民族药灯盏花药材及其混淆品的指纹图谱研究.pdf

年 月云南化工 第 卷第 期 ，：民族药灯盏花药材及其混淆品的指纹图谱研究晏润文，蒲芬，余涛，黄艳敏，徐士奎 ，罗艳秋（云南省食品药品监督检验研究院，工业和信息化部产业技术基础公共服务平台，云南昆明 ；大理大学药学院，云南大理 ；云南中医药大学，云南昆明 ）摘要：通过 指纹图谱，比较灯盏花及其混淆品不同药用部位的差异，结合相似度分析，为灯盏花药材鉴别和利用提供依据。采用 （，）色谱柱，以水（含 甲酸）和乙腈（含 甲酸）为流动相进行梯度洗脱，流速为 ，检测波长为 。结果表明，建立的灯盏花指纹图谱共标定了 个共有峰；灯盏花茎、叶部与全草对照图谱无明显差异，但与花部对照图谱存在一定差异。建立的指纹图谱方法可对灯盏花及其混淆品加以鉴别，展苞飞蓬、多舌飞蓬与灯盏花的相似度较高，且多舌飞蓬、展苞飞蓬、狭苞紫菀、一年蓬和灯盏花花部的相似度较高。该研究有助于灯盏花药材的鉴别和利用，可为灯盏花药材的质量控制和开发提供参考。关键词：灯盏花；指纹图谱；不同药用部位；混淆品；鉴别中图分类号：文献标识码：文章编号：（），（，；，；，）：（，），（）（），：；灯盏花为菊科飞蓬属植物短葶飞蓬（）的干燥全草 ，又名灯盏细辛，为西南特色民族药之一。灯盏花用药历史悠久，在 滇南本草 晶珠本草 藏药志等文献均有记载。现代药理研究表明，灯盏花具有改善心脑血管缺血、抗炎、改善微循环、抑制血小板聚集、神经保护等药理活性 。近年来，由于野生资源匮乏，药农或民族医生常将形态相似及地理分布区重叠的近缘种混淆灯盏花采挖售卖或在临床使用。前期对云南、四川等地民间灯盏花使用情况及其混淆品进行调研与文献研究，发现目前混淆品主要有多舌飞蓬、展苞飞蓬、密毛紫菀、一年蓬等多种植物 。调研中发现，商品市场与临床应用的灯盏花药材规格较多，不仅有全草入药者，也有地上部分入药者，甚至出现以灯盏花乙素为主的专属性栽培药材；而藏医药体系常将多种飞蓬属和紫菀属植物不加区分以头状花序入药 ，其中包括灯盏花。这些问题的普遍存在，给灯盏花药材临床疗效和用药安全带来巨大隐患与挑战。中药指纹图谱基于对中药多成分协同作用认识及化学成分的系统研究，具有信息量大、专属性强、整体性等特点，被国内外广泛认可与使用 。近年来，有一些文献对灯盏花药材及其近缘种开展了指纹图谱研究 ，但多基于对全草的分析。为揭示灯盏花药材及其混淆品不同药用部位的差异，本研究采用 建立灯盏花质量评价的指纹图谱，并对正品与混淆品的全草、不同药用部位等进行比较研究，发现质量变化的内在规律及不同民族用药经验差异的内在物质基础，为灯盏花药材质量评价、产业发展、监督检验等提供理论依据。年 月云南化工 第 卷第 期 ，仪器与材料 仪器 超高效液相色谱仪、二极管阵列检测器（赛默飞世尔科技有限公司），型十万分之一电 子 天 平（赛 多 利 斯 科 学 仪 器 有 限 公 司），型超声清洗机（雅马拓科技贸易有限公司），超纯水机（法国威立雅水务公司）。材料野黄芩苷对照品（纯度：，批号：）购自中国食品药品检定研究院；灯盏花甲素对照品（纯度：，批号：）购自 化学品公司。甲醇、乙腈、甲酸等购自德国 公司。共收集灯盏花药材 批次，野外实地采集混淆品 批次，所有样品均经云南省食品药品监督检验研究院徐士奎副主任药师鉴定，实验材料见表 。所有样品粉碎，过 号筛，备用。