口服制剂防治鸭浆膜炎的临床效果.pdf

养殖与饲料2 0 2 4 年第2 期口服制剂防治鸭浆膜炎的临床效果高航，柴贝贝，张春杰，张丽媛郑州赛科药业科技有限公司，郑州4 5 0 0 0 0摘要为改善鸭浆膜炎对肉鸭养殖业的危害，选取某养鸭场6 周龄的发病小鸭（品种为樱桃谷鸭）进行试验。该场在2 周内出现大量鸭下痫、瘫痪等临床症状，解剖病鸭发现纤维素性心包炎、肝周炎、关节炎等病理变化。经解剖和实验室检测确诊为鸭疫里默氏杆菌病，根据检测结果笔者所在实验室快速制备了口服制剂进行紧急治疗，并加强饲养管理，该场剩余鸭苗顺利存活。在临床使用时，可在第1 天每只鸭灌服或饮水5 0 0 L，在第2 1 天加强免疫1 次。关键词鸭浆膜炎；口服制剂；抗体；应急免疫；临床效果鸭疫里默氏杆菌病是由鸭疫里默氏杆菌(Rie-merella anatipestifer)引起的1 种接触性传染性疾病,又称为鸭传染性浆膜炎、鸭疫综合症等。多发于1 6 周龄的小鸭，发病率可达9 0%，若不及时控制,死亡率可达8 0%。该病的主要症状有急性或慢性败血症、鼻分泌物增多、咳喘、下痫、头颈震颤，少数慢性病例出现头颈歪斜等症状，会形成较明显的“泪痕”，且大多生长缓慢形成“僵鸭”2 。剖检主要有纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、关节炎等症状，常引起小鸭的大批发病和死亡，目前已成为危害肉鸭养殖业的一种最常见细菌病 3 ,并且不仅感染鸭类,鹅、火鸡等禽类也可感染发病 。该病的控制难点在于鸭疫里默氏杆菌的血清型较多，目前较认同的有2 5 种，不同时期、不同地区、不同场址的主要流行血清型都有所不同，并且在同一鸭场,甚至是同一批鸭群也可能同时存在多个血清型，且不同血清型之间的交叉保护性较低，而且难以净化,较为有效的方法是分离流行菌株进行疫苗研制,疫苗的抗原血清型与养殖中流行菌株的血清型最大程度吻合,才能保证免疫效果最佳 5 。收稿日期：2 0 2 3-0 6-2 5作者简介：高航，女，1 9 9 3 年生，硕士，初级兽医师。防治该病最根本的是做好预防工作,加强鸭场的饲养管理，改善卫生条件，减少鸭群应激，建立完善的防疫和消毒制度 ;在上述情况满足的条件下合理进行疫苗免疫，合理用药，综合防治，有效减少鸭群的发病和死亡 7 。河南周口的鸭场在2 0 2 3 年3 4 月阶段性暴发该病，发病率3 3.4 3%，死亡率1 1.1 2%，瘫痪率23.57%,损失严重，通过临床症状和剖检症状初步判定为鸭疫里默氏杆菌病，然后进行实验室诊断，确诊为鸭疫里默氏杆菌引起的鸭疫里默氏杆菌病。通过对发病鸭群进行中西药结合治疗，延缓了病情发展，同时采集病料进行鸭浆膜炎口服制剂的制备，通过灌服或饮水饲喂后，疾病得到明显地控制，死亡率和瘫率显著下降。1材料与方法1.1材料1)样品来源：河南周口某鸭场发病死亡鸭3 只(34周龄)。2)试验鸭来源：河南周口某鸭场樱桃谷鸭，4 周.88龄、6 周龄SPF雏鸭各9 只，2 周龄SPF雏鸭3 9 只。3)试剂与培养基：无菌蒸馏水、无菌生理盐水、甲醛、胎牛血清、胰蛋白大豆肉汤(TSB）、胰蛋白陈大豆琼脂（TSA）、市售蜂胶、9 5%乙醇。4)仪器与工具：MD30-B显微镜（江南）、WJ-160A二氧化碳恒温培养箱（上海诵诚）、XFS-280高压灭菌锅（浙江新丰）、低温离心机（Sigma）S HA-C恒温摇床（常州普天司）、锥形瓶、2 5 0 mL和5 0 0 mL灭菌疫苗瓶、移液器、剪刀、镊子。2.2 方法1)剖检：将病鸭置于无菌托盘，腹部向上，使用灭菌后的剪刀剖开腹腔,检查腹腔与内脏情况。2)菌株纯化：将3 株保藏菌株进行活化，分别抽取2 0 0 L保藏菌液加人含5%胎牛血清的TSB中，37的恒温摇床培养2 4h后，接种于含有5%胎牛血清的TSA,并于3 7 二氧化碳恒温培养箱中培养2 4h，观察是否有污染，并挑取单个菌落镜检将挑取的单个菌落在3 7 的恒温摇床中培养48 h，进行扩大培养后备用。