄弟姐妹的特异性为9 9.9 3%。联合标记系统在解决兄弟姐妹关系识别问题方面显示出良好的前景。另外单个市售试剂盒在全同胞和其他亲缘关系分析中显示出有限的鉴别能力,因此它们通常与其他试剂盒结合以获得更多的位点和更好的效果。研究表明4 0个S T R+9 1 S N P标记集在全同胞检测中的敏感性和特异性均达到1 0 0%,具有较强的鉴别亲属和非亲属对的能力,但不足以区分属于同一常染色体亲属类别的亲属。忽略连锁会导致相关和不相关对的似然比不正确,而突变对似然比的影响相对较低。此外,连锁和突变对全同胞检验的影响较高。可通过检测两个体间的S T R、S N P信息,并利用L o g 1 0 L R 71现代医药卫生2 0 2 3年7月第3 9卷增刊1 J M o d M e d H e a l t h,J u l y 2 0 2 3,V o l.3 9,S u p p l 1作为截断值判断亲缘关系。利用结合连锁、连锁不平衡和突变的x染色体标记在亲属关系检验中计算似然比也是一种甄别方法。2.3 特殊情况的近亲干扰 同卵双胞胎来自于同一个受精卵,他们拥有相同的基因型,通常无法通过常规的基于不同S T R片段的法医学D NA检测进行区分。研究表明,暴露于各种环境因素可引起遗传修饰,主要发生在D NA化学物质成分上,导致其结构的改变(表观遗传学),特别是D NA甲基化和组蛋白乙酰化。V i d a k i A等5证明了用表观遗传分化区分同卵双生子是可行的。也可采用全基因组测序(w h o l e g e n o m e s e q u e n c i n g,WG S),利用生物信息学分析对同卵双胞胎进行区分。Y u a n L等6联合应用全基因组测序、等位基因特异性P C R和深度扩增子测序可对同卵双胞胎样本进行鉴别。与核D NA相比,线粒体D NA具有更高的区分同卵双胞胎的潜能。造血干细胞移植是一种新的治疗方法,用捐赠者捐赠的干细胞替换病人的干细胞,受者将转变为供者基因型,而通常供受者有血缘关系,进行移植后可以提取毛囊的D NA进行区分,供者为男性,受者为女性的还可检测毛囊内的Y-S T R进行鉴别。3 展 望 存在亲缘关系的个体可干扰亲权鉴定,目前常规亲权鉴定中使用的方法不足以反映近亲干扰的影响,从事法医工作的人员应意识到这一严峻问题,探索、寻求应对策略。探索近亲血缘关系干扰亲权鉴定的特点,选用相关校正公式和方法,考虑实际鉴定中可能存在的近亲干扰,兼顾遗传变异、系统效能和个案效能,以评估近亲干扰尤其是同胞血缘关系对亲权鉴定的影响将具有一定的实际意义。另外,实际检案中怀疑近亲干扰时,可联合应用多种检测策略降低误判率。参考文献1S T E F AN I A T,E L E NA B,G I A C OMO G,e t a l.M o n o z y g o t i c t w i n s:I d e n t i c a l o r d i s t i n g u i s h a b l e f o r s c i e n c e a n d l a wJ.M e d S c i L a w,2 0 2 1,6 1(S u p p l 1):6 2-6 6.2CHANG L,YU H,M I AO X,e t a l.E v a l u a t i o n o f a C u s t o m S N P P a n e l f o r I d e n t i f y i n g a n d R e c-t i f y i n g o f M i s j u d g e d.P a t e r n i t y i n D e f i c i e n c y C a s e s J.F r o n t G e n e t,2 0 2 1,1 2:6 0 2 4 2 9.3HUANG Y,L I U C,X I AO C,e t a l.M u t a t i o n a-n a l y s i s o f 2 8 a u t o s o m a l s h o r t t a n d e m r e p e a t s i n t h e C h i n e s e H a n p o p u l a t i o nJ.M o l B i o l R e p,2 0 2 1,4 8(6):5 3 6 3-5 3 6 94L ONG J.P a r e n t a g e a n a l y s i s u s i n g g e n o m e-w i d e h i g h-d e n s i t y S N P m i c r o a r r a yJ.G e n e,2 0 2 1,7 8 5:1 4 5 6 0 5.5V I D AK I A,KA L AMA R A V,C A RMN E O-MONTO R O E,e t a l.I n v e s t i g a t i n g t h e e p i g e-n e t i c d i s c r i m i n a t i o n o f i d e n t i c a l t w i n s u s i n g b u c c a l s w a b s,s a l i v a,a n d c i g a r e t t e b u t t s i n t h e f o r e n s i c s e t t i n gJ.G e n e s(B a s e l),2 0 1 8,9(5):2 5 26YUAN L,CHE N X,L I U Z,e t a l.I d e n t i f i c a t i o n o f t h e p e r p e t r a t o r a m o n g i d e n t i c a l t w i n s u s i n g n e x t-g e n e r a t i o n s e q u e n c i n g t e c h n o l o g y:A c a s e r e p o r tJ.F o r e n s i c S c i I n t G e n e t,2 0 2 0,4 4:1 0 2 1 6 7.(收稿日期:2 0 2 2-0 9-1 1 修回日期:2 0 2 3-0 2-2 6)通信作者,E-m a i l:h o n g z h u w r i t t i n g 1 6 3.c o m。综 述免疫检查点抑制剂治疗胰腺癌的研究进展秦浩然,李 婧 综述,朱 红审校(昆明医科大学第二附属医院,肝胆胰外科二病区,云南 昆明 6 5 0 0 0 0)摘 要 胰腺癌的首选治疗方法为手术切除,但术后复发率高达8 0%以上。胰腺癌的非手术治疗包括术前术后的放化疗、分子靶向治疗、免疫治疗、介入治疗等,但治疗效果均不太理想。伴随对肿瘤微环境的研究及大量试验数据的支持,免疫检查点抑制剂已经成为临床上胰腺癌免疫治疗中应用最广泛的方法。本文就近年免疫检查点抑制剂治疗胰腺癌的研究进展进行综述,着重论述免疫检查点抑制剂联合放化疗、靶向治疗等疗法在胰腺癌中的疗效。关键词 胰腺癌;免疫治疗;免疫检查点抑制剂;进展D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 9-5 5 1 9.2 0 2 3.2 5.0 0 7文章编号:1 0 0 9-5 5 1 9(2 0 2 3)2 5-0 0 1 8-0 4文献标识码:A 胰腺癌作为消化道的高侵袭性肿瘤,近年来发病率呈明显的上升趋势1。胰腺癌因起病隐匿,发现时大多数病患已为中晚期,5年生存率为1.3-7.5%。目前,胰腺癌的首选治疗方法为手术切除,但术后复发率高达8 0%以上;胰腺癌的非手术治疗包括术前术后的放化疗、靶向治疗、免疫治疗、介入治疗等,但治疗81现代医药卫生2 0 2 3年7月第3 9卷增刊1 J M o d M e d H e a l t h,J u l y 2 0 2 3,V o l.3 9,S u p p l 1