表 灯盏花及其混淆品实验材料信息表编号物种名拉丁名来源 灯盏花 云南省红河哈尼族彝族自治州泸西县 灯盏花 云南省昆明市菊花村中药材市场 灯盏花 四川省成都市荷花池中药材市场 灯盏花 云南省昆明市菊花村中药材市场 灯盏花 云南省昆明市菊花村中药材市场 灯盏花 云南省昆明市菊花村中药材市场 灯盏花 云南省昆明市菊花村中药材市场 灯盏花 云南省昆明市菊花村中药材市场 灯盏花 贵州省毕节市纳雍县 灯盏花 云南省玉溪市 灯盏花 云南省玉溪市 灯盏花 云南省玉溪市 展苞飞蓬 四川省甘孜藏族自治州康定市三道桥 多舌飞蓬 四川省甘孜藏族自治州康定市塔公草原 狭苞紫菀 四川省甘孜藏族自治州石渠县虾扎镇表（续）编号物种名拉丁名来源一年蓬 云南省昆明市东川区汤丹镇 石生紫菀 云南省昆明市东川区汤丹镇 方法与结果 对照品溶液制备精密称定野黄芩苷、灯盏花甲素对照品适量，加入甲醇溶解，制备质量浓度为 、的对照品溶液。供试品溶液制备精密称取 的灯盏花药材粉末于锥形瓶中，加入 甲醇溶液，常温超声 ，过滤，于 容量瓶中定容，微孔滤膜过滤，即得。色谱条件采用 （，）色谱柱，以 甲酸水（）甲酸乙腈（）为流动相进行梯度洗脱（，；，；，；，；，；，；，；，；，；，；，；，均为体积分数），流速 为 ，柱 温 ，进 样 量 为 ，波长下检测。方法学考察）专属性试验。取空白溶液、混合对照品溶液、供试品溶液（）依次进样，进行专属性考察。结果显示，空白溶剂无干扰，对照品峰形好，分离度高，专属性良好。）精密度试验。取供试品溶液（），连续进样次，以野黄芩苷色谱峰（号峰）为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对保留面积。结果显示，各共有峰的相对保留时间和相对峰面积 值分别在 、以内，表明仪器精密度良好。）重复性试验。取灯盏花药材粉末（），平行制备 份供试品溶液，分别进样，以野黄芩苷色谱峰（号峰）为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对保留面积。结果显示，各共有峰的相对保留时间和相对峰面积 值分别在 、以内，表明该方法重复性良好。年 月云南化工 第 卷第 期 ，）稳定性试验。取供试品溶液（），于 、时分别进样，以野黄芩苷色谱峰（号峰）为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对保留面积。结果显示，各共有峰的相对保留时间和相对峰面积 值分别在 、以内，表明该方法稳定性良好。指纹图谱的建立及相似度评价）灯盏花指纹图谱建立。批栽培灯盏花药材按“”项方法制备供试品溶液，以 节色谱条件进样测定。将各批次灯盏花色谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（版），通过多点校正和自动峰匹配，建立共有峰指纹图谱，生成灯盏花对照图谱。以 为参照图谱，建立了灯盏花指纹图谱叠加图和对照图谱（图 、图 ）。共标定 个共有峰，通过与对照品图谱对照，确认 号峰为野黄芩苷，号峰为灯盏花甲素。批灯盏花药材相似度较高，均大于 ，说明灯盏花药材质量较稳定，其化学成分具有良好的一致性（表 ）。图 批灯盏花 指纹图谱叠加图 野黄芩苷 灯盏花甲素图 灯盏花 对照指纹图谱表 批灯盏花与对照图谱的相似度编号相似度编号相似度编号相似度 ）灯盏花不同药用部位指纹图谱建立。