大血藤煎剂对慢性盆腔炎大鼠..._Smads通路的影响研究_江璠.pdf

大血藤煎剂对慢性盆腔炎大鼠子宫 通路的影响研究江璠，陈寿珍（厦门市海沧医院妇科，福建 厦门 ）摘要目的：探讨分析大血藤煎剂对慢性盆腔炎大鼠子宫 通路的影响。方法：选择 雌性大鼠 只，随机分为个组，分别为对照组、假手术组、模型组、大血藤高剂量组、中剂量组、低剂量组以及阳性药物组。造模给药 进行检测，检测致炎侧子宫肿胀程度、血清炎症因子表达，并采用 法及 法检测子宫组织 、及蛋白表达。结果：大血藤各剂量组及阳性药物组子宫肿胀程度低于模型组（），且随着大血藤药物浓度的增加，大鼠右侧子宫肿胀度减轻（）。大血藤高、中、低剂量组及阳性药物组大鼠血清、以及子宫 、蛋白和 相对表达量较模型组降低（），且随着大血藤药物浓度的增加，各指标降低程度越明显（）。结论：大血藤煎剂可有效降低慢性盆腔炎大鼠子宫肿胀，其作用机制可能包括抑制大鼠及炎症反应以及抑制 信号通路。关键词大血藤煎剂；慢性盆腔炎；大鼠；通路中图分类号：；文献标识码：文章编号：（），（，）：，：，（），（），（），（），（）（）北方药学 年第 卷第 期 ，（），（），（）：，：；慢性盆腔炎（）是由于生殖器官及其周围组织发生的慢性炎症性病变。由于疾病反复发作，迁延不愈，可导致患者出现输卵管不孕、慢性骨盆疼痛以及宫外孕等，对女性生活质量造成了严重影响。大血藤又名红藤，是木通科植物大血藤的干燥藤茎，具有清热解毒、活血通络、祛风止痛等作用，对妇科血瘀诸证以及风湿痹痛均有较好的治疗作用。为了进一步明确大血藤对慢性盆腔炎的治疗作用及其可能的作用机制，本研究探讨分析大血藤煎剂对慢性盆腔炎大鼠子宫 通路的影响，现报道如下。材料与方法 药材大血藤购于安徽省，经鉴定为木通科植物大血藤的藤茎。取大血藤重量的 倍水进行药材提取，提取次，每次提取时间为，浓缩干燥后粉碎称重，使用时用 配置成混悬液。妇科千金片（株洲千金药业股份有限公司，国药准字 ）动物 雌性大鼠 只，级，体质量（），购于北京维通利华实验动物技术有限公司（京）。实验前将动物适应性饲养，饲养温度 ，恒定湿度，动物标准饲料、自由饮水、分笼饲养。主要试剂及仪器戊巴比 妥 钠（上 海 上 药 新 亚 药 业 有 限 公 司，）；苯酚（上海阿达丁生化科技股份有限公司，：）；试剂盒（美国 ，）；试剂盒（美国 ，）；试 剂（美 国 ，）；逆 转 录 试 剂 盒（美 国 ，）；蛋白裂解液（上海碧云天生物技术有限公司，）；极超敏 化学发光试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司，）；抗体（美国 ，）；抗体（美国 ，）；抗体（美国 ，）；抗体（美国 ，）；电子分析天平（德国 公司，型，万分之一精确度）。方法 慢性盆腔炎大鼠造模使用 戊巴比妥钠静脉麻醉大鼠，将腹部正中毛剪去，酒精消毒，下腹部正中行 切口，暴露子宫，从大鼠子宫分岔处，将 注射器插入子宫腔内，针头转向右侧子宫，缓慢推注 苯酚胶浆，将左侧子宫作为自身对照，关闭腹腔，术区消毒。分组及处理将 只大鼠随机分为个组，分别为：对照组、假手术组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性药物组。其中对照组正常饲养，假手术组仅开腹和闭腹，不进行苯酚胶浆注射。造模成功后，高、中、低剂量组以及阳性药物组分别给予 生药、生药、生药 以及妇科千金片（），按照 （）灌胃，其中假手术组以及模型组给予等量生理盐水灌胃，各组大鼠连续灌胃周。观察指标于术后 ，使用 戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，使用负压管于腹主动脉取血 ，分离血清。采用 法检测各组大鼠血清 以及 表达水平。摘取大鼠左侧、右侧子宫，并计算子宫肿胀率。子宫肿胀率（致炎侧子宫质量未致炎侧子宫质北方药学 年第 卷第 期量）未致炎侧子宫质量 。取各组大鼠右侧子宫组织，用生理盐水清洗后，将其分为两块，取其中一块子宫组织，用锡箔纸包裹后迅速置于 冰箱内迅速冰冻，采用 法检测各组大鼠子宫组织内 、表 达。