姜黄素与根皮素联合作用对大肠杆菌的抑菌效果.pdf

姜黄素与根皮素联合作用对大肠杆菌的抑菌效果刘锋袁陆殷明袁陶文静袁王攀林袁宋丹*袁李向臣渊浙江农林大学动物科技学院尧动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室杭州 311300冤摘要为研究姜黄素和根皮素联合使用对大肠杆菌的抑菌作用袁采用微量肉汤稀释法测定姜黄素尧根皮素的亚抑菌浓度曰细菌培养测定各药物在亚抑菌浓度剂量下袁对大肠杆菌的生长曲线尧胞外核酸蛋白尧乳酸脱氢酶渊LDH冤尧碱性磷酸酶渊AKP冤以及总蛋白含量的影响曰牛津杯法分析各药物亚抑菌浓度剂量下袁姜黄素与根皮素的联合抑菌效果遥结果表明院1冤姜黄素与根皮素在质量浓度均为 250 滋g/mL 时袁对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用袁此质量浓度确定为姜黄素与根皮素的亚抑菌浓度曰2冤亚抑菌浓度的姜黄素和根皮素联合作用袁能够有效抑制大肠杆菌的生长袁抑菌效果优于姜黄素与根皮素单独处理组渊P0.05冤曰3冤亚抑菌浓度的姜黄素和根皮素联合使用对大肠杆菌的细胞壁和细胞膜有很强的破坏性袁导致菌液上清中核酸尧蛋白质以及 AKP 指数均升高遥同时袁亚抑菌浓度的姜黄素和根皮素联合使用减少了菌体内总蛋白渊包括 LDH冤的表达量袁效果显著优于姜黄素与根皮素单独处理组渊P0.05冤遥 由此可见袁姜黄素和根皮素联合作用大肠杆菌时袁抑菌效果优于姜黄素与根皮素单独使用遥关键词姜黄素曰 根皮素曰 联合作用曰 大肠杆菌曰 抑菌文章编号1009-7848渊2023冤08-0075-09DOI院 10.16429/j.1009-7848.2023.08.009姜黄素渊Curcumin冤是姜黄提取物中主要植物成分袁其含量可达到提取物总量的 60%70%1遥 在传统中医以及印度医药中认为姜黄可治疗多种疾病袁例如姜黄试剂用于新鲜伤口杀菌和瘀伤恢复袁并作为昆虫叮咬的抗刺激剂袁 姜黄糊可用于促进水痘和天花的结痂袁同时也可用于泌尿系统疾病尧肝胆疾病或作为驱虫药2遥 现代医学研究发现袁姜黄素具有抗炎尧抗菌尧抗寄生虫尧抗诱变尧抗糖尿病尧放射防护尧促进伤口愈合尧降脂尧解痉尧抗氧化尧免疫调节尧抗癌和预防阿尔茨海默病等作用3遥 根皮素渊Phloretin冤是一种二氢查耳酮类化合物袁主要存在于苹果皮中4遥有研究表明根皮素的功效包括抗癌尧抗氧化尧抗菌尧抗糖尿病尧抗炎尧抗血栓形成尧抗病毒尧神经保护和免疫调节特性5遥 由于其良好的抗菌和抗炎活性袁 根皮素被考虑为预防细菌感染另一种有效防治方法6遥 目前袁在畜牧生产中过量使用抗生素治疗动物大肠杆菌病会引起动物的免疫力降低和畜产品质量不合格的问题7遥 张欣8的研究发现袁 姜黄素对大肠杆菌有较好地抑制作用遥 Chauhan 等9报道称根皮素在分子水平上通过TLR4 信号通路保护巨噬细胞免受大肠杆菌诱导的炎症遥姜黄素和根皮素单独使用袁均具有良好的抑菌消炎效果袁 而二者联合使用对大肠杆菌的抑制作用未见报道遥 本研究通过体外试验探究姜黄素和根皮素联合使用对大肠杆菌的抑菌作用及机理袁 对于科研研究以及实践生产中治疗大肠杆菌引起的疾病具有很好的指导意义遥此外袁姜黄素和根皮素具有一定的食用安全性袁 对人和动物不会造成危害袁 可作为防腐剂替代品添加于不同食品加工中袁减少生产中食品防腐剂的使用袁改善食品的口味袁延长食品的货架期遥1材料与方法1.1材料与试剂受试菌大肠杆菌渊MG1655冤袁山东青岛海博生物技术有限公司曰姜黄素和根皮素袁上海源叶生物科技有限公司曰 大豆蛋白胨和酵母粉袁OXOID 生物公司曰氯化钠袁国药集团化学试剂有限公司曰考马斯亮蓝染色试剂袁 武汉赛维尔生物科技有限公司曰碱性磷酸酶渊AKP冤和乳酸脱氢酶渊LDH冤检测试剂盒袁南京建成生物工程研究所遥1.2试验仪器BSA 分析天平渊BSA124S冤袁赛多利斯渊上海冤收稿日期院 2022-08-22基金项目院 