降糖舒心方对糖尿病合并慢性心力衰竭大鼠心肌细胞自噬的影响.pdf

降糖舒心方对糖尿病合并慢性心力衰竭大鼠心肌细胞自噬的影响符显昭陈佳俊蒋晓凤申亚亚覃金艳丘海先闭红函(右江民族医学院附属医院广西 百色)摘要 目目的的 观察降糖舒心方对糖尿病合并慢性心力衰竭大鼠心功能、心肌重构及蛋白激酶样内质网应激酶 真核翻译启始因子 微管相关蛋白 轻链()通路的影响揭示其治疗糖尿病合并慢性心力衰竭的机制 方方法法 将 只雄性 大鼠随机分为假手术组、模型组、西药组、降糖舒心低剂量组、降糖舒心高剂量组每组 只 假手术组大鼠普通饲料喂养腹腔注射柠檬酸缓冲液其余组大鼠单次腹腔注射 /链脲佐菌素 高脂饲料喂养 腹主动脉缩窄方法建立糖尿病合并慢性心力衰竭模型 造模成功后降糖舒心低剂量组给予浓度为的降糖舒心方药液灌胃降糖舒心高剂量组给予浓度为的降糖舒心方药液灌胃西药组给予含格列喹酮和贝那普利的蒸馏水稀释液灌胃假手术组和模型组给予蒸馏水灌胃均 次/连续灌胃 个月灌胃期间各造模大鼠继续高脂饲料喂养 灌胃结束后超声检测记录左室舒张末期内径()、左室收缩末期内径()、短轴缩短率()和射血分数()取血 检测糖化血红蛋白()、同型半胱氨酸()和血管紧张素()水平 染色观察心肌胶原纤维增生情况透射电镜观察心肌脉细胞自噬及超微结构 法检测心肌组织中、/同源蛋白()表达量 法检测心肌组织中组织蛋白酶()、微管相关蛋白 轻链 蛋白()、微管相关蛋白 轻链 蛋白()表达情况并计算/比值 结结果果 与假手术组比较模型组大鼠、均明显增加(均.)和 均明显降低(均.)及血清、水平均明显升高(均.)与模型组比较各药物组大鼠、均明显缩短(均.)和 均明显升高(均.)、水平和心肌胶原纤维 值均明显降低(均 )且降糖舒心高剂量组各指标变化更明显 染色显示模型组大鼠心肌胶原纤维 值明显高于假手术组(.)各药物组大鼠心肌胶原纤维 值均明显低于模型组(均 )透射电镜显示模型组大鼠心肌细胞自噬小体增多细胞胞内有空泡线粒体肿胀与模型组比较各药物组大鼠心肌细胞自噬及纤维化程度减轻其中降糖舒心高剂量组改善更明显 模型组大鼠心肌组织中、相对表达量和 、蛋白相对表达量及/比值均明显高于假手术组(均.)各药物组大鼠心肌组织中、相对表达量和 、蛋白相对表达量及/比值均明显低于模型组(均.)结结论论 降糖舒心方可通过抑制糖尿病合并慢性心力衰竭大鼠心肌细胞内质网应激 自噬的过度激活降低自噬效应改善糖尿病心肌重构防止心力衰竭进展关键词 糖尿病心肌病变降糖舒心方内质网应激自噬:./.中图分类号 文献标识码 文章编号 ()作者简介 符显昭男博士研究员研究方向为糖尿病心血管疾病并发症基金项目 国家自然科学基金地区项目()现代中西医结合杂志 ()():()()./.()()()()()()()/()()/.(.)(.)(.)()(.)(.).(.)(.)./()/(.).:慢性心力衰竭是心肌重构发展的结果而心肌重构是多种心脏疾病慢性发展的病理变化 当心肌组织受缺氧缺血、衰老、血压升高等因素影响时心肌细胞损伤、死亡丢失而作为应激之后的反应和损伤修复取而代之的则是心肌纤维化的发生进而导致心室扩大及心力衰竭 目前研究发现细胞死亡丢失方式除了坏死和凋亡外还存在一种因细胞过度自噬导致的死亡即自噬性细胞死亡也称型程序性死亡 正常情况下自噬可以降解变性的蛋白质和受损的细胞器给心肌提供氨基酸及游离现代中西医结合杂志 ()脂肪酸保护心肌细胞但自噬被过度激活则损伤心肌产生负面影响因此自噬在心脏疾病发展中具有双重作用如自噬性细胞死亡增加则心肌细胞减少并且由于心肌细胞不能再生最终引发心力衰竭 