采 用 试 剂 提 取 组 织 总 ，按照逆转录试剂盒使用说明书将其逆转录为 。引物序列为：上游引物 ，下 游 引 物 ；：上 游 引 物 ，下 游 引 物 ；：上游引物 ，下游引物 ；：上 游 引物 ，下游引 物 ；：上游引物 ，下游引物 。扩增结束后，取反应物上机进行凝胶电泳检测，以 作为内参基因，采用 法计算各目的基因相对表达。取另外一块子宫组织采用 检测，研碎后采用 蛋白裂解液提取大鼠子宫组织总蛋白，取 蛋白上样，进行 电泳，电泳结束后进行 转膜，之后脱脂奶粉封闭，一抗孵育过夜，二抗 孵育，清洗后，采用 试剂盒显色，曝光、拍照。结果用目的蛋白灰度值 灰度值表示，采用 软件对显影条带进行分析。统计学分析采用统计学软件 进行数据处理分析，多组间计量资料比较采用方差分析，两组间计量资料比较采 用检验，以 为 差 异 具 有 统 计 学意义。结果 各组大鼠子宫肿胀程度比较与对照组及假手术组比较，其余各组大鼠右侧子宫明显肿胀（），而大血藤高、中、低剂量组及阳性药物组子宫肿胀程度较模型组降低（），且随着大血藤药物浓度的增加，大鼠右侧子宫肿胀度显著降低（），见表。各组大鼠血清炎症因子水平比较与对照组及假手术组比较，其余各组大鼠血清 及 水平均升高（），而大血藤高、中、低剂量组及阳性药物组大鼠血清 及 较模型组降低（），且随着大血藤药物浓度的增加，大鼠血清 及 水平降低（），见表。表各组大鼠子宫肿胀程度比较（，?）组别肿胀程度对照组 假手术组 模型组 高剂量组 中剂量组 低剂量组 阳性药物组 注：与对照组比较，；与假手术组比较，；与模型组比较，；与 高 剂 量 组 比 较，；与 中 剂 量 组 比较，；与低剂量组比较，。表各组大鼠血清炎症因子水平比较（，?）组别 对照组 假手术组 模型组 高剂量组 中剂量组 低剂量组 阳性药物组 注：与对照组比较，；与假手术组比较，；与模型组比较，；与 高 剂 量 组 比 较，；与 中 剂 量 组 比较，；与低剂量组比较，。各组大鼠子宫 、表达比较与对照组及假手术组比较，其余各组大鼠子宫 、蛋白均升高（），而大血藤高、中、低剂量组及阳性药物组大鼠子宫 、蛋白表达较模型组降低（），且随着大血藤药物浓度的增加，大鼠子宫 、蛋白表达水平降低（），见表。各组大鼠子宫 、比较与对照组及假手术组比较，其余各组大鼠子宫 、相对表达量均升高（），而大血藤高、中、低剂量组及阳性药物 组 大 鼠 子 宫 、相对表达量较模型组降低（），且随着大血藤药物浓度的增加，大鼠子宫 、相对表达量降低（），见表。北方药学 年第 卷第 期表组大鼠子宫 、蛋白表达比较（?）组别 对照组 假手术组 模型组 高剂量组 中剂量组 低剂量组 阳性药物组 注：与对照组比较，；与假手术组比较，；与模型组比较，；与高剂量组比较，；与中剂量组比较，；与低剂量组比较，。表各组大鼠子宫 、比较（?）组别 对照组 假手术组 模型组 高剂量组 中剂量组 低剂量组 阳性药物组 注：与对照组比较，；与假手术组比较，；与模型组比较，；与高剂量组比较，；与中剂量组比较，；与低剂量组比较，。讨论盆腔炎症可表现为一个局部症状，也可同时累积多个部位，其中以卵巢炎、输卵管炎最为常见。盆腔炎主要在性生活活跃期以及有月经的妇女中高发，若未得到及时、彻底的治疗，可能导致患者出现输卵管异位妊娠、炎性反应反复发作、慢性盆腔疼痛以及不孕症等，严重影响女性的生殖健康。慢性盆腔炎是由于患者发生急性盆腔炎后的一种后遗症，是由于急性盆腔炎后促炎抗炎因子相互作用，同时局部免疫调节共同参与的引发的。由于患者机体免疫系统受到破坏，抗病能力明显降低，盆腔更容易受到厌氧菌或需氧菌混合感染，导致机体炎性细胞浸润，进一步加重病情，而对盆腔组织造成影响。目前，西医对于慢性盆腔炎的治疗，主要以抗菌药物治疗为主，但是治疗疗效不佳、治疗副作用大，且患者长期使用容易产生耐药性，而中医药对于慢性疾病的治疗具有标本兼治、副作用小等优势。中医学认为，盆腔炎发生主要是由于机体气血运行不畅、胞宫经血受阻，不通则痛，或由于冲任胞宫失于濡养，不荣则痛。