分别选择 批药材构建灯盏花不同药用部位（叶、茎、花）指纹图谱，茎、叶、花不同药用部位指纹图谱叠加图和对照图谱见图 。茎、叶、花分别标定 、个共有峰，将灯盏花不同药用部位对照品图谱与全草对照图谱比较，结果发现，茎、叶与全草对照图谱无明显差异，化学成分组成类似。花与全草对照图谱有一定差异，内的色谱峰可将花与其他药用部位有效区分。相似度结果显示，灯盏花药材茎、叶、花的相似度分别大于等于 、，表明同部位各批次间化学组成相似（表 ）。（）茎部指纹图谱叠加图（）叶部指纹图谱叠加图（）花部指纹图谱叠加图（）不同药用部位对照指纹图谱图 灯盏花不同药用部位 指纹图谱叠加图和对照指纹图谱 年 月云南化工 第 卷第 期 ，表 不同药用部位与对照图谱的相似度编号相似度编号相似度编号相似度 ）混淆品不同药用部位 指纹图谱研究。按“”项方法制备 种混淆品的供试品溶液，以 节色谱条件进样测定，采集的色谱数据与灯盏花对照图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（版），进行相似度评价。通过比较混淆品与灯盏花的对照图谱可知，狭苞紫菀、一年蓬、石生紫菀与灯盏花的整体峰形具有较大差异，展苞飞蓬、多舌飞蓬与灯盏花的整体峰形较为相似，但灯盏花存在其特有的色谱峰（图）。因此，该指纹图谱方法可对灯盏花及其混淆品加以鉴别。从相似度结果来看，展苞飞蓬、多舌飞蓬与灯盏花的相似度较高，多舌飞蓬、展苞飞蓬、狭苞紫菀、一年蓬和灯盏花花部的相似度较高（表 ），这在一定程度上解释了在藏医药体系中多种飞蓬属与紫菀属植物混用的情况（以头状花序入药）。：灯盏花；：多舌飞蓬；：展苞飞蓬；：狭苞紫菀；：一年蓬；：石生紫菀。图 混淆品不同药用部位 指纹图谱表 混淆品与灯盏花对照图谱相似度分析物种全草茎叶花多舌飞蓬 展苞飞蓬 狭苞紫菀 一年蓬 石生紫菀 讨论试验比较了流动相水 乙腈中不同甲酸体积分数（、）、不 同 流 速（、）、不 同 检 测 波 长（、）下各色谱峰的峰形、峰数、响应值和分离度，结果表明，以 甲酸水 甲酸乙腈为流动相，在 的流速和 波长下进行分析所得色谱峰的整体分离效果和峰形较佳。通过比较不同的提取方法（冷 浸 、加 热 回 流 、常 温 超 声 ）、不同提取时间（超声 、）、不同提取溶剂（甲醇、甲醇、甲醇、甲醇、甲醇、甲醇）对提取效率和提取效果的影响，结果表明，以 甲醇、常温超声 的提取效率和效果较佳。批灯盏花 指纹图谱共标定 个共有峰，相似度均大于 ，可知其药材质量较为稳定。该方法可用于灯盏花药材质量控制。通过对不同药用部位对照图谱比较，发现茎、叶与灯盏花全草对照图谱无明显差异，化学成分组成类似，但与花部对照图谱差异较为显著。建立的指纹图谱通过比较特征色谱峰，可有效鉴别灯盏花及其混淆品。展苞飞蓬、多舌飞蓬的整体峰形与灯盏花较为相似，且相似度较高。与肖琳婧等 研究结果不同，说明不同产地、生长环境、采收时间等因素对混淆品质量影响较大，应增加样本数量、充分考虑不同因素对混淆品质量的影响，才能全面评估混淆品的利用价值。多舌飞蓬、展苞飞蓬、狭苞紫菀、一年蓬与灯盏花药材花部相似度较高，化学成分较为相近，揭示了藏医药体系中多种飞蓬属与紫菀属植物以头状花序入药混用的物质基础。