自噬的适度激活与心肌内质网应激形成了机体内适应性、保护性的交互作用而内质网应激过度激活可介导过度自噬导致心肌细胞自噬性死亡增加 糖尿病合并慢性心力衰竭发病隐匿治疗预后差 中医理论认为气阴两虚、瘀毒内蕴为糖尿病心肌病变的主要病机前期临床研究发现具有滋阴益气、活血解毒作用的降糖舒心方能纠正糖脂代谢紊乱减轻胰岛素抵抗调节心肌能量代谢抑制心力衰竭激活的肾素 血管紧张素 醛固酮系统()对心脏的损害缩小左室舒张期末容积降低心室充盈压改善心肌重构提高糖尿病合并慢性心力衰竭患者心功能 本研究通过建立糖尿病合并慢性心力衰竭大鼠模型基于蛋白激酶样内质网应激酶 真核翻译启始因子 微管相关蛋白轻链()通路探讨了降糖舒心方干预糖尿病合并慢性心力衰竭心肌重构的分子机制 实验材料与方法 动物 雄性 大鼠 只体重 购于广西医科大学实验动物中心合格证号:(桂)大鼠饲养于右江民族医学院动物实验中心饲养条件:室温 相对湿度 适应性普通饲料(江苏省协同生物工程有限公司)喂养 本实验已通过右江民族医学院实验动物伦理委员会审查()药物降糖舒心方组方:人参、黄芪、麦冬 、生地 、山药 、山茱萸 、大黄 、黄连 、丹参 、五味子 药材购自右江民族医学院附属医院用不锈钢桶水煎水煎液分别按高剂量浓缩至 和低剂量浓缩至 冰箱贮存备用 格列喹酮(天津金世制药有限公司国药准字)贝那普利(上海新亚药业闵行有限公司国药准字)主要仪器与试剂 型荧光全自动定量 仪(北京栎海生物科技有限公司)型光学显微镜(上海永科光学仪器有限公司)型全自动石蜡切片机(上海碧云天生物技术有限公司)型高速低温离心机(南京贝登电子商务有限公司)型组织脱水机(德国徕卡公司)型高压蒸汽灭菌器(北京莱博瑞杰科技有限公司)型制冰机(常熟市雪科电器有限公司)型超净工作台(浙江孚夏医疗科技有限公司)型血糖仪(北京怡成生物电子技术有限公司)链脲佐菌素(货号:北京酷来搏科技有限公司)糖 化 血 红 蛋 白()试 剂 盒(货 号:上海抚生实业有限公司)、同型半胱氨酸()试剂盒(货号:上海抚生实业有限公司)、血管紧张素 ()试剂盒(货号:上海抚生实业有限公司)抗体(货号:公司)、微管相关蛋白 轻链 蛋白抗体()(货号:公司)、微管相关蛋白 轻链 蛋白抗体(货号:公司)实验方法 将大鼠随机分为假手术组、模型组、西药组、降糖舒心低剂量组、降糖舒心高剂量组每组 只 假手术组大鼠腹腔内注射柠檬酸缓冲液普通饲料喂养 其余组大鼠单次性腹腔注射 /(用柠檬酸缓冲液配置为浓度 /)后尾静脉采血用血糖试纸检测空腹血糖连续 次空腹血糖./认为糖尿病造模成功随后高脂饲料(含普通饲料.、猪油、胆固醇.、蛋黄粉、猪胆盐.江苏省协同生物工程有限公司)喂养 个月 然后参考文献采用腹主动脉缩窄方法对各糖尿病造模大鼠进行慢性心力衰竭造模:大鼠喂养 个月后禁食 腹腔注射 水合氯醛 /麻醉后打开腹腔于双侧肾动脉上方钝性分离腹主动脉在腹主动脉旁置入 号针用 丝线穿过分离出的腹主动脉和 号针慢慢结扎后拔针缩窄腹主动脉 缝合腹腔术后抗感染治疗继续高脂饲料饲养和饮水 假手术组大鼠对腹主动脉只穿线不结扎普通喂养 术后 麻醉备皮大鼠取仰卧位用 高分辨率小动物超声系统进行心脏超声检测依据美国超声心动学会制定的标准大鼠射血分数()为心力衰竭造模成功 降糖舒心低剂量组给予浓度为 的降糖舒心方药液灌胃降糖舒心高剂量组给予浓度为 的降糖舒心方药液灌胃西药组给予含格列喹酮./和贝那普利./(按成人临床用药剂量的.