接受根治性肝切除术治疗的肝内胆管细胞癌患者肿瘤组织成纤维细胞生长因子受体2表达及其临床意义探讨.pdf

基金项 目:江 苏 省 科 技 厅 社 会 发 展 面 上 项 目(编 号:BE2020708)作者单位:222000 江苏省连云港市 南京医科大学康达学院附属连云港市第二人民医院普外科第一作者:孙岩,男,40 岁,大学本科,主治医师。E-mail:通讯作者:徐良,E-mail:肝癌接受根治性肝切除术治疗的肝内胆管细胞癌患者肿瘤组织成纤维细胞生长因子受体 2 表达及其临床意义探讨孙 岩,张 鑫,李国宾,闫尚伦,徐 良【摘要】目的 探讨接受根治性肝切除术治疗的肝内胆管细胞癌(ICC)患者肿瘤组织成纤维细胞生长因子受体 2表达及其与预后的关系。方法 2017 年 3 月 2022 年 4 月我院诊治的 ICC 患者 56 例,均接受肝叶切除术治疗,随访 1年。采用免疫组化法检测肿瘤组织 FGFR2 表达。采用单因素和多因素 Logistic 回归分析影响无病生存期(DFS)的因素。结果 本组肿瘤组织 FGFR2 阳性 15 例(26.8%),阴性 41 例(73.2%);FGFR2 阳性组发生微血管侵袭比例为 66.7%,显著高于 FGFR2 阴性组的 29.3%(P0.05);FGFR2 阳性组血清 CEA 水平为 5.9(1.3,55.2)ng/mL,显著高于 FGFR2 阴性组【2.2(0.5,26.4)ng/mL,P0.05】;术后随访 1 年,FGFR2 阳性组 1 a DFS 为 33.3%,显著低于 FGFR2 阴性组的 58.5%(P0.05);多因素分析发现,最大肿瘤直径、肿瘤部位和 FGFR2 阳性表达是影响患者预后的独立危险因素(P0.05)。结论 FGFR2 高表达可能是 ICC 患者术后肿瘤复发的危险因素,针对这类患者有必要采取更加科学的随访计划和管理措施。【关键词】肝内胆管细胞癌;成纤维细胞生长因子受体 2;表达;预后 DOI:10.3969/j.issn.1672-5069.2023.06.035 Expression of fibroblast growth factor receptor 2 in cancerous tissues and its implication in patients with intrahepaticcholangiocarcinoma underwent radical hepatectomy Sun Yan,Zhang Xin,Li Guobin,et al.Department of General Surgery,Second Peoples Hospital Affiliated to Kangda College,Nanjing Medical University,Lianyungang 222000,Jiangsu Province,China【Abstract】ObjectiveThe aim of this study was to investigate the expression of fibroblast growth factor receptor 2(FGFR2)in cancerous tissues and its implication in patients with intrahepatic cholangiocarcinoma(ICC)underwent radicalhepatectomy.Methods56 patients with ICC were encountered in our hospital between March 2017 and April 2022,and allunderwent radical hepatectomy.All patients were followed-up for one year.The expression of FGFR2 in cancerous tissues wasdetected by immunochemical staining.The univariate and multivariate Logistic regression analysis were applied to predict the factorsimpacting the disease-free survival(DFS).ResultsThe expression of FGFR2 in cancerous tissues was positive in 15 cases(26.8%)and negative in 41 cases(73.2%);the incidence of microvascular invasion in FGFR2 positive group was 66.7%,significantly higher than 29.3%in FGFR2 negative group(P0.05);serum CEA level in FGFR2 positive group was 5.9(1.3,55.2)ng/mL,much higher than 2.2(0.5,26.4)ng/mL,P0.05 in FGFR2 negative group;at the