本研究运用指纹图谱对灯盏花药材和混淆品化学成分组成进行分析，并比较不同药用部位化学成分差异，可为灯盏花药材质量控制、鉴别和使用提供 年 月云南化工 第 卷第 期 ，参考。参考文献：国家药典委员会 中华人民共和国药典：一部 北京：中国医药科技出版社，：，（）：郭欣，林珊，吴丽明，等 灯盏细辛化学成分及药理作用研究进展 中成药，（）：高丽，戚育芳，李学芳 灯盏花及其混淆品种的鉴别 云南中医中药杂志，（）：李学芳，张洁，张彬若，等 灯盏细辛及伪品密毛紫菀的生药学鉴别 广 州 中 医 药 大 学 学 报，（）：云南省药物研究所 云南重要天然药物 昆明：云南科技出版社，：马小兵，吕露阳，王甜甜，等 多基原藏药材“美多罗米”中质量标志物的初步预测及分析 中草药，（）：马小兵，张英秀，苏学燕，等 青藏高原产 种紫菀属植物的生药学研究 华西药学杂志，（）：，“”，（）：李强，杜思邈，张忠亮，等 中药指纹图谱技术进展及未来发展方向展望 中草药，（）：肖琳婧，刘莹莹，赵禹，等 指纹图谱结合化学计量学的不同产地灯盏花药材和近缘种样品的质量评价 中草药，（）：张洪，武正才，黄春球，等 市售灯盏花药材及其提取物 指纹图谱研究 中国民族民间医药，（）：江冬英，胡巧云 不同产地灯盏花成分指纹图谱研究 亚太传统医药，（）：陆毅，张睿懿，段银，等 灯盏花 指纹图谱的建立及 个成分的含量测定 中药材，（）：收稿日期：基 金 项 目：云 南 省 药 品 监 管 科 学 研 究 计 划 项 目（）；“兴滇英才支持计划”项目经费支持；中医联合专项 面上项目（）；云南省高层次中医药人才培养对象“彝医学”学科带头人培养项目经费支持。作者简介：晏润文（），男，硕士，主管药师，主要从事药品化妆品质量标准研究。通讯作者：徐士奎（），男，硕士，副主任药师，主要从事 中 药、民 族 药 质 量 标 准 研 究。：（上接第 页）结论根据研究，得到如下结论：）、的质量分数分别为 、，对应平均质 量 分 数 分 别 为 、和 。）煤矸石中的重金属随着边坡海拔降低方向、下风向、山积水沟渠方向均发生有规律迁移。在垂直方向上，重金属也呈向下迁移趋势。）根据地质积累指数（）对重金属污染进行判定发现，和 无污染，轻度污染，为轻度污染到中强度污染，有的点位 达到重度污染和非常严重污染程度（，）。参考文献：谭敏 典型高潜水位煤矿区重金属时空分布特征及复垦适宜性研究 北京：中国矿业大学，姚逸，邹荣灿，邓秋婷，等 六盘水响水镇煤矸石修复场木豆重金属分布特征与生态风险评价 环境影响评价，（）：邢雅珍 淮南市土壤重金属 、的分布特征及其与有机碳的关系 淮南：安徽理工大学，方良成，郑恒，刘少敏 煤矸石充填复垦区对周围土壤重金属影响特征 当代化工研究，（）：曹云全，张双圣，刘汉湖，等 煤矸石中重金属动态淋滤和静态浸泡溶出特征研究 河北工程大学学报，（）：张锂，韩国才 黄土高原煤矿区煤矸石中重金属对土壤污染的研究 煤炭学报，（）：韩波 煤矸石中重金属对农田生态系统污染及其在环境中迁移的研究 扬州：扬州大学，张明亮，王海霞 煤矿区矸石山周边土壤重金属污染特征与规律 水土保持学报，（）：李娟 高硫煤矸石废弃地重金属污染特征及其迁移规律研究 北京：中国矿业大学，（）：收稿日期：基金项目：贵州省高等学校工程研究中心（黔教技 ）；青年科技人才成长项目（黔教合 字 ）。作者简介：石开仪（），男，博士，教授，从事矿产资源开发与综合利用方面研究。通讯作者：刘品祯。：