倍计算)的蒸馏水稀释液灌胃假手术组和模型组给予蒸馏水灌胃灌胃量均为 /均 次/连现代中西医结合杂志 ()续灌胃 个月灌胃期间各造模大鼠继续高脂饲料喂养 检测指标及方法 心功能指标 灌药 个月后采用 异氟烷让大鼠吸入麻醉后仰卧固定用探头频率为 的 小动物超声仪进行超声心动图检查记录左室舒张末期内径()、左室收缩末期内径()、短轴缩短率()和 取 次平均值 及血清 和 水平采用 法测定实验步骤按照试剂盒说明书进行 心肌组织 染色情况处死大鼠在冰上迅速取心脏取一部分心肌组织用 多聚甲醛固定经石蜡包埋切 薄片依次浸入二甲苯 无水乙醇 梯度乙醇各 蒸馏水洗 氏铁苏木素染 自来水洗 的盐酸酒精分化自来水冲洗返蓝丽春红液染色 蒸馏水漂洗磷钼酸水溶液处理 后用苯胺蓝液复染 浸入 冰醋酸 依次经 酒精 酒精 无水乙醇 无水乙醇 二甲苯 二甲苯 脱水透明晾干后中性树胶封片在显微镜下选取拍照 个不重叠视野用 软件计算胶原纤维灰度值 心肌细胞自噬及超微结构取经 的戊二醛溶液处理的心肌组织用 锇酸溶液固定 吸出固定液用./.漂洗样品 次每次 然后用梯度浓度()乙醇溶液对心肌组织样品进行脱水纯丙酮处理 用 环氧树脂包埋心肌组织制成超薄切片()用醋酸双氧铀和柠檬酸铅溶液双重染色 透射电镜观察(加速电压 放大倍率)调节物镜聚焦旋钮至图片清晰拍照 心肌组织中、和/同源蛋白()表达情况采用 法检测:从 冰箱取出液氮冷冻心肌组织加入 裂解液裂解后依次加入氯仿、异丙醇、乙醇、无水乙醇、水溶解 然后根据反转录试剂盒说明书要求进行操作:反转录为 按照 试剂盒说明将 扩增为目的基因在 仪上进行 反应反应条件:变性 次循环 利用溶解曲线检测引物的特异性记录达到所设定的阈值所经历的循环数即 值采用 计算表达量以假手术组表达量为 比值为相对表达量 内参基因和目的基因引物由康为世纪生物科技有限公司设计合成目的基因:的上游引物序列为 下 游 引 物 序 列 为 扩增产物长度为 的上游引物序列为 下游引物序列为 扩增产物长度为 的上游引物序列为 下游引物序列为 扩增产物长度为 内参基因 上游引物序列为 下游引物序列为 扩增产物长度为 心肌组织中 、蛋白表达情况采用 法检测:从 冰箱取出心肌组织用剪刀剪碎加入 冷 在组织匀浆机中进行匀浆冰上静置裂解 将匀浆液放入离心管中 /离心 取上清液移至预冷的离心管用 试剂盒检测其浓度 用 电泳和转膜后把 膜放入孵育盒中加入 脱脂奶粉的封闭液摇床振荡.结束封闭后用 洗膜 次将膜放入含一抗稀释液(按抗体说明稀释)的孵育盒 中 摇床振荡孵育过夜第天室温振荡 吸弃一抗 洗 次用 脱脂奶粉封闭液稀释二抗室温摇床振荡 反应结束后回收二抗然后用 洗膜 次 在 膜滴加发光试剂混合液充分接触反应 使用 成像仪拍照使用 软件测定灰度值 统计学方法数据处理应用 .统计软件进行计量资料均符合正态分布用 表示组间比较采用单因素方差分析()两两比较采用 检验.为差异有统计学意义 结 果 各组大鼠心功能指标比较 与假手术组比较模型组大鼠、均明显增加(均 现代中西医结合杂志 ()和 均明显降低(均.)与模型组比较各药物组大鼠、均明显缩短(均.)和 均明显升高(均 )见表 表 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠心功能指标比较()组别只数/假手术组.模型组.西药组.降糖舒心低剂量组.降糖舒心高剂量组.注:与假手术组比较.与模型组比较.各组大鼠 及血清、水平比较模型组大鼠 及血清、水平均明显高于假手术组(均.)各药物组大鼠 及血清、水平均明显低于模型组(均.)但各指标均明显低于西药组(均.)见表 各组大鼠心肌组织 染色情况及心肌胶原纤维 值比较 心肌胶原纤维被染成蓝色心肌纤维被染成红色 假手术组大鼠心肌组织中无胶原纤维增生心肌胶原纤维 值为.