end of one-year follow-up,the DFS in FGFR2 positive group was 33.3%,much lower than 58.5%(P0.05)in FGFR2 negative group;the multivariateLogistic regression analysis showed that the tumor diameters,the locations of tumor and the FGFR2 positive expression were theindependent risk factors impacting the prognosis of patients with ICC after operation(P0.05).ConclusionThe intensifiedexpression of FGFR2 in cancerous tissues is an independent risk factor for postoperative recurrence of tumor and poor prognosis inpatients with ICC,which should be taken into consideration for close surveillance.【Key words】Intrahepatic cholangiocarcinoma;Fibroblast growth factor receptor 2;Expression;Prognosis 肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)是目前第二常见的原发性肝脏肿瘤,其救治难度大1。手术切除是目前唯一根治 ICC 的方法,尽管能够短期改善患者的健康状况,但大多数接受根治性切除的患者会在 2 年内肿瘤复发2。在局部晚期或存在转移性肿瘤患者,标准的一线治疗是吉西他滨联合顺铂的全身治疗,但其应答率不高,且在一709实用肝脏病杂志 2023 年 11 月第 26 卷第 6 期 J Prac Hepatol,November.2023.Vol.26 No.6线治疗失败后尚无选择的挽救治疗方法3。通过对ICC 患者的基因组分析发现,几乎 50%患者有靶向癌基 因 突 变4。成 纤 维 细 胞 生 长 因 子 受 体 2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)是编码跨膜受体酪氨酸激酶的四个 FGFR 家族成员之一,在最近备受关注,尤其是在 ICC 患者观察到 10%16%FGFR2 基因发生融合或重排。佩米替尼是一种高效的 FGFR1/2/3 选择性竞争抑制剂,在 FGFR 受体自动磷酸化和随后激活的成纤维细胞生长因子信号通路驱动的癌组织能抑制肿瘤细胞生长,具有良好的治疗效果5。本研究旨在探讨接受根治性肝切除术治疗的 ICC 患者肿瘤组织 FGFR2 表达变化及其临床意义,现报道如下。1 资料与方法1.1 病例来源 2017 年 3 月 2022 年 4 月我院诊治的 ICC 患者 56 例,男性 38 例,女性 18 例;年龄为 3578 岁,平均年龄为(57.215.8)岁。经肝叶切除术后组织病理学检查确诊。排除标准为:(1)此前接受过 ICC 相关的治疗,包括放疗、化疗或手术治疗;(2)合并其他脏器原发性恶性肿瘤,或在研究期间出现其他脏器原发性恶行肿瘤;(3)白细胞计数过低(4.0109/L);(4)Karnofsky 评分低于 70 分;(5)全身严重感染;(6)有严重的自身免疫性疾病。本研究经我院医学伦理委员会批准。1.2 资料收集 自我院电子病历系统中搜索患者姓名、年龄、性别、病史、肿瘤直径和位置、微血管侵袭、肝内转移、淋巴结转移和肝硬化等情况。1.3 手术治疗 对入组患者实施手术,肿瘤切缘距离肿瘤边缘 1 cm 以上,术后切缘镜下未见肿瘤细胞,术后病理学检查报告为 ICC,切缘阴性。常规随访病例,其中无病生存期(disease-free survival,DFS)定义为自肿瘤被切除到肿瘤复发或死亡的时间。1.4 组织 FGFR2 表达检测取手术切除组织,经福尔马林溶液固定和石蜡包埋,组织切片,采用免疫组织化学染色法检测。应用兔抗人 FGFR2 单克隆抗体(Agilent 公司,美国,批号 C8/163B)进行免疫组化染色,在日本 Olympus 公司的 BX53 型光学显微镜下观察,10%以上肿瘤细胞 FGFR2 表达阳性定义为阳性。1.5 统计学方法应用 SPSS 26.0 软件进行统计学分析,应用 Shapiro-Wilk 进行正态性检验,对符合正态分布的计量资料以(xs)表示,采用 t 检验;对非正态分布的计量资料以 M(P25,P75)表示,采用Mann-Whitney U 检验;计数资料以%表示,采用 x2检验或 Fisher 精确概率计算;应用 Logistic 回归模型评估影响手术切除肿瘤后患者 DFS 的危险因素。P0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 ICC 组织 FGFR2 表达情况经免疫组化检测,本组 发 现 肿 瘤 组 织 FGFR2 阳 性(图 1)15 例(26.8%),阴性 41 例(73.2%)。