国家自然科学基金青年科学基金项目渊32202752冤曰浙江省自然科学基金项目渊LQ22C170001冤第一作者院 刘锋袁男袁硕士生通信作者院 宋丹E-mail院 灾燥造援 23 晕燥援 8Aug援 圆 园 2 3允燥怎则灶葬造 燥枣 悦澡蚤灶藻泽藻 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥燥凿 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠中 国 食 品 学 报第 23 卷第 8 期圆 园 2 3 年 8 月中 国 食 品 学 报圆园23 年第 8 期贸易有限公司曰ZEALWAY 高压灭菌器渊GI54D冤袁上海甄明科学仪器有限公司曰 恒温振荡器 渊HZ-9211K冤袁 太仓市科教器材厂曰 电热鼓风干燥箱渊101-3 型冤袁上海锦屏仪器仪表有限公司曰垂直层流洁净工作台渊HCB-1300V冤袁上海勇诺生物科技有限公司曰智能生化培养箱渊SPX-150冤袁宁波海曙赛福实验仪器厂曰全自动菌落分析仪渊G6冤袁杭州迅数科技有限公司曰超声波细胞粉碎机渊KS-450F冤袁宁波海曙科生超声设备有限公司遥1.3试验方法1.3.1培养基配制1.3.1.1LB 液体培养基的配制按照 2颐1颐2 质量比例分别准确称取大豆蛋白胨尧酵母粉尧氯化钠袁ddH2O 溶解袁121 益灭菌 30 min袁备用遥1.3.1.2LB 固体培养基的配制按照 2颐1颐2颐3 质量比例分别准确称取大豆蛋白胨尧 酵母粉尧 氯化钠尧琼脂粉袁定容灭菌备用遥1.3.2样品配制由于姜黄素和根皮素微溶于水且易析出袁本试验采用二甲基亚砜渊DMSO冤作为溶剂遥准确称取 40 mg 各样品袁用 DMSO 溶解至无沉淀溶液并定容至 1 mL袁使姜黄素尧根皮素尧姜黄素+根皮素溶液的终质量浓度均为 40 mg/mL遥1.3.3菌种活化与菌液制备于垂直层流洁净工作台用灭菌接种环蘸取少量大肠杆菌菌液袁 划线接种于 LB 固体培养基平板中袁 生化培养箱培养16 h袁挑取单菌落于 LB 液体培养基袁恒温摇床培养至菌液 OD600nm=1袁使用 LB 液体培养基将菌液稀释至 OD600nm=0.1袁用于后续试验遥1.3.4亚抑菌浓度和抑制率的测定采用 96 孔板微量肉汤稀释法测定亚抑菌浓度和抑制率遥 将质量浓度为 40 mg/mL 的姜黄素溶液尧 根皮素溶液尧 姜黄素+根皮素溶液依次倍比稀释得到1 000耀0.9765625 滋g/mL 共 11 份不同质量浓度的含样培养基袁 在 96 孔板 AH 行中的第 1 至第 11个孔分别加入上述不同质量浓度的含样培养基200 滋L袁 第 12 个孔加入相同体积不含样品的 LB培养基作为阴性对照袁在 AF 行每个孔加入已稀释好的菌液 10 滋L袁作为试验组袁GH 行均不加入菌液袁作为空白组袁恒温生化培养箱中培养 16 h袁酶标仪读取 OD600nm值遥 根据式渊1冤和式渊2冤计算样品对大肠杆菌的影响遥大肠杆菌 OD600nm=A试验组-A空白对照组渊1冤抑制率 渊%冤=渊阴性对照-渊试验组-空白对照组冤冤/渊阴性对照-空白对照组冤伊100渊2冤结果判定院 使用 Graphpad prism 软件进行数据分析袁 以出现显著性差异的组别确定为样品的亚抑菌浓度袁并根据 OD600nm值计算抑制率袁每组试验至少重复 3 次遥1.3.5根皮素与姜黄素联合作用对大肠杆菌生长曲线的影响根据 1.3.4 节确定的根皮素与姜黄素联合作用对大肠杆菌的亚抑菌浓度袁 配制含有亚抑菌浓度样品的培养基 15 mL袁 加入等量稀释好的大肠杆菌菌液袁设置空白对照组遥于恒温振荡器中振荡培养袁 分别在培养 0袁3袁6袁9袁12袁24袁48 h时使用移液枪吸出 1 mL 培养基袁加入 96 孔板中袁每孔 200 滋L袁酶标仪读取 OD600nm值遥 根据各处理组的 OD600nm值袁以时间为横坐标袁OD600nm值为纵坐标袁画出生长曲线遥 每组试验至少重复 