3)蜂胶提纯：将市售蜂胶放置4储存,用时取出，及时粉碎后过筛，按照重量比1:2 加入9 5%乙醇,室温浸泡2 4 48 h,浸泡期间可以超声,增加溶解，浸泡后48 0 0 0 r/min离心取上清，用无菌纱布过滤，得到清澈透明的纯净蜂胶浸液，4)口服制剂的制备：将扩大培养后的3 种菌液培养至浓度为10 cfu/mL时加人0.2%甲醛进行灭活，继续3 7 恒温培养12 h后取10 0 L涂板鉴定菌液是否完全灭活。将灭活后的菌液进行离心，留下菌体沉淀备用。将所有菌体用无菌生理盐水重悬后混匀，然后缓慢加人已处理好的蜂胶液，边加边混匀，使蜂胶液终浓度为10 mg/mL,最后根据需求量补足无菌生理盐水。5)口服制剂的效果验证：无菌检测：用移液器吸取2 5 0 L口服制剂，分别接种于TSA,37恒温培养12 h。紧急接种：将制备好的口服制剂按照每只灌服或饮水3 0 0 L应用在鸭场,同时增加鸭群日粮中的蛋白质和维生素含量，可适量配合黄芪多糖8 ,控制饮水量。养殖与饲料2 0 2 4年第2 期安全性试验：分别取2、4、6 周龄SPF雏鸭各9只，分3 组，每组3 只，一共9 组，按照低、中、高剂量进行灌服，即：第1、2、3 组处理分别在2 周龄饲喂200、5 0 0、10 0 0 L,第4、5、6 组处理分别在4周龄饲喂2 0 0、5 0 0、10 0 0 L,第7、8、9 组处理分别在6 周龄饲喂2 0 0、5 0 0、10 0 0 L。观察饲喂后0.5、6.0、24.0h,是否有鸭只出现不良反应，如呕吐、拉稀、瘫痪、死亡等情况。免疫试验：选取6 0 只2 周龄SPF维鸭分为5组，每组12 只，分组名称为第1、2、3、4、5 组,第1组处理为生理盐水，第2 组为市售鸭浆膜炎产品组，按照说明书要求每只肌注2 0 0 L，第3、4、5 组均为口服制剂，剂量分别为2 0 0、5 0 0、10 0 0 L。免疫当天为第0 天，于免疫后7、14、2 4d鸭跖骨内侧静脉采血,分离血清检测抗体。攻毒试验：将已免疫过的5 组雏鸭每组随机选取6 只进行攻毒试验，每只肌肉注射2 0 0 L,观察鸭只是否出现瘫痪、下痢、死亡等症状，并计算保护率。保护率=(对照组发病率一接种组发病率)/对照组发病率。2丝结果与分析2.1检解剖发现纤维素性心包炎、肝周炎、关节炎症状,见图1。2.2菌株纯化镜检没有发现杂菌污染，见图2。图1肝周炎病变养殖与饲料2 0 2 4年第2 期图2 革兰氏阴性菌（10 10 0)2.3蜂胶提纯称取5 0 0 g市售蜂胶，加1L95%乙醇，2 5 浸泡48 h后，48 0 0 0 r/min离心取上清，用无菌纱布过滤，最终得到0.5 g/mL的清澈透明蜂胶液800mL放置4备用。2.4口服制剂制备本次制备了10 0 g湿菌体,采用5 0 0 mL生理盐免疫时间第1组第7 天0.0830.061c第14天0.0880.052c第2 1天0.0950.047d注：同行标注的不同小写字母表示差异显著（P0.05)。5)攻毒试验:在9 6 h内,第2 组和第3 组处理的保护率为6 0.1%，第4组和第5 组处理的保护率为10 0%。3 讨 论鸭疫里默氏杆菌病对肉鸭行业的危害很大，在预防和治疗上虽然使用抗菌药物有一定的效果,但抗菌药物的长期使用，会导致鸭疫里默氏杆菌的耐药性增加,治疗效果不明显。因此,通过增强机体对病菌的抵抗力，降低药物使用量，是预防鸭疫里默氏杆菌病及降低发病率的重要措施之一 10 。本次制备的口服制剂选择的菌株均是从该养殖场分离的，针对性强，可以改善普通疫苗血清型不同导89水重悬后，缓慢加人已处理好的蜂胶液，使蜂胶液终质量浓度为10 mg/mL，边加边混匀，最后加人无菌生理盐水，补足至40 L。2.5口服制剂效果验证1)灭活检测：将涂布的TSA平板放人培养箱37培养12 h后无菌生长，灭活检测合格。2)安全性试验：饲喂后鸭只没有出现不良反应，偶有应激系抓取导致，待平静后恢复正常状态。3)紧急接种：应用该口服液后3 d,鸭群临床无新增死亡鸭，发病率降低至7.3%,说明该口服制剂产生了较好的应急免疫作用。