图 1 ICC 患者腹部 CT 和组织病理学表现 男性,45 岁A:CT 扫描可见肝门周围存在边界模糊的低密度灶;B:肿瘤组织大部分肿瘤细胞 FGFR2 染色强阳性(免疫组化,200)2.2 两组基线资料比较 肿瘤组织 FGFR2 阳性组存在肿瘤微血管侵袭的比例显著高于 FGFR2 阴性组,差异具有统计学意义(P0.05,表 1)。表 1 肿瘤组织 FGFR2 阴性与阳性组基线资料%,(xs),M(P25,P75)比较阴性(n=41)阳性(n=15)年龄(岁)56.015.857.516.3男性28(68.3)12(80.0)肿瘤直径(cm)4.1(1.5,9.0)4.3(1.9,10.2)肿瘤定位(周围/肝门)30(73.2)11(73.3)低分化21(51.2)6(40.0)微血管侵袭12(29.3)10(66.7)肝内转移12(29.3)4(26.7)淋巴结转移10(24.4)4(26.7)肝硬化4(9.8)2(13.3)与 FGFR2 阴性组比,P0.052.3 两组血清指标比较 FGFR2 阳性组血清 CEA 水平显著高于 FGFR2 阴性组,差异具有统计学意义(P0.05,表 2)。2.4 影响 ICC 患者 DFS 的单因素和多因素 Logistic回归分析术后随访 1 年,FGFR2 阳性组患者 1 aDFS 为 33.3%,显著低于 FGFR2 阴性组的 58.5%(P0.05)。多因素分析发现,最大肿瘤直径、肿瘤定位和 FGFR2 阳性表达是影响患者预后的独立危险因素(P0.05,表 3)。809实用肝脏病杂志 2023 年 11 月第 26 卷第 6 期 J Prac Hepatol,November.2023.Vol.26 No.6表 2 FGFR2 阴性与 FGFR2 阳性组血清指标%,M(P25,P75)比较FGFR2 阴性(n=41)FGFR2 阳性(n=15)HBsAg 阳性3(7.3)1(6.7)抗 HCV-Ab 阳性2(4.9)1(6.7)总胆红素(mol/L)52.7(33.3,81.6)50.7(34.4,91.7)ALP(U/L)326.2(142.2,1139.0)372.8(149.9,677.2)GGT(IU/L)76.7(58.8,1283.2)105.3(69.4,694.6)白蛋白(g/L)34.4(32.6,45.3)33.0(31.1,43.7)AFP(g/L)430.2(223.3,672.8)451.8(217.7,710.3)CEA(ng/mL)2.2(0.5,26.4)5.9(1.3,55.2)CA19-9(U/mL)36.8(0.7,32649.0)53.6(6.3,36472.0)与 FGFR2 阴性组比,P0.05表 3 影响 ICC 患者 DFS 的单因素和多因素 Logistic 回归分析单因素分析HR(95%CI)P 值多因素分析HR(95%CI)P 值年龄(60 岁)1.2(0.7 2.2)0.391男性1.3(0.8 1.8)0.147白蛋白低1.4(0.6 1.9)0.482CA19 9(38 U/mL)1.6(0.7 3.1)0.584肿瘤直径(5 cm)2.2(1.9 4.5)0.0012.3(1.5 4.8)0.001肝门肿瘤2.3(1.2 3.6)0.0102.2(1.2 4.1)0.020细胞低分化1.2(0.6 2.0)0.284肝内转移1.5(0.7 2.2)0.520微血管侵袭1.4(0.5 1.8)0.476淋巴结转移1.8(0.8 3.0)0.062FGFR2 阳性2.6(1.7 4.9)0.0012.4(1.4 4.5)0.001肝硬化1.3(0.4 4.5)0.4733 讨论ICC 是一种具有高度侵袭性的恶性肿瘤,其 1 a和 5 a 总生存率分别约为30%和18%6。完整的手术切除包括肝脏切除和门脉淋巴清扫,为 ICC 患者的长期生存提供了可能。但不幸的是,大多数 ICC患者在诊断时被发现有局部晚期或转移性肿瘤7。ICC 确诊的高峰期在七十岁,男性的发病率略高于女性8。ICC 分为 3 种特殊亚型:肿块形成型、导管周围浸润型和导管内生长型。肿块形成型是最常见的类型,占所有 ICC 的 60%80%9。该亚型典型的表现为实性结节,在影像学上有别于肝实质10。肉眼可见坚固、苍白、边界清楚的实体瘤,无包膜,通常呈多分叶状,肉眼看不到与胆管的连接。淋巴转移在这一亚型中更为常见11。导管周围浸润型是第二常见的亚型,占所有 ICC 的 15%35%12。与肿块形成型不同,导管周围浸润性 ICC 侵犯门脉结构周围的实质,常与受累导管狭窄相关13,可能导致近端梗阻性胆管扩张和潜在的胆管炎14。术前处理应包括对转移性肿瘤或隐匿性疾病的全面评估,包括胸部、腹部和骨盆的 CT 检查。高质量的病变成像是确定手术可切除的主要依据。可切除的ICC 定义为在完全切除肿瘤组织的同时,用残肝保留足够的肝功能的能力。因此,大血管侵犯和多灶性肿瘤可能会妨碍根治性手术切除15。此外,腹膜疾病和远处淋巴结转移患者不能手术治疗16。随着术前评估、术中手术技术和围手术期处理的进步,在过去的几十年里,肝叶切除后病死率有了很大的改善17,18。肝叶切除治疗 ICC 的并发症最常见的是浅表伤口感染、脓肿、脓毒症和胆漏。