3 次袁以多次试验数据平均值绘制生长曲线遥1.3.6根皮素与姜黄素联合作用对大肠杆菌生长的影响试验采用牛津杯抑菌法袁 将稀释好的菌液接种于灭菌后冷却至 40 益左右的 LB 固体培养基中袁 混匀后迅速将其转移至 90 mm 无菌培养皿中袁每个皿 10 mL遥 在洁净工作台中待其凝固袁用镊子夹取牛津杯呈品字形放置于培养皿上袁 于牛津杯中分别加入 200 滋L 不同样品袁在固体培养皿中心位置放置一牛津杯袁 加入含有相同体积的DMSO 作为阴性对照遥 恒温生化培养箱培养 16 h袁全自动菌落分析仪测量药物抑菌直径并拍照遥1.3.7 根皮素与姜黄素联合作用对大肠杆菌菌液上清 DNA 和蛋白质的影响按照 1.3.5 节所述方法对大肠杆菌进行培养袁并于恒温振荡器培养 16h 后将大肠杆菌菌悬液以 5 000 r/min 离心 10min袁 移液枪吸取 200 滋L 上清置于 96 孔板中袁酶标仪测定 OD260nm和 OD280nm遥1.3.8根皮素与姜黄素联合作用对大肠杆菌 AKP的影响按照 1.3.5 节所述方法对大肠杆菌进行培养袁并于恒温振荡器培养 16 h 后将大肠杆菌菌悬液以 5 000 r/min 离心 10 min袁 取上清袁 参照AKP 试剂盒说明书测定波长 520 nm 处各处理组培养液的吸光度袁确定 AKP 活力袁每组试验至少重复 3 次遥76第 23 卷 第 8 期图 1不同质量浓度的姜黄素尧根皮素以及姜黄素+根皮素对大肠杆菌生长的影响以及抑制率Fig.1Effects of different mass concentrations of curcumin袁 phloretin袁 curcumin+phloretinon Escherichia coli growth and inhibition ratio1.3.9根皮素与姜黄素联合作用对大肠杆菌菌体LDH 的影响按照 1.3.5 节所述方法对大肠杆菌进行培养袁于恒温振荡器培养 16 h 后将大肠杆菌菌悬液以 5 000 r/min 离心 10 min袁 弃上清袁 留沉淀袁加入 1 mL PBS 以混匀菌体袁超声波细胞粉碎机粉碎大肠杆菌细胞壁袁5 000 r/min 离心 10 min袁吸取上清袁 参照 LDH 试剂盒说明书测定波长 450nm 处各处理组大肠杆菌的吸光度袁 确定 LDH 活性袁每组试验至少重复 3 次遥1.3.10根皮素与姜黄素联合作用对大肠杆菌菌体总蛋白的影响按照 1.3.5 节所述方法对大肠杆菌进行培养袁并于恒温振荡器培养 16 h 后将大肠杆菌菌悬液以 5 000 r/min 离心 10 min袁弃上清袁留沉淀袁加入 750 滋L PBS 以混匀菌体袁超声波细胞粉碎机粉碎大肠杆菌细胞壁袁5 000 r/min 离心10 min袁吸取上清袁加入 250 滋L 4伊上样缓冲液进行混匀袁 利用 SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白袁按照考马斯亮蓝说明书进行染色尧脱色袁最后拍照比对遥1.3.11数据处理试验所有数据于 Excel 进行初步整理袁 采用 Graphpad prism 软件对试验数据进行差异性分析袁试验结果用野平均数依标准差冶表示袁P0.05 表示差异显著遥2结果与分析2.1姜黄素与根皮素亚抑菌浓度测定与分析细菌悬液浊度与细菌计数存在一定线性关系袁细菌悬液浊度可通过 OD600nm进行测定10遥 由图1 可知袁姜黄素与根皮素分别在 250 滋g/mL 时出现了对大肠杆菌的显著性抑制袁 联合用药时在 125滋g/mL 时出现了对大肠杆菌显著性抑制曰 姜黄素与根皮素单独使用时袁250 滋g/mL 对大肠杆菌的抑制率分别为 27.31%和 19.78%袁 联合作用时达到43.59%袁 说明联合使用后姜黄素与根皮素的抑菌效果增强遥2.2姜黄素与根皮素对大肠杆菌生长曲线的影响由图 2 可知袁 姜黄素与根皮素在最初 3 h 