4)免疫试验：在免疫后7、14、2 1d跖骨内侧静脉采血，分离血清检测抗体,结果采用SPASS22.0分析。由表1可知：该口服制剂中剂量组在第14天就可以达到较高的抗体水平，高剂量组在第2 1天仍有较高的抗体水平，但考虑到成本问题，临床使用时，可以在第1天使用中剂量，即每只鸭灌服或饮水500L，在第2 1天加强免疫1次。表1免疫后7、14、2 1d抗体含量第2 组5.1561.306b16.9281.644b18.0452.199cng/L第3 组第4组5.4971.482ab6.2181.100ab16.9592.226b25.1332.036a19.8432.528c24.2132.271b致的保护率低的问题，更好地发挥应急免疫作用，且蜂胶免疫佐剂是1种天然产物，有研究表明，蜂胶本身无明显抗原性和过敏性，毒副作用较小叫。作为1种具有广谱生物活性的物质，不仅能够提高机体的特异性免疫,增强巨噬细胞的吞噬能力，而且还能增强机体的非特异性免疫，促进抗体的产生，应用蜂胶配合抗原进人机体可以增加抗体产量和保护率12 13 1,将蜂胶与抗原按比例混合接种于机体后，可以增强补体的功能,产生较多的抗体,提升血清抗体水平，是天然的免疫增效佐剂，并且具有抑菌性和更高的安全性14。但是市售的鸭浆膜炎产品多为注射剂，易造成鸭只的应激反应，并且鸭疫里默氏杆菌血清型较多,市售的注射剂不一定符合第5 组6.8401.223a26.9822.803a26.7482.273a90本场流行菌株，可能出现疫苗保护率低的问题 5 。本试验结果表明,该口服制剂中剂量组在第14天可以达到较高的抗体水平,高剂量组在第2 1天仍有较高的抗体水平，能够起到快速治疗和应急免疫的辅助作用。该口服制剂是针对个别养殖场的病原血清型制备，在一定程度上可以起到很好的应急免疫作用,但也存在一定的应用范围制约,因此应规范应用，不随意扩大应用范围。参考文献1 顾玉美，侯军，钟万金.鸭疫里默氏杆菌流行菌株的血清型分析与最小感染量测试 J.中国禽业导刊，2 0 2 3,40（3)：6 0-6 3.2白红英,刘洋洋,曹嫚嫚.一例鸭疫里默氏杆菌病的诊断与防治J.吉林畜牧兽医,2 0 2 3,44(1):5 6-5 7.3】孙宏文.肉鸭场鸭疫里默氏杆菌病的防控建议 J.中国禽业导刊,2 0 2 2,3 9(12):5 7-5 8.4】李春来,王利丽,刘勃兴,等.一株鹅源鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定 J.中国动物保健，2 0 2 2,2 4(1)：12 3-12 5.5】任锐,吕雪峰,孟宪奎.兽用疫苗佐剂的研究及应用现状 J.吉林畜牧兽医，2 0 11,3 2(5):3 7-3 8.6冯雅婷,朱敏,刘丹,等.鸭疫里默氏杆菌流行菌株的分离鉴定养殖与饲料2 0 2 4年第2 期及生物学特性 J.微生物学通报，2 0 2 2,49(11)：47 7 8-47 8 5.7黄宁.鸭疫里默氏杆菌的研究进展 J.甘肃畜牧兽医,2 0 2 1,5 1(7):14-17,21.8 金尔光，陈洁，钱运国，等.黄芪多糖佐剂对I型鸭疫里氏杆菌灭活疫苗的作用研究 J.中国畜牧兽医，2 0 0 9,6（3)：15 1-15 3.9邓舜洲，何后军，温庆琪，等.鸭疫里氏杆菌（2 型)灭活疫苗的研制 J.江西农业大学学报（自然科学），2 0 0 2（5）：5 6 9-5 7 3.10关椿久,朱寅初,郑雪,等.鸭疫里默氏杆菌耐药现状及耐药机制研究进展 J.中国家禽，2 0 2 2,44(2)：8 7-9 5.11 MAMASHLI F,MERATAN A A,GHASEMI A,et al.Neuroprotec-tive effect of propolis polyphenol-based nanosheets in cellular 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