根治性手术完成率为 46%98%。多种因素可造成的差异,包括外科医生的技术和医院平台管理、病理学评估和患者病情选择等19。在本研究,我们采用免疫组织化学法检测了肿瘤组织 FGFR2 表达并评估了其对预后的影响。我们发现,肿瘤组织 FGFR2 高表达是 ICC 患者手术切除后肿瘤复发的独立危险因素。许多正常组织恒定表达 FGFR2,但由于 FGFR2 在癌细胞中的表达趋于失调,并且在肿瘤进展过程中具有许多功能,包括促进肿瘤细胞增殖、存活、迁移和血管生成,FGFR2 酪氨酸激酶融合基因已被确定为多种癌症的药物靶点。FGFR2 高表达也与胃癌和结直肠癌患者预后不良有关。最近,基因组图谱已经被用来同时检测多909实用肝脏病杂志 2023 年 11 月第 26 卷第 6 期 J Prac Hepatol,November.2023.Vol.26 No.6种类型的基因组改变,包括突变、拷贝数变化、融合和重排。据报道,在10%16%ICC 患者观察到 FG-FR2 的融合和重排。在这种背景下,有学者研究了培美加替尼在先前接受过化疗的不能切除的胆管癌患者的有效性和安全性,使 FGFR2 受到了更多的关注。有研究报道,FGFR2 融合基因的存在并不影响ICC 患者的预后。尽管 FGFR mRNA 水平过高经常发生在胆管癌,但 FGFR mRNA 的存在也不影响 ICC患者的预后。本研究具有重要的意义,因为本研究从病理组织上证实接受早期手术治疗的 ICC 患者手术标本存在 FGFR2 蛋白表达。如结果部分所示,FGFR2 高表达是 ICC 患者预后不良的独立危险因素。有研究报道,对 FGFR2 外显子18 和全长突变体的体外和体内功能分析表明,FGFR2 外显子 18 是ICC 的驱动因素,提示单纯 FGFR2 基因突变可能没有临床意义。因此,本研究从蛋白质水平评估了 FG-FR2 过表达的临床意义。未来,FGFR2 融合基因与FGFR2 蛋白表达以及 FGFR2 融合基因衍生蛋白之间的关系还有待于更加深入的研究。近年来,吉西他滨联合顺铂作为 ICC 的系统疗法已被用于治疗术后复发的患者。肿瘤微环境中免疫功能在抑制肿瘤生长方面非常重要,ICC 也是如此。肿瘤实质和间质 CD8+T 细胞数量被证明与总生存期和 DFS 不良相关。已有关于 FGFR2 与胆管癌肿瘤微环境中免疫功能的关系研究报道,认为FGFR2 突变和融合与低突变负担和免疫功能低下有关。另有研究报道 FGFR2 只与突变型和野生型 T细胞的低免疫功能相关。有研究还研究了 FGFR2与肿瘤微环境中免疫细胞的关系,发现 FGFR2 表达强度与免疫功能呈负相关。本研究存在一些局限性。首先,这是一项单中心的回顾性研究,研究队列相对较小;其次,本研究的病例数较少,可能影响了患者预后的观察结果。综上所述,肿瘤组织 FGFR2 高表达是 ICC 患者术后肿瘤复发的独立危险因素。对于这类患者,在随访过程中应予以一定的关注,增加复诊次数,加强影像学检查,及时处理肿瘤复发,从而在一定程度上改善患者预后。【参考文献】1Panettieri E,Maki H,Kim BJ,et al.Arterial enhancement patternpredicts survival in patients with resectable and unresectable intra-hepatic cholangiocarcinoma.Surg Oncol,2022,40:101696.2Zhu S,Liu C,Dong Y,et al.A retrospective study of lenvatinibmonotherapy or combined with programmed cell death protein 1 anti-body in the treatment of patients with hepatocellular carcinoma or in-trahepatic cholangiocarcinomainChina.FrontOncol,2021,11:788635.3Tang J,Wang R,Tang R,et al.Circrtnip1regulates the malignantprogression of intrahepatic cholangiocarcinoma by sponging mir-541-5p to induce hif1a production.Pathol Res Pract,2022,230:153732.4Dong L,Lu D,Chen R,et al.Proteogenomic characterization iden-tifiesclinicallyrelevantsubgroupsofintrahepaticcholangiocarcinoma.Cancer Cell,2022,40(1):70-87,e15.5Tang Y,Tang Z,Yang J,et al.Microrna-7-5p inhibitsmigration,invasionandmetastasisofintrahepaticcholangiocarcinoma by 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