技术路线图(国自然）.pdf

“实验万事屋”出品“实验万事屋”出品 技术路线技术路线例子例子 1 1（蓝色已完成，紫色为实验目的）（蓝色已完成，紫色为实验目的）深度测序分析深度测序分析XX改变引起改变引起的基因表达谱的改变的基因表达谱的改变Pathway Array检测凋亡检测凋亡、侵侵袭转移相关通路蛋白表达变化袭转移相关通路蛋白表达变化根据下游靶分子群根据下游靶分子群，利用生物信息软利用生物信息软件件Genes2Networks、Go-anaslysis建建立立XX调控相关的信号通路调控相关的信号通路总结总结XX发挥调控作用的精细分发挥调控作用的精细分子机制子机制收集临床收集临床300例乳癌样本例乳癌样本制备组织芯片制备组织芯片，检测分析检测分析XX的表达的表达、亚亚细胞定位细胞定位，回顾性分析回顾性分析XX和肿瘤预后和肿瘤预后、分型的相关性分型的相关性验证验证XX下游关键调控分子在下游关键调控分子在临床样本中的表达情况临床样本中的表达情况证实证实XX抑制癌变发生的功抑制癌变发生的功能作用和效应通路能作用和效应通路GST pulldown联合联合Co-IP 实验验实验验证与证与XX直接相互作用的蛋白直接相互作用的蛋白制备互作蛋白突变体制备互作蛋白突变体，分析相互作用结合位点分析相互作用结合位点ChIP联合芯片技术鉴联合芯片技术鉴定与定与XX发生相互作用发生相互作用的基因的基因DNA组织标本证实组织标本证实XX是重要是重要的抑癌因子的抑癌因子前期工作前期工作（已发表已发表SCI）XX在乳腺癌组织中表达下调在乳腺癌组织中表达下调/缺失缺失、癌旁高表达癌旁高表达XX细胞实验功能验证细胞实验功能验证XX-RNAi初步分子初步分子机制机制侵袭转移实验侵袭转移实验迁移实验迁移实验XX在乳腺癌中确切的分子调控机在乳腺癌中确切的分子调控机制制在体水平动物实验在体水平动物实验：裸鼠成瘤裸鼠成瘤肿瘤组织和癌旁肿瘤组织和癌旁组织亚细胞定位组织亚细胞定位不同不同体外功能实验体外功能实验+/-功能验证功能验证MDA-MB-231细胞细胞较高表达较高表达MCF-7细胞低表达细胞低表达XX过表达过表达细胞周期细胞周期增殖曲线增殖曲线克隆形成克隆形成XX在抑制乳腺癌癌变发生中发在抑制乳腺癌癌变发生中发挥关键作用挥关键作用XX在体水平功能证实在体水平功能证实RNAi/回复过表达实验验回复过表达实验验证证XX对下游信号通路的调对下游信号通路的调控作用控作用qPCR实验验证实验验证XX的结合的结合目的基因目的基因DNA结合验证结合验证EMSA实验验证实验验证XX的结的结合目的基因合目的基因XX蛋白结构生物信息蛋白结构生物信息学分析学分析“实验万事屋”出品“实验万事屋”出品 例子例子 2（细胞水平、组织水平分开画图，如果有动物水平再另外画一个）（细胞水平、组织水平分开画图，如果有动物水平再另外画一个）1、细胞水平：细胞水平：2、组织水平、组织水平 “实验万事屋”出品“实验万事屋”出品 例子例子 3 “实验万事屋”出品“实验万事屋”出品 例子例子 4 4 HPV致病DNA正向示踪分析HPV致病蛋白逆向求源分析分离克隆宫颈癌细胞的表达差异DNA 致癌相关蛋白一级分析合成相应mRNA生物探针表达谱基因芯片杂交分析鉴定相应蛋白的差异表达致癌相关蛋白二维显示分析共价离子蛋白芯片计算机距阵分析芯片原位蛋白分解距阵分析析译致病基因DNA 核苷酸序列核酸印迹杂交分析筛查致病DNA Papnet Papnet 筛查宫颈癌变筛查宫颈癌变筛查宫颈癌变筛查宫颈癌变DNA蛋白蛋白DNA病毒致癌蛋白分子生物特性分析病毒致癌蛋白分子生物特性分析病毒致癌蛋白分子生物特性分析病毒致癌蛋白分子生物特性分析提出干预阻断宫颈癌发生方案及策略提出干预阻断宫颈癌发生方案及策略病毒致癌分子调控机理分析HLA系统P53、Rb、E2F-1端粒体系统细胞素、活化因子“实验万事屋”出品“实验万事屋”出品 例子例子 5 “实验万事屋”出品“实验万事屋”出品 例子例子 6（可以再改进下，不够美观）（可以再改进下，不够美观）“实验万事屋”出品“实验万事屋”出品 例子例子 7 “实验万事屋”出品“实验万事屋”出品 例子例子 8 “实验万事屋”出品“实验万事屋”出品 例子例子 9 “实验万事屋”出品“实验万事屋”出品 例子例子 10（图不够清楚，但仍可以看出结构清晰）（图不够清楚，但仍可以看出结构清晰）“实验万事屋”出品“实验万事屋”出品 例子例子 10 扫一扫扫一扫轻松关注轻松关注