大叶紫珠中萜类化合物的研究_石丽莉.pdf

2023 年 1 月云南化工Jan 2023第 50 卷第 1 期Yunnan Chemical TechnologyVol.50，No.1doi:10.3969/j.issn.1004-275X.2023.01.24大叶紫珠中萜类化合物的研究石丽莉，郑苏，单舒筠(江苏省徐州医药高等职业学校，江苏徐州221116)摘要:对大叶紫珠(Callicarpa macrophylla Vahl)中萜类化合物进行了研究。采用以中低压快速分离色谱为主，多种色谱方法相结合，对大叶紫珠中含有的萜类化合物进行分离纯化，通过 UV、I、NM、MS 等技术手段，对纯化的化合物进行骨架、构型确证。结果表明，从大叶紫珠中分离鉴定了 6 个萜类化合物，分别为 urs 12 en 3 ol(乌苏 12 烯 3 醇)(1)、Oleanic acid(齐墩果酸)(2)、14，18 dihydroxy 7，15 isopimaradiene(14，18 二羟基 7，15 异海松二烯)(3)、isopimaradiene 3，18 diol(异海松二烯 3，18 二醇)(4)、3 ace toxy urs 12 ene 11 one 12 ol(3 乙酰氧基 urs 12 烯 11 酮 12 醇)(5)、ent 7，16，17，18 tetrahydrox ykaur 15 one(ent 7，16，17，18 四氢甲苯 贝壳杉烷15 酮)(6)。其中化合物(5)、(6)为首次在大叶紫珠中分离得到，为大叶紫珠中萜类成分的深入研究和开发应用提供了实验依据。关键词:大叶紫珠;萜类;化学结构;核磁波谱中图分类号:931.6文献标识码:A文章编号:1004 275X(2023)01 0085 05Investigation of Terpenoids from Callicarpa Macrophylla VahlShi Lili，Zheng Su，Shan Shujun(Jiangsu Xuzhou Vocational College of Pharmaceutics，Jiangsu，Xuzhou 221116，China)Abstract:Investigation of terpenoids from Callicarpa macrophylla Vahl were studied The dichloromethane layer extracts of Phyllanthus urinarialwere isolated and purified by medium low pressure rapid separation chromatography，and the structures of the compounds were identified byphysicochemical properties and NM data Six compounds were isolated from Callicarpa macrophylla Vahl These compounds were identified asurs 12 en 3 ol(1)、Oleanic acid(2)、14，18 dihydroxy 7，15 isopimaradiene(3)、isopimaradiene 3，18 diol(4)、3 ace toxy urs 12 ene 11 one 12 ol(5)、ent 7，16，17，18 tetrahydrox ykaur 15 one(6)Compounds(5)and(6)were isola-ted from Callicarpa macrophylla Vahl for the first time，providing experimental basis for further research and development of terpene componentsin Callicarpa macrophylla VahlKey words:Callicarpa macrophylla Vahl;terpenoids;chemical structure;NM spectrum马鞭草科紫珠属植物大叶紫珠 Callicarpa macro-phylla Vahl，又名穿骨风、假大艾、止血草、白背木、赶风柴等，苗药称其为“豆嘎先”。其原植物为灌木，生于海拔 110 2000 m 的山坡路旁、疏林下或灌丛中，在我国广东、广西、海南、贵州、云南等省区均有出产，是一种野生的常用中草药。其味辛、苦，性平，归肝、肺、胃经，具有散瘀止血，消肿止痛之功效，主治衄血，咯血，吐血，便血，外伤出血，跌扑肿痛等症1。民间习用大叶紫珠根、枝、叶入药，鲜用或晒干;2010 版药典将大叶紫珠作为新增品种收录记载，夏秋两季采摘其叶或带叶嫩枝，晒干入药。现代学者研究发现，大叶紫珠中含黄酮类、萜类、苯丙素类、甾体类等多种类型的化合物2 5，特别是萜类成分的细胞毒活性在抗癌方面显示其明显的治疗效果3 6，具有很高的药用价值。为了更深入阐明大叶紫珠中萜类成分的药效物质基础，本实验着重对大叶紫珠乙醇超声提取物进行了较系统的研究，从中分离鉴定出 6 个萜类化合物，分别为 urs 12 en 3 ol(1)、Oleanic acid(2)、14，18 dihydroxy 7，15 isopimaradiene(3)、isopimaradiene 3，18 diol(4)、3 ace toxy urs 12 ene 11 one 12 ol(5)、ent 7，16，17，18 tetrahydrox ykaur15 one(6)。