内对大肠杆菌的生长没有明显影响袁 在第 6 小时出现对大肠杆菌生长的抑制袁 随着样品作用时间延长袁 姜黄素与根皮素对大肠杆菌的抑制效果逐渐明显增强袁 在 1224 h 根皮素与姜黄素显著抑制质量浓度Mass concentration/滋g 窑 mL-1质量浓度Mass concentration/滋g 窑 mL-1质量浓度Mass concentration/滋g 窑 mL-1质量浓度Mass concentration/滋g 窑 mL-1质量浓度Mass concentration/滋g 窑 mL-1质量浓度Mass concentration/滋g 窑 mL-1渊a冤姜黄素渊b冤根皮素渊c冤姜黄素+根皮素渊d冤姜黄素对应抑制率渊e冤根皮素对应抑制率渊f冤姜黄素+根皮素对应抑制率注院*表示 P0.05曰*表示 P0.01曰*表示 P0.001遥姜黄素与根皮素联合作用对大肠杆菌的抑菌效果77中 国 食 品 学 报圆园23 年第 8 期处理组直径/mmcon9.61 依 0.32a袁 n=6PHL10.32 依 0.33b袁 n=6CUR12.04 依 0.47b袁 n=6PHL+CUR13.22 依 0.40b袁 n=6表 1姜黄素与根皮素联合处理对抑菌圈直径的影响Table 1The effect of curcumin combined withphloretin on inhibition circle diameters处理时间Handling time/h处理时间Handling time/h渊a冤姜黄素渊b冤根皮素图 2姜黄素渊a冤与根皮素渊b冤对大肠杆菌生长曲线的影响Fig.2The effect of curcumin 渊a冤 and phloretin 渊b冤 on the growth curve of Escherichia coli大肠杆菌的数量增长遥 综合大肠杆菌的生长曲线与培养基中营养物质的消耗袁 同时参考 Packia鄄vathy 等11的研究院姜黄素在处理弧菌 16 h 后对细菌的数量及菌体形态产生明显的影响作用袁 因此后续本研究选取 250 滋g/mL 的姜黄素与根皮素联合处理 16 h 探究姜黄素与根皮素联合作用的抑菌机理遥2.3姜黄素与根皮素联合作用对大肠杆菌生长的影响由图 3 和表 1 可知袁与对照组相比袁姜黄素和根皮素单独处理大肠杆菌 16 h 时袁对大肠杆菌均有一定的抑制性袁当姜黄素与根皮素联合处理时袁其抑菌效果均显著强于对照组和姜黄素尧 根皮素单独处理组渊P0.05冤遥2.4姜黄素与根皮素联合作用对菌液上清中核酸和蛋白质的影响接下来探究了姜黄素与根皮素联合作用抑制大肠杆菌生长的可能机制遥 在菌体细胞膜完整性受到破坏时袁 菌体蛋白和核酸等内容物会释放出来12遥 核酸和蛋白质分别在波长 260 nm 和波长OD280nm处有吸光值袁 因此可以根据数值的变化计算上清液中核酸与蛋白质的含量变化袁 进而反映细胞膜的破损程度13遥 由图 4 可知袁正常情况下袁对照组上清中核酸和蛋白质含量很少袁 姜黄素与根皮素单独处理大肠杆菌后袁 菌液上清中核酸与蛋白质含量显著增加袁 说明姜黄素与根皮素对大肠杆菌的细胞膜有一定的影响遥 Lee 等14研究证明苹果黄酮类提取物可以通过破坏大肠杆菌的细胞膜而抑制细菌生长袁这与本文的结果一致遥 此外袁姜黄素和根皮素联合处理组上清中的核酸与蛋白质含量较单独处理显著增多袁 说明二者联合处理进一步破坏了细菌的细胞膜遥2.5姜黄素与根皮素联合作用对菌液上清中AKP 的影响正常情况下 AKP 存在于细菌细胞壁与细胞注院左上院姜黄素+根皮素曰左下院根皮素曰中间院对照曰右下院姜黄素遥图 3姜黄素与根皮素联合处理对大肠杆菌的抑菌效果Fig.3Inhibition effect of curcumin combined withphloretin against Escherichia coli78第 23 卷 第 8 