模型组大鼠心肌胶原纤维大量分布在心肌纤维 之 间 呈 扩 散 状 态 心 肌 胶 原 纤 维 值 为 .明显高于假手术组(.)表 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠 及血清、水平比较()组别只数/(/)/(/)假手术组.模型组.西药组.降糖舒心低剂量组.降糖舒心高剂量组.注:与假手术组比较.与模型组比较 .与西药组比较.各药物组大鼠心肌胶原纤维增生较少西药组、降糖舒心低剂量组、降糖舒心高剂量组大鼠心肌胶原纤维 值分别为 .均明显低于模型组(均 .)且降糖舒心高剂量组和降糖舒心低剂量组均明显低于西药组(均.)见图 图 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠心肌组织心肌纤维和胶原纤维 染色表现()各组大鼠心肌细胞自噬及心肌组织超微结构假手术组大鼠心肌细胞形态、大小正常细胞连接紧密、排列整齐胞内可见含量不等的内质网和线粒体等细胞器间质纤维无增生细胞自噬小体较少模现代中西医结合杂志 ()型组大鼠心肌细胞排列紊乱横纹不清晰间质纤维增生严重细胞自噬小体增多细胞外形不规则突向腔面或脱落细胞间连接扩大胞内有空泡线粒体肿胀呈空泡样改变与模型组相比各药物组大鼠心肌细胞自噬及纤维化程度减轻其中降糖舒心高剂量组改善更明显 见图 图 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠心肌细胞自噬及心肌组织超微结构(箭头为自噬体)各组大鼠心肌组织中、相对表达量比较模型组大鼠心肌组织中、和 相对表达量均明显高于假手术组(均.)各药物组大鼠心肌组织中、和 相对表达量均明显低于模型组(均.)但各指标均明显低于西药组(均.)见表 表 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠心肌组织中、和 相对表达量比较()组别只数假手术组.模型组.西药组.降糖舒心低剂量组.降糖舒心高剂量组.注:与假手术组比较.与模型组比较 .与西药组比较.各组大鼠心肌组织中 、蛋白表达情况及/比值比较模型组大鼠心肌组织中 、蛋白相对表达量及/比值均明显高于假手术组(均.)各药物组大鼠心肌组织中 、蛋白相对表达量及/比值均明显低于模型组(均 .)降糖舒心低、高剂量组大鼠 蛋白相对表达量及/比值均明显低于西药组(均.)见图 和表 图 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠心肌组织中、蛋白表达电泳图 讨 论自噬是由溶酶体介导的降解细胞内蛋白质和细胞器的过程该过程可维持细胞中间代谢清除细胞内受损的细胞或者细胞器提高细胞的生存能力 内质网是真核细胞中的一种细胞器主要参与细胞内蛋白质折叠、运输和翻译后修饰为新生多肽提供适宜的加工环境通过分子伴侣和翻译后修现代中西医结合杂志 ()表 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠心肌组织中、蛋白相对表达量及/比值比较()组别只数/假手术组.模型组.西药组.降糖舒心低剂量组.降糖舒心高剂量组.注:与假手术组比较.与模型组比较.与西药组比较.