因此，对于慢性盆腔炎的治疗关键在于“活血化瘀”。大血藤药性苦、平，归大肠、肝经，可清热解毒，活血止痛，临床上多用于妇科盆腔炎的治疗。为了进一步了解大血藤治疗慢性盆腔炎的机制，本研究使用慢性盆腔炎大鼠进行研究分析。是单核细胞以及血管内皮细胞所产生的一种炎症细胞因子，可诱导炎症反应，造成组织细胞的进一步损伤；则是一种可诱导机体特异性免疫反应以及天然免疫反应的重要介质，可激活巨噬细胞，从而诱导炎症反应。本研究结果显示，造模后各组大鼠血清 以及 水平显著升高，同时大血藤煎剂可有效降低慢性盆腔炎模型大鼠子宫肿胀程度以及血清 以及 表达水平，提示了慢性盆腔炎模型造成成功，同时大血藤对慢性盆腔炎的治疗可能通过抑制炎症介质以及炎症因子的表达，调节机体免疫功能有关。与学者研究报道结果相似。是一类具有多种调控功能的多肽生长因子家族，研究显示，炎症反应可激活机体内 家族表达，从而诱导细胞黏连蛋白的合成和分泌，而 是 信号转导中唯一的底物蛋白。学者研究报道显示，在 患者中出现 信号通路的异常表达，提示 通路参与到了 疾病的进展中。本研究结果显示，大血藤高、中、低剂量组及阳性药物组大鼠子宫 、蛋白及 相对表达量较模型组降低，且随着大血藤药物浓度的增加，大鼠子宫 、蛋白及 相对表达量降低。提示大血藤对于慢性盆腔炎大鼠的治疗，可能与抑制大鼠子宫 通路表达有关。综上所述，大血藤煎剂可有效降低慢性盆腔炎大鼠子宫肿胀，其作用机制可能包括抑制大鼠及炎症反应以及抑制 信号通路。（下转第 页）北方药学 年第 卷第 期胃肠道的刺激更小，引发的胃肠道反应更少，且该药能更好改善患者凝血功能，减少凝血功能相关的不良反应。综上所述，银杏二萜注射液治疗急性脑梗死溶栓患者的疗效显著，可以更好改善患者认知功能和凝血功能，且安全性较高。参考文献 李斐 阿替普酶静脉溶栓对急性脑梗死患者血清炎症因子及神经功能的影响中国医学工程，（）：张倩，赵性泉 银杏叶提取物注射液临床应用专家共识（）中 华 老 年 医 学 杂 志，（）：车静，蔡耘，刘娜，等 急性脑梗死患者血糖波动与 评分、评分及血清炎症因子水平的相关性研究 老年医学与保健，（）：周小炫，谢敏，陶静，等 简易智能精神状态检查量表的研究和应用中国康复医学杂志，（）：，无 蒙特利尔认知评估量表（）中华神经外科杂志，（）：周永，陈锐，支中文，等银杏二萜内酯葡胺改善急性脑梗死患者神经功能的效果观察实用临床医药杂志，（）：，王燕，赵铎，王丹，等银杏二蘑内酯葡胺注射液联合奥扎格雷治疗急性脑梗死的临床研究 现代药物与临床，（）：王瞭颖，蒋珍秀，王强 银杏二菇内酯葡胺对老年小鼠学习记忆的影响及其机制 中华行为医学与脑科学杂志，（）：作者简介：孙忠发（），男，福建邵武人，副主任医师，本科，研究方向：脑血管病相关。通讯作者：孙强（），男，山东滕州人，副主任医师，硕士，研究方向：缺血性脑血管疾病的发病机制研究。（上接第页）参考文献 冯晓玲，蒋莎，陈璐，等妇炎舒胶囊联合抗生素治疗慢性盆腔炎疗效分析中华中医药学刊，（）：张岩雪，孙军华，李红艳，等中药保留灌肠配合蒸热疗法对慢性盆腔炎性后遗症患者 免疫平衡的影响西部中医药，（）：廖娜，黄光伟，唐红艳，等大血藤醇提物抗炎镇痛和止血活性研究初探广西植物，（）：，（）：，（）：卢路艳，王雅咪，马希佳，等止痛化癥胶囊联合阿莫西林克拉维酸钾治疗慢性盆腔炎的临床研究现代药物与临床，（）：谢小男，倪光夏通调三焦针刺法治疗气滞血瘀型慢性盆腔炎临床疗效观察中华中医药杂志，（）：刘敏，王小燕，贾瑞琳，等当归芍药散优化方抗慢性 盆 腔 炎 的 实 验 研 究 中 国 医 药 导 报，（）：金秀萍，马英兰血府逐瘀汤加减治疗慢性盆腔炎疗效及部分疗效机制研究世界中医药，（）：张春玲，马颖，孙仲函，等芪地膝黄桂苓汤治疗慢性盆腔炎疗效及对患者炎性因子和免疫功能的影响陕西中医，（）：倪喆鑫，赵倩倩，孙帅，等基于网络药理学的大血藤治疗子宫内膜异位症作用机制分析新中医，（）：作者简介：江璠（），女，汉族，福建龙岩人，本科，主治医生，研究方向：妇科。北方药学 年第 卷第