期渊a冤核酸对应吸光值渊b冤蛋白质对应吸光值注院con 表示对照组曰*表示 P0.01曰*表示 P0.001遥图 4姜黄素与根皮素联合处理对大肠杆菌细胞膜的影响Fig.4The effect of curcumin combined with phloretin on cell membrane of Escherichia coli注院con 表示对照组曰*表示 P0.05曰*表示 P0.01遥图 5姜黄素与根皮素联合处理对大肠杆菌 AKP 的影响Fig.5The effect of curcumin combined with phloretinon AKP of Escherichia coli注院con 表示对照组曰*表示 P0.05曰*表示 P0.01遥图 6姜黄素与根皮素联合处理对大肠杆菌 LDH 的影响Fig.6The effect of curcumin combined with phloretinon LDH of Escherichia coli膜之间袁当细菌受到不良刺激时袁细胞壁被破坏袁AKP 溢出胞外15遥 可通过检测培养液上清中 AKP的活力变化来反映样品对大肠杆菌细胞壁的影响遥 姜黄素与根皮素联合处理对大肠杆菌 AKP 的影响如图 5 所示院与对照组相比袁姜黄素与根皮素单独处理时能够增加 AKP 的外泄袁姜黄素与根皮素联合处理时袁其外泄效果显著加强袁说明姜黄素与根皮素联合处理时对细菌细胞壁损伤严重遥2.6姜黄素与根皮素联合作用对菌体 LDH 的影响LDH 在大肠杆菌胞内以一种可溶性蛋白方式存在袁在菌体应对不良刺激中发挥重要作用16袁可通过 LDH 活性变化来反映样品对细菌代谢的影响遥 由图 6 可知袁与对照组相比袁姜黄素与根皮素联合处理显著降低细胞内 LDH 的活性袁说明姜黄素与根皮素联合处理降低 LDH 的生成袁进而影响了细菌生物膜的生成袁从而起到抑菌效果遥2.7姜黄素与根皮素联合作用对菌体总蛋白的影响姜黄素与根皮素联合处理对大肠杆菌细胞内总蛋白的影响如图 7 所示遥与对照组相比袁姜黄素与根皮素单独处理组的细菌菌体总蛋白表达明显减少袁 二者联合作用后进一步减少大肠杆菌内总蛋白遥 有研究17-18表明袁植物源性的抑菌剂可能是通过减少细菌内相关酶的表达量和活性来抑制细菌的增殖袁这与本试验的结果一致遥3讨论大肠杆菌作为革兰氏阴性菌典型代表菌袁在生活中常因食品或水源的不洁引起人大肠杆菌病19遥 目前在食品的抑菌中袁多采用防腐剂或者塑料真空包装的方法抑菌袁 这些方法均有一定的局限性20遥 在过去动物性食品的生产过程中袁往往采用抗生素的方法预防和治疗动物大肠杆菌病遥 然而随着抗生素的大量使用袁 细菌耐药性问题也变得越来越突出21袁迫切需要寻找抗生素的替代品袁姜黄素与根皮素联合作用对大肠杆菌的抑菌效果79中 国 食 品 学 报圆园23 年第 8 期注院M.蛋白 Marker袁1.对照组袁2.姜黄素组袁3.根皮素组袁4.姜黄素与根皮素联合处理组遥图 7姜黄素与根皮素联合处理对大肠杆菌细胞内总蛋白的影响Fig.7 The effect of curcumin combined with phloretinon the total protein in Escherichia coli cells以此减少抗生素的使用遥 天然植物提取物对细菌具有一定的抑制作用袁 同时可以减弱细菌的耐药性22遥 植物提取物对细菌的抑制性主要取决于细菌对其敏感性以及植物提取物的浓度遥 为了提高植物提取物的生物功能袁 目前多采用不同物质联合使用增加生理活性遥 De Oliveira 等23研究发现袁姜黄素与光照联合后对大肠杆菌 O157院 h7a 和李斯特菌的抑菌性明显增加袁 在生鲜食品卫生中的应用具有重要指导意义遥 史长政24将根皮素与超声技术结合袁 能够有效协同杀灭大肠杆菌和金黄色葡萄球菌袁 在苹果浊汁中应用延长了苹果浊汁的货架期遥 周沫等25研究发现袁根皮素与姜黄素联合作用后能够显著抑制癌细胞的增殖袁 