解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1外泌体（抽提）外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法，这是目前外泌体提取最常用的方法。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心，这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少。四是免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验。五是PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度最高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。六是色谱法，这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，应用不广泛。解螺旋http://www.helixlife.cn/超速离心法1.实验原理离心操作时，将装有等量试液的离心容器对称放置在转子四周的吊杯内，依靠电动机带动转子高速旋转所产生的离心力使试液分离。尽管这种联合的方法可以获得高度纯化的外泌体，但也存在一些缺点。例如同批次最多只能同时处理6个样本（转子限制）且回收率不稳定，前期需要准备大量材料且外泌体得率低。最重要的是重复离心很可能对外泌体的囊泡造成损害从而降低其质量，并且一些可溶性蛋白可与外泌体形成团块而产生污染。解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn22.实验目的用于从生物体液（血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等）中提取外泌体。3.实验材料3.1.主要仪器离心机3.2.其他（请具体写明）外泌体超速离心一般和蔗糖密度梯度离心或蔗糖衬垫组合起来分离低丰度外泌体。需在离心机中以100000~200000g离心沉淀（含有外泌体）120分钟，使样品中的外泌体在1.13~1.19g/mL的蔗糖密度范围内进行富集。解螺旋http://www.helixlife.cn/4.实验步骤一、细胞培养和上清液收集冻存细胞复苏后培养在含10%胎儿牛血清（fetalbovineserum，FBS）的RPMI-1640培养基（培养基根据不同的细胞选择）中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。待细胞生长至80%以上密度时，吸去培养基，用磷酸缓冲盐溶液（phosp...