1仪器与材料Bruker DX 600 型核磁共振仪(瑞士 Bruker公司);Agilent 1260 高效液相色谱系统，四元泵，DAD 检测器，Agilent Chemstation 色谱工作站(美国Agilent 公司);Buchi 114 旋转蒸发仪(瑞士步琦有限公司);SK250HP 超声波提取器(上海科导超声仪器有限公司);Combi Flash f 200 中低压快速分离色谱仪(美国 Teledyne 科技有限公司);制备型 HPLC(Shimadzu，Tokyo，日本):泵 Shimadzu LC 20A、检测器 Shimadzu SPD 20A、色谱柱 Shim pack P C18 column(10 m，200 20 mm);中压色谱分离凝胶MCI(德国 Merck 公司);薄层层析硅胶板 HSGF254，582023 年 1 月云南化工Jan 2023第 50 卷第 1 期Yunnan Chemical TechnologyVol.50，No.1GF254(青岛海洋化工有限公司);凝胶柱层析 Sepha-dex LH 20(美国 GE 公司);柱层析填料硅胶(100 200 目，青岛海洋化工有限公司);HPLC 分析使用色谱纯试剂，硅胶柱色谱洗脱等使用分析纯试剂。2提取与分离称取大叶紫珠干燥叶 5 kg，以适量 95%乙醇超声提取 2 次，3 h/次，合并两次提取液，旋转蒸发浓缩至流浸膏，加水混悬。将混悬液依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取 2 3 次，将各溶剂层萃取液合并，回收溶剂，浓缩至浸膏状，真空干燥后记录各萃取层所得膏体的收率如下:石油醚层为2.9%、二氯甲烷层为 50.5%、乙酸乙酯层为 3.4%、正丁醇层为 22.1%。取二氯甲烷萃取部位，采用常压硅胶柱色谱进行分离，依次用石油醚 乙酸乙酯(100 150 130 115 110 15 12 11 11 5)和乙酸乙酯梯度洗脱，TLC 检测，合并相同f 值的流分，得 23 个组分(Fr.1 Fr.23)。Fr.3 有大量物质在甲醇中难溶，过滤得到化合物 1(119.6mg)。Fr.11 经中低压快速分离色谱硅胶柱色谱(二氯甲烷 甲醇，80 11 1)梯度洗脱后，得到 5 个组分(Fr.11 1 Fr.11 5);Fr.11 2(73.1 mg)经凝胶柱层析，二氯甲烷 甲醇(1 1)洗脱得化合物2(49.3 mg)。Fr.20 经中低压快速分离色谱 C18 柱色谱(甲醇 水，20%100%)梯度洗脱后，得到 7个组分(Fr.20 1 Fr.20 7)，Fr.20 5(124.8mg)经 Sephadex LH 20 凝胶柱层析，甲醇洗脱得 6个组分(Fr.20 5 1 Fr.20 5 6);Fr.20 5 3(21.4 mg)经制备液相(波长 203 nm;甲醇 水，62 36;流速 3 mL/min)得化合物 3(8.2 mg)、化合物4(6.7 mg)。取乙酸乙酯萃取部位，经中低压快速分离硅胶柱色谱(二氯甲烷:甲醇，100 11 80)梯度洗脱后，得到 9 个组分(Fr.1 Fr.9)。Fr.3 经中压色谱分离凝胶 MCI，甲醇梯度洗脱后，在丙酮中重结晶得化合物 5(10.8 mg)。Fr.8 经中低压快速分离 C18 柱色谱(甲醇 水，3 7)洗脱得 3 个组分(Fr.8 1 Fr.8 3)，Fr.8 1 在丙酮中重结晶得化合物 6(10.2 mg)。3结构鉴定3.1化合物 1该化合物为白色丝状晶体(二氯甲烷)，醋酸酐 浓硫酸反应呈阳性。1H NM(600 MHz，DMSO d6)谱给出 1 个烯氢信号 5.12(1H，m，H 12)，且为环内双键;1 个连氧叔碳原子上的氢信号 2.46(1H，m，H 3);6 个甲基单峰氢信号 :0.77(s，CH3)，0.80(s，CH3)，1.07(s，CH3)，1.25(s，CH3)，4.28(s，CH3)，5.08(s，CH3)和两个甲基双峰信号 0.93(3H，d，J=6.0 Hz)，0.87(3H，d，J=6.0 Hz)。13C NM(151 MHz，DMSO d6)谱给出 1 个连氧碳信号 77.3(C 3);2 个烯碳信号 145.2(C 13)，124.5(C 12)，表明该化合物为乌苏 12 烯型五环三萜。13C NM(151MHz，DMSO d6):58.9(C 18)，55.2(C 5)，47.6(C 9)，42.0(C 14)，41.4(C 22)，40.0(C 8)，38.8(C 19，20)，36.8(C 1)，36.4(C 4)，34.9(C 10)，33.8(C 17)，32.9(C 7)，31.2(C 21)，28.9(C 15)，28.6(C 23)，28.0(C 28)，27.4(C 2)，26.6(C 16)，23.5(C 11)，23.4(C 30)，21.7(C 27)，18.4(C 6)，17.8(C 29)，17.0(C 26)，16.5(C 25)，15.9(C 24)。13C NM 谱数据与文献7 9，18 报道的数据基本一致，故鉴定化合物 1 为 urs12 en 3 ol(乌苏 12 烯 3 醇)。图 1化合物 11H NM谱图图 2化合物 113C NM谱图682023 年 1 月云南化工Jan 2023第 50 卷第 1 期Yunnan Chemical TechnologyVol.50，No.13.2化合物 2该化合物为白色粉末状固体。1H NM(600MHz，CH3OH+D2O)(图 3)给出 1 个连氧原子上的氢信号 5.64(C12 H)，1 个羧基上的氢信号 5.24(C3 OH)，7 个 甲 基 单 峰 氢 信 号 :0.94(s，CH3)，0.97(s，CH3)，1.01(s，CH3)，1.07(s，CH3)，1.09(s，CH3)，1.53(s，CH3)，1.55(s，CH3)。13C NM(151 MHz，CH3OH+D2O)(图 4)给出1 个羧基碳信号 180.0(C 28)，1 个连甲氧基碳信号 23.9(C 3)，其余碳信号 :15.8(C 25)，16.3(C 24)，17.7(C 26