对人体的健康具有重要意义遥在本研究中袁将姜黄素与根皮素联合作用发现袁 两者联合作用对大肠杆菌的抑制性均强于单一物质的抑菌效果遥细菌细胞质膜是细菌进行物质交换的重要通道袁维持细胞的正常生理功能袁其对物质的渗透作用还受控于细胞膜的结构和组成成分26遥 在 Es鄄maeelzadeh 等27的研究中袁发现姜黄素主要是使细菌细胞膜去极化袁 同时破坏细菌的细胞膜结构达到抑菌效果遥本研究中发现袁姜黄素与根皮素联合作用后袁致使细菌的细胞膜损坏程度加深袁细胞内核酸与蛋白质大量流出袁从而达到抑菌效果遥 AKP是存在于细胞壁与细胞膜中一种重要的酶袁 一旦细菌细胞壁受损袁会使 AKP 泄出胞外而影响细菌增殖28-29遥 有研究30发现袁姜黄素能通过干扰细菌正常代谢活动袁达到抑菌效果遥 在本研究中袁姜黄素联合根皮素后袁胞外 AKP 活力显著上升袁说明姜黄素与根皮素联合作用后袁 细胞壁受到损伤加重遥 张欣8试验发现袁姜黄素对奶牛常见致病菌的抑菌性也是通过破坏细菌细胞壁和细胞膜的通透性等途径来起到抑菌作用遥 LDH 是细菌无氧代谢过程中的一种重要酶袁李京洋等31研究发现姜黄素可能通过有效抑制 LDH 的活性袁降低变异链球菌的产酸能力遥 在缪玉佳等32研究中袁冬凌草甲素可干扰嗜水气单胞菌的 LDH 合成来达到抑菌的效果遥本研究发现袁姜黄素与根皮素联合使用可降低大肠杆菌细胞内 LDH 活性袁 该结果与 SDS-PAGE 结果变化相一致袁 说明姜黄素与根皮素联合作用后袁 能够干扰细菌细胞内蛋白质正常代谢活动遥本试验探究了姜黄素与根皮素联合作用对大肠杆菌的抑制效果袁 证明二者联合作用能显著增强对大肠杆菌的抑制作用遥然而袁本试验也存在以下的不足之处院 一是本试验按照 1颐1 质量浓度比配制姜黄素与根皮素溶液袁未探究其它最适配比曰二是本试验主要是在实验室中探究姜黄素与根皮素对大肠杆菌的影响袁 未从实际食品添加中探究抑菌效果袁而这两个问题有待试验进一步探究遥4结论姜黄素与根皮素联合作用可减少细胞内蛋白的表达量袁降低有关酶的活性袁同时破坏菌体的细胞膜袁从而达到抑菌作用袁这为食品添加剂的开发与应用提供了理论数据指导遥参考文献1PRIYADARSINI K I.The chemistry of curcumin院From extraction to therapeutic agentJ.Molecules袁2014袁 19渊12冤院 20091-20112.2KUTTAN R袁 BHANUMATHY P袁 NIRMALA K袁 etal.Potential anticancer activity of turmeric 渊Curcumalonga冤J.Cancer Lett袁 1985袁 29渊2冤院 197-202.3NELSON K M袁 DAHLIN J L袁 BISSON J袁 et al.The essential medicinal chemistry of curcumin J.JMed Chem袁 2017袁 60渊5冤院 1620-1637.4肖小年袁 王凡袁 周洁袁 等.甜菊糖苷改善根皮素溶80第 23 卷 第 8 期解性及体外释放的研究J.中国食品学报袁 2021袁21渊3冤院 11-21.XIAO X N袁 WANG F袁 ZHOU J袁 et al.lmprovingof solubilization and in vitro release enhancement ofphloretin by steviol glycosidesJ.Journal of ChineseInstitute of Food Science and Technology袁 2021袁 21渊3冤院 11-21.5STOMPOR M袁 BRODA D袁 BAJEK-BIL A.Dihy鄄drochalcones院 Methods of 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