灯盏花素对非酒精性脂肪性肝病大鼠作用研究_罗德霞.pdf

23第 2 5 卷 第 2 期 2023 年 2 月辽 宁 中 医 药 大 学 学 报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol.25 No.2 Feb.，2023灯盏花素对非酒精性脂肪性肝病大鼠作用研究罗德霞，赵茜，武俊紫，姚政，杨榆青（云南中医药大学，云南 昆明 650504）基金项目：国家自然科学基金面上项目（81860812）；云南省中医药学分子生物学重点实验室（云南中医药大学）开放基金资助项目 （2019DG016）作者简介：罗德霞（1992-），女，海南乐东人，硕士在读，研究方向：中西医结合防治肝胆及肿瘤疾病的应用基础研究。通讯作者：杨榆青（1976-），女，云南昆明人，高级实验师，硕士，研究方向：代谢性疾病的中医药治疗。摘要：目的 研究灯盏花素对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠的干预作用，并从血小板活化途径探讨其对NAFLD的作用机理。方法 72只清洁级雄性SD大鼠按照随机数字法分为正常组、模型组、阿司匹林组、灯盏花素低剂量、中剂量及高剂量组（n=12）。采用高脂高糖饲料喂养12周构建NAFLD大鼠模型，药物干预4周后考察其对大鼠肝脏病理学、肝功能（AST和ALT）、血脂（TG和TC）以及炎性因子（TNF-、IL-1、IL-8）的影响，并从血小板因子活化途径考察其对血小板活化因子（PAF）、血小板活化因子受体（PAFR）、血小板衍生因子（PDGF）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、转化生长因子-1（TGF-1）和金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）的影响。结果 正常组肝细胞无脂肪空泡和炎症反应，模型组则有大量的脂肪空泡，同时可见有一定的肝脏纤维，与模型组相比，各治疗组均有明显好转；与正常组相比，模型组大鼠血清中AST、ALT、TG、TC、TNF-、IL-1、IL-8均明显升高（P0.05），各治疗组相较于模型组均明显降低（P0.05）；与正常组相比，模型组大鼠血清PAF和血小板聚集率明显增高（P0.05），而各治疗组相较于模型组二者明显降低（P0.05）；与正常组相比，模型组大鼠肝脏组织中PAFR、PDGF、MMP-2和TGF-1蛋白表达均明显升高（P0.05），TIMP-2明显降低（P0.05），各治疗组相较于模型组PAFR、PDGF、MMP-2和TGF-1明显降低（P0.05），TIMP-2明显升高（P0.05）。结论 灯盏花素对非酒精性脂肪性肝病具有明显的干预治疗作用，而这可能与其抑制血小板活化密切相关。关键词：灯盏花素；非酒精性脂肪肝病；血小板活化因子；肝纤维化中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2023)02-0023-05Effect of Breviscapine on Rats with Non-Alcoholic Fatty Liver DiseaseLUO Dexia，ZHAO Xi，WU Junzi，YAO Zheng，YANG Yuqing（Yunnan University of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650504，Yunnan，China）Abstract：Objective To study the effect of breviscapine on non-alcoholic fatty liver disease（NAFLD）rats，and to explore its mechanism from the platelet activation pathway.Methods 72 clean male SD rats were divided into the normal group，model group aspirin group，breviscapine low，medium and high dose groups via a random number method，n=12，to construct the NAFLD rats model based on the high fat and high sugar feed for 12 weeks，after 6 weeks of drug intervention，the liver pathology，liver function（AST and ALT），blood lipids（TG and TC）and inflammatory factors（TNF-，IL-1，IL-8）were investigated，and from the platelet factor activation pathway to investigate the proteins expression of platelet activation factor（PAF），platelet activation factor receptor（PAFR），platelet-derived factor（PDGF），matrix metalloproteinase-2（MMP-2），transforming growth factor-1（TGF-1）and tissue inhibitor of metalloproteinase-2（TIMP-2）.Results The liver was no fat vacuole and inflammation in the normal group，and there were a large number of fat vacuoles，and certain liver fibers could be seen in the model group，compared with the model group，each treatment group had a significant improvement；Compared with the normal group，the serum AST，ALT，TG，TC，TNF-，IL-1，IL-8 were significantly increased in 量的研究 D .