活体成像实验(1).pdf

解螺旋 陪伴医生科研成长 http:/ 1 活体成像实验活体成像实验 1.1.实验原理实验原理 活体成像是指生物体处于活体状态下，在细胞和分子水平上应用多种成像方式对某种生物行为进行定性或者定量分析研究的方法。与传统的体外成像或切片相比，其有许多优势：1.可用同一实验对象进行多次处理得到一系列结果，从而排除个体间的差异；2.能够在正常生理状态下检测活体内生物学活动，可真实模拟生理病理状态；3.可动态观察处理结果，不需要处死实验对象。2.2.实验目的实验目的 活体动物体内光学成像主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术。通过两种不同的标记方式，结合更高量子效率 CCD 来监测被标记动物体内分子及细胞等的发展进程。解螺旋 http:/ 3.实验实验材料材料 3 3.1.1.主要试剂（试剂来源仅供参考）主要试剂（试剂来源仅供参考）活体动物 3.2.3.2.主要仪器主要仪器（仅供参考）（仅供参考）仪器名称仪器名称 来源来源 型号型号 法国 VilberNEWTON 7.0 小动物活体成像系统 Vilber NEWTON 7.0 4 4.实验步骤实验步骤 这里以活体成像技术监测肝转移肿瘤为例（或见肿瘤转移模型）肿瘤肝转移模型建立：1.制备表达荧光素酶基因(luciferase)的 Lewis 肺癌细胞单细胞悬浮液。1106个细胞，200l 体积。解螺旋 陪伴医生科研成长 http:/ 2 2.麻醉 6-8 周龄雌性裸鼠，体重 16-22g。3.小鼠仰卧位左侧皮肤上做 2-3 厘米长肋下切口。4.暴露脾脏，用 4-0 缝合线结扎脾脏。在两条结扎线之间分切开，形成两个半个脾脏。5.将细胞用 27G 针头注射器将 100L 体积注射入一块脾脏，待细胞转移到肝脏，切除注射的一半脾脏。一般肿瘤细胞排到肝脏约 10 分钟。10 分钟后切除被注射的一半脾脏。另一半脾放回回腹腔原位置。6.缝合皮肤，关闭腹腔。解螺旋 http:/ 0 天，6 天，10 天，14 天荧光素底物，进行活体成像 3 分钟。监测肿瘤肝脏转移生长情况。活体成像视频：https:/ 5 5.应用示例文献应用示例文献1,21,2 1.Zhan Y,Ai F,Chen F,et al.Intrinsically Zirconium-89 Labeled Gd2 O2 S:Eu Nanoprobes for In Vivo Positron Emission Tomography and Gamma-Ray-Induced Radioluminescence Imaging.Small 2016;1212(21):2872-6.2.Wang Y,Chen J,Yang B,et al.In vivo MR and Fluorescence Dual-modality Imaging of Atherosclerosis Characteristics in Mice Using Profilin-1 Targeted Magnetic Nanoparticles.Theranostics 2016;6 6(2):272-86.