饰引导多肽合成二硫键最终形成稳定的三级结构形成正确折叠的分泌蛋白 当细胞内环境紊乱影响内质网中蛋白质折叠的效率导致错误折叠蛋白累积就会引发内质网应激诱发未折叠蛋白反应()正常情况下积累的未折叠或错误折叠蛋白超过内质网处理能力时自噬就会被诱导激活作为次级反应降解累积的非折叠蛋白以减轻内质网的负荷但持久且过度发生内质网应激时自噬的保护作用机制将逐渐转变为一种持续性、破坏性的作用 内质网应激发生后诱发 上调葡萄糖调节蛋白 ()激活下游、活化转录因子()和肌醇需求酶 ()三条信号传导通路以协助清除错误折叠蛋白其中 是位于内质网膜上具有丝氨酸/苏氨酸结构域的型跨膜蛋白是内质网应激中重要的信号因子其下游的信号分子是 /信号通路是内质网应激/中一条特殊信号传导途径也是介导内质网应激与自噬交互作用的重要调控因子生理状态下 与 在内质网膜上形成稳定复合物 内质网应激负担过重 时 与 解离失去束缚的 则磷酸化下游信号分子 磷酸化后 通过多种信号分子诱导自噬糖尿病患者糖代谢正常途径受损蛋白激酶 途径、晚期糖基化终末产物途径等过度激活使活性氧簇蓄积影响蛋白质的空间结构折叠导致未折叠蛋白蓄积诱发内质网应激影响内质网的稳态心肌细胞是代谢旺盛的细胞需要内质网(肌浆网)处理大量的能量物质和细胞成分易受糖脂代谢紊乱影响并且在心力衰竭发展过程中激活了 系统和交感神经系统启动了神经 内分泌 免疫功能的代偿调节机制产生各种神经递质、激素、炎症介质 因此糖尿病合并心力衰竭患者既受到心力衰竭激活的 系统和交感神经系统受损的打击又受到胰岛素抵抗导致的代谢紊乱的侵害致使神经体液调节和内分泌代谢保持着一种致损性平衡 尽管糖尿病合并心力衰竭发病机制复杂但糖尿病的病理状态下导致的高糖、高脂、氧化应激、炎症反应及免疫失衡等均参与内质网应激作为多种应激源的共同通路内质网应激将糖尿病状态下多种危险因素与心力衰竭发展相联系对心肌细胞的内质网应激 自噬交互作用推波助澜通过 与自噬进行交叉对话产生持续性破坏作用导致自噬水平持续增加和过度激活甚至自噬性细胞死亡 心肌细胞在成年后不具再生能力因此心肌细胞死亡或凋亡可导致心肌细胞数量绝对减少而间质细胞代偿性增生从而导致细胞外基质产生过多形成心肌纤维化最终导致心肌重构溶酶体是自噬通路的最终降解场所变性的蛋白质和受损的细胞器包裹于溶酶体中 是自噬溶酶体中降解依赖的重要水解酶其水平可反映自噬活性心力衰竭时其表达上调 定位于前自噬体表面的 是自噬标志性蛋白之一在自噬体的延长及成熟中起重要作用 的合成过程经由 的未成熟形成阶段再经 催化与膜磷脂磷脂酰乙醇胺作用产生(其相对量反映了自噬体的含量)/比值反映自噬活性 在应激状态下自噬参与各种急性心脏病变在许多慢性心脏病变过程中也可以观测到自噬如糖尿病合并心脏病等 等在小鼠主动脉缩窄术的心脏肥厚实验中发现病变早期自噬水平下降随后自噬被激活并维持上调达 周且与心力衰竭程度呈正相关 等研究发现在心肌梗死 后心肌自噬水平明显上升表现为/比值和 、均增加 因此、表达情况既可反映心肌细胞自噬的活跃程度又可反映溶酶体活性体现自噬小体累积情况现代中西医结合杂志 ()高血压引起心脏负荷过重是心力衰竭的一个重要原因心脏随高血压增加的压力后负荷适应性地启动一系列代偿机制增强心肌收缩力导致左心室扩张、肥厚心肌纤维化等病理学改变这种变化可适应性降低心室壁张力维持心脏一定射血量以满足机体正常代谢需求但通常伴随着交感神经和 系统的激活(水平升高)初期表现为一种代偿性机制反应若持续活化则会导致病理性的心室重构成为心力衰竭进程中的重要环节 心脏超声是评价心脏结构和功能的一项客观检查手段 和 是反映心脏功能的指标二者降低提示左心室整体收缩功能不全 和 是反映心脏结构的指标二者增加提示容量负荷过重心脏变形能力降低心肌重构严重本实验结果显示造模后模型组大鼠、增加、降低糖化血红蛋白及血清、水平升高(其中 可与内质网内的蛋白质发生二硫键反应扰乱内质网正常的蛋白折叠)提示心肌发生病理性重构 