大脑中动脉闭塞大鼠不同缺血再灌注时间术后状况比较_易婉莎.pdf

按摩与康复医学 2023年第14卷第4期 Chinese Manipulation and Rehabilitation Medicine,2023,Vol.14No.4方 药 研 究药学药理大脑中动脉闭塞大鼠不同缺血再灌注时间术后状况比较大脑中动脉闭塞大鼠不同缺血再灌注时间术后状况比较*易婉莎1，罗来2，3，许金森2，3，潘晓华2，3（1.福建中医药大学针灸学院，福建 福州 350108；2.福建省中医药科学院，福建 福州 350003；3.福建省经络感传重点实验室，福建 福州 350003）摘摘要要 目的目的：比较大脑中动脉闭塞(middle cerebralartery occlusion，MCAO）大鼠不同缺血再灌注时间术后部分功能状况，为MCAO模型缺血时间选择提供参考。方法方法：36只Sprague-Dawley（SD）大鼠采用改良线栓法制备MCAO模型，随机分为缺血再灌注1 h组、1.5 h组、2 h组。通过体质量、Longa评分、平衡木功能评分、脑梗死体积等指标，分析3组大鼠术后状况。结结果果：1.5 h组、2 h组大鼠体质量第7天较第1天体质量明显下降（P0.05）；1.5 h组、2 h组大鼠Longa评分第7天较第1天升高，且较同时段1h组相比得分高（P0.05）；1 h组大鼠平衡木评分第7天较第1天降低（P0.05），1.5 h组、2 h组平衡木评分在第3天、第7天比同时段1 h组较高（P0.05）；TTC染色可见1.5 h组、2 h组大鼠脑梗死体积大于1 h组（P0.05）。结论结论：1 h组大鼠脑损伤程度低，术后神经功能、运动功能恢复快；1.5 h组与2 h组各项评分结果相似，其功能状况无明显差别，但与1 h组比脑损伤严重。1.5 h和2 h更适合作为线栓法制备MCAO模型的再灌注时间点。关键词关键词 MCAO；缺血再灌注时间：术后状况 中图分类号中图分类号 R R743743.3 3 文献标识码文献标识码 A A 文章编号文章编号 10081008-18791879(20232023)0404-00900090-0404DOIDOI：1010.1978719787/j/j.issnissn.10081008-18791879.20232023.0404.026026Comparison of Postoperative Conditions in Rats With Middle Cerebral Artery Occlusion at Different Ischemia-Reperfusion TimesComparison of Postoperative Conditions in Rats With Middle Cerebral Artery Occlusion at Different Ischemia-Reperfusion TimesYI Wan-sha1，LUO Lai2,3,XU Jin-sen2,3，PAN Xiao-hua2,3(1.College of Acupuncture and Moxibustion,Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou,Fujian 350108;2.Fujian Academy of Chinese Medical Sciences,Fuzhou,Fujian 350003;3.Key Laboratory of Meridian Sensing,Fuzhou,Fujian 350003)AbstractObjectiveAbstractObjective:To compare the partial functional status of rats with middle cerebral artery occlusion(MCAO)after different ischemia-reperfusion time,so as to provide reference for the selection of ischemia time of MCAO model.MethodsMethods:36 Sprague Dawley(SD)rats were randomly divided into ischemia-reperfusion 1h group,reperfusion 1.5 h group and reperfusion 2 h group.The postoperative conditions of the threegroups were analyzed by the success rate of rat modeling,body mass,longa score,balance beam function score,cerebral infarct volume and so on.ReRe sultssults:The body mass of rats in 1.5 h group and 2 h group decreased significantly on the 7th day compared with the 1st day(P0.05);The longa scoreof rats in 1.5 h group and 2 h group on the 7th day was higher than that in the 1st day,and higher than that in 1 h group at the same time(P0.05);Onthe 7th day,the score of balance beam in the 1 h group was lower than that in the 1st day(P0.05),and on the 3rd and 7th day,the score of balancebeam