北京：中国中医科学院，2016.1-76.6 CHI Y，LI C，WU L H，et al.The relationship between dectin-1 and mast cells in patients with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome J .Scandinavian Journal of Gastroenterology，2020(6 )：1-7.7 MAHARSHAK N，RINGEL Y，KATIBIAN D，et al.Fecal and Mucosa-Associated Intestinal Microbiota in Patients with Diarrhea-Predominant Irritable Bowel Syndrome J .Digestive Diseases&ences，2018，2018：43-50.8 AERSSENS J，CAMILLERI M，TALLOEN W，et al.Alterations in Mucosal Immunity Identified in the Colon of Patients With Irritable Bowel Syndrome J .Clinical Gastroenterology&Hepatology，2008，6(2 )：194-205.9 时岱.四四固本颗粒治疗腹泻型肠易激综合征（脾肾阳虚型）的临床研究 D .昆明：云南中医学院，2018.10 侯理伟.温肾健脾方干预脾肾阳虚型IBS-D大鼠脑一肠CREB/BDNF/TrkB信号通路的机制研究 D .北京：中国中医科学院，2018.11 陈婷，吴美平，刘宁，等.国家自然科学基金中医学领域肠道微生态相关研究申请及资助情况分析 J .中国中西医结合杂志，2019，39(11 )：1395-1399.12 林日添，吴维，刘占举.短链脂肪酸对肠黏膜稳态免疫调节作用的研究进展 J .免疫学杂志，2017，33(10 )：900-904.DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2023.02.00624 辽宁中医药大学学报 25 卷阿司匹林是历史悠久的解热镇痛药，近年来关于服用阿司匹林治疗或者预防脂肪肝有文献报道1-2。以哈佛医学院的TRACEY SIMON及其团队3在2019年发表的临床研究报道显示，每天服用10 mg阿司匹林不仅可以有效地改善非酒精性 脂 肪 性 肝 病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）患者肝功能，而且优先的降低患者发展为肝纤维化和肝硬化的风险，同时对改善炎症反应也具有明显的疗效。此外，其他的研究发现，与阿司匹林同属于非甾体类药物的对乙酰氨基酚和布洛芬并没有相似的效果，分析原因，阿司匹林作为一种普遍应用的抗血小板药物，可能是与其特有的血小板活化抑制作用（血小板活化因子激活肝纤维相关生成因子的途径，见图1）有关，但是具体机理还没有被研究证实4。灯盏花素是从中药灯盏花中提取的一类药理活性物质，相较于阿司匹林，其对血小板聚集的作用效果更好5。其是否也可以延缓NAFLD进展，进而改善本病症状？因此，本研究拟构建NAFLD动物模型，采用灯盏花素治疗，阿司匹林为阳性对照，旨在从血小板活化因子途径探讨和研究灯盏花素对NAFLD的作用，为NAFLD的进展机理提供进一步的理论补充以及中药单体的开发提供理论学基础。图1 血小板活化因子激活肝纤维相关生成因子的途径1材料与方法1.1 实验材料1.1.1 动物雄性SPF级大鼠72只，体质量160180 g，购于昆明医科大学动物实验中心许可证号：SCXK（滇）2015-0002，大鼠购买后分笼饲养于云南中医药大学动物实验楼，每组12只，湿度40%60%，温度2227，光照/黑暗=12 h/12 h，自由饮水和进食。本实验符合动物实验伦理学标准。1.1.2 药品与试剂灯盏花素（昆明植分生物技术有限公司，纯度98%）；阿司匹林酷尔化学科技（北京）有限公司；谷 丙 转 氨 酶（alanine transaminase，ALT）、谷草转氨酶（aspartate transaminase，AST）、总胆固醇（Total cholesterol，TC）和 甘 油 三 酯（triglycerides，TG）试剂盒（南京建成生物工程研究所）；白细胞介素-1（interleukin-1，IL-1）、白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8）和肿瘤坏死因子-（tumor necrosis factors-，TNF-）试剂盒（武汉华美生物科技公司）；BCA 蛋白浓度测定试剂盒（上海圆创生物科技有限公司）；血小板活化因子受体（platelet activation factor，PAFR）、血小板衍生因子（platelet-derived factor receptor，PDGF）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）、转化生长因子-1（transforming growth factor-1，TGF-1）、金 属 蛋 白 酶 组 织 抑 制 剂-2（tissue inhibitor of metalloproteinase-2，TIMP-2）和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗体购于美国Santa公司；二抗购于北京中杉金桥生物科技公司。1.1.3 仪器725型 超 低 温 冰 箱（美 国 Thermo Forma）；HZK-110型电子分析天平（赛恩斯仪器设备有