染色和透射电镜观察模型组大鼠心肌胶原纤维增生心肌组织肌原纤维模糊线粒体增生且变形心肌细胞自噬小体大量增加细胞浆内充满肿胀的线粒体且内质网应激信号分子、表达量和自噬相关蛋白 、蛋白表达量及/比值均明显升高提示慢性心力衰竭引起心肌细胞中的内质网应邀 自噬过度激活内质网应激 自噬反应交互作用加强导致自噬性细胞死亡心肌细胞数量减少心肌间质代偿性增多产生心肌纤维化和心肌重构中医认为先天禀赋不足是糖尿病发生的重要内在因素饮食不节、损伤脾胃是后发因素 在发病之初阴虚燥热迁延日久则致气阴两虚、燥热痰瘀气为血之帅气虚无力推动血液运行则加重血瘀内热则耗伤津液津亏热结致血脉瘀滞久而成毒因此糖尿病合并心力衰竭以气阴两虚为本瘀毒内蕴为标因此治疗以滋阴益气为基础强调活血解毒 降糖舒心方中的山茱萸、山药、地黄是景岳全书治疗真阴不足的左归丸成分人参、麦冬、五味子是李杲内外伤辨惑论中滋阴、益气、生津、养心的生脉散组方加入黄连、大黄清热解毒燥湿祛浊加丹参活血化瘀养心血加黄芪益气扶正解毒 全方滋阴益气、活血解毒 前期实验研究结果表明降糖舒心方能抑制糖尿病心肌内质网应激相关凋亡的通路减轻氧化应激 内质网应激 细胞凋亡的耦联反应可保护心肌组织结构及超微结构本实验结果显示与模型组比较降糖舒心低、高剂量组大鼠、均明显缩短 和 均明显升高糖化血红蛋白及血清、水平和心肌胶原纤维 值均明显降低心肌胶原纤维减少心肌细胞自噬及纤维化程度减轻心肌组织中、相对表达量和 、蛋白相对表达量及/比值均明显降低 提示降糖舒心方可通过调控 通路减轻自噬效应抑制内质网应激 自噬的过度激活进而减缓糖尿病合并慢性心力衰竭心肌重构的进展综上所述心肌重构发生机制复杂但本研究发现调控心肌细胞过度自噬能够有效抑制心肌纤维化为中医药治疗糖尿病心肌重构提供了新的靶点和依据利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突参考文献 .():.():.:.王子同王鹏宇李弘等.内质网自噬与内质网稳态.中国病理生理杂志():.()():.符显昭黄月凤王清礼等.降糖舒心方对糖尿病合并慢性心力衰竭的影响:一项前瞻性随机对照研究.中国中西医结合急救杂志():.杨韶华李雅倩甩佾龙等.雷帕霉素对早期心力衰竭大鼠心肌细胞自噬功能的影响及意义.重庆医科大学学报():.伍美婷江俊麟.内质网自噬 内质网质量控制新途径.中国药理学通报():.徐倩许银丰杨杰杰.内质网应激与细胞自噬的关系.中国细胞生物学学报():.现代中西医结合杂志 ().():.():.():.:.():.:.:.盛思琪谢琳姜怡邓等.转录因子 在衰老心肌细胞自噬中的作用机制研究.天津医药():.吴长勇保苏丽徐菲等.运动调节自噬改善心血管疾病预后的研究进展.中国全科医学():.():.:.():.():.符显昭冯雪萍黄文华等.降糖舒心方对糖尿病心肌内质网应激 凋亡旁路的影响.中华中医药学刊():.收稿日期 (上接第 页)唐农毛德文李晏杰等.四逆汤对肾、脾、心阳虚大鼠线粒体/的影响.广西中医药():.胡跃强唐农何乾超等.温阳复元方治疗缺血性脑卒中恢复期患者的临床疗效及其机制.中国老年学杂志():.():.赵欣周明.中医药治疗缺血性中风的研究进展.医学综述():.闫美花胡跃强.温阳复元法治疗中风的理论探源.湖南中医杂志():.胡跃强唐农胡玉英等.温阳复元方联合西药治疗缺血性中风恢复期患者 例临床观察.中医杂志():./.:./:.:.():.马龙.不同躯体应激对大鼠脑铁代谢的影响及机制研究.上海:第二军医大学.().()():.收稿日期 现代中西医结合杂志 ()