in the 1.5 h group and the 2 h group was higher than that in the 1 h group at the same time(P0.05);TTC staining showed that the volume ofcerebral infarction in 1.5 h group and 2 h group was larger than that in 1h group(P0.05).ConclusionConclusion:In the 1 h group,the degree of brain injury wasmild,and the neurological and motor functions recovered quickly after operation;the scores of 1.5 h group and 2 h group were similar,and there wasno significant difference in their functional status,but the brain injury was more serious than 1 h group.1.5 h and 2 h can be used as the reperfusiontime points of MCAO model prepared by thread bolt method.KeywordsKeywordsMCAO；ischemia-reperfusion time；postoperative condition脑卒中，又称中风，是全球高致残率和高致死率的代表性疾病，由大脑中动脉或其分支的血管栓塞引起，其中缺血性脑卒中占绝大比例。我国卒中发病风险居全球首位，约40%的发病风险率意味着每5人中2人有罹患脑卒中风险1。2020年，我国40岁以上人群患脑卒中人数已达1780万，死亡患者约为230万，且相关数据呈上升趋势2。伴随老龄化社会的到来，我国脑卒中患病率并未得到缓解，脑卒中给患者及其家庭带来的经济负担、疾病负担仍在持续增加，对其展开相关研究已迫在眉睫。MCAO模型是最接近人类缺血性中风模型，缺血再灌注是制备模型的重要步骤，再灌注时间少至15min3，多至24h4，未见统一标准。不同缺血再灌注时间对MCAO大鼠术后状况是否产生不同影响，是制备MCAO模型的重要考虑的因素。目前最常用缺血再灌注时间是1h、1.5h、2h5，三个时间点有一定间隔，如能确定最佳缺血再灌注时间将提高MCAO模型制备效率。本研究分别以1h、1.5h、2h为缺血再灌注时间制备MCAO模型大鼠，通过对比各组大鼠的术后状况，寻找最适宜的缺血再灌注时间点，为MCAO模型制备提供参考。*基金项目基金项目：福建省自然科学基金面上项目（2022J01355）；福建省属公益类科研院所基本科研专项（2021R1003008，2022R1003009）；福建省卫健委科技计划项目（2021zyjc18）作者简介作者简介：易婉莎（1995-），女，在读研究生。研究方向：经络感传与针灸的作用机制研究。通讯作者通讯作者：潘晓华（1979-），女，副研究员，硕士导师。研究方向：经络感传与针灸的作用机制研究。90第4期易婉莎 等大脑中动脉闭塞大鼠不同缺血再灌注时间术后状况比较1 1材料与方法材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物 SPF 级雄性 SD 大鼠 36 只，体重为（28020）g，购自杭州医学院，饲养于福建省中医药科学院实验动物中心 许可证号：SCXK（浙）2019-0002；合格证编号：20211015Aazz0100000132。饲养条件：温度（222），湿度（5515）%，12 h明暗交替，自由进食饮水。饲养一周后随机分为3组，每组12只，拟制备缺血再灌注1 h、1.5 h、2 h MCAO模型大鼠，每组最终纳入实验数量以造模成功只数为准。1.1.2 主要仪器与试剂 小动物呼吸麻醉系统（深圳瑞沃德生命科技公司，R407)、L3800号大鼠用MCAO线栓（广州佳灵生物技术有限公司）、自制平衡木、2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC，美国 Sigma）、PBS 缓冲液（北京索莱宝公司）、通用型组织固定液（武汉塞维尔生物科技有限公司）。1.2 实验方法1.2.1 实验动物模型制作与分组 本实验使用线栓法制备MCAO模型6，麻醉：使用小动物呼吸麻醉系统进行吸入式短效全身麻醉，经5%浓度异氟烷诱导35 min后进入麻醉昏迷，将其置于手术台上固定，浓度降至1.5%2%维持麻醉。分离动脉：剔除大鼠颈部毛发，消毒，剪开，钝器分离其颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉。插栓：自颈外动脉进栓，后转至颈内动脉，向左上45 缓缓插入，阻塞大脑中动脉分叉，感觉手下有阻塞感后停止。缝合：进行切口缝合，停止麻醉，将大鼠放回笼中，注意保温，等待拔栓（模拟临床中风后自发再灌注现象）。拔栓：各小组分别于切口缝合后1 h、1.5 h、2 h进行麻醉，拔栓时缓慢轻柔，将线栓包被部分退至颈动脉分叉处，剪去多余线栓，随后放回笼中等待苏醒。1.2.2 平衡木实验 将大鼠置于一根长 30 cm，宽 1.5cm，平放在距离地面高30 cm处的木条上，观察其稳定性及四肢状况进行评分，得分为06分，见表1。分数越高，神经损伤越严重。将36只大鼠进行为期一周的术前适应训练，早晚各一次。造模后，将再灌注2 h组、1.5 h组、1 h组大鼠分别于术后第1、3、7天进行平衡木实验。表1 平衡木得分表得分0123456症状大鼠能够稳定在平衡木上大鼠需紧抓边缘稳定在平衡木上大鼠能够抓紧平衡木但一肢体从平衡木上垂落大鼠能够抓紧平衡木但两肢体从平衡木上垂落或在平衡木上旋转，坚持时间60 s试图在平衡木