酒精发酵工艺综合实验实验目的：1.了解酒精发酵工艺流程；2.掌握糖化醪液的制备方法；3.掌握反滴定法测残糖及酒精含量的测定；实验原理：玉米粉经双酶法处理制备成糖化醪液，在厌氧的培养条件下，利用自絮凝酵母菌发酵生成乙醇。葡萄糖发酵成乙醇的总反应式为：C6H12O6→2C2H5OH+2CO2+能量。通过对发酵醪液中残余糖的测定，判断酒精发酵的程度，并用酒精计测定酒精度。实验器材：1.仪器：高压灭菌锅、发酵罐、恒温培养箱、糖化锅、电炉、天平、滴定管、烘箱等；2.材料：玉米粉、YPD培养基、费林试剂、0.1%标准葡萄糖溶液、α-淀粉酶、糖化酶等；3.菌种：酿酒酵母2604，自絮凝酵母；实验内容：1.灭菌：①配置YPD培养基100ml*4(配方：葡萄糖3%，酵母粉0.4%，蛋白陈0.3%)；②黄、蓝枪头各一盒及漏斗；③发酵罐及罐内糖化醪液；2.糖化醪液的制备：①将玉米粉和水按1:5的配比加入锅中，电炉加热并不断搅拌，调节pH≈5.5-6.0；②加入糖化酶，升温至90-95℃，不断搅拌，并保持温度恒定，液化1.5h；③待液体降温至60℃，调节pH≈4.5，加入糖化酶，搅拌均匀，封口放入烘箱，60℃，糖化10-12h；④过滤得到糖化醪液，作为发酵底物，取2L(若不足加水补足)装到发酵罐内，灭菌备用；3.接种：①超净工作台开紫外线灭菌照射15~30min；②灼烧接种环，冷却后从斜面挂取一小环菌，分别接种到四瓶100ml的YPD培养基中，放入培养箱中30℃，培养24h；4.上罐：①将灭菌后的发酵罐，连接到发酵调控装置上。接好冷凝器和装置循环水管路，插好温度电阿极，设定控制温度为30℃，开搅拌，冷却发酵液；②连接通气装置，关闭搅拌后校正pH电极。校正完全后设定搅拌速率，打开搅拌；③在超净工作台内将四瓶YPD培养基沉淀后，弃去多余液体合并成200ml。通过漏斗迅速加入到发酵罐中，立即记录当前pH值；④同时取2管发酵液(离心管应已称重记录)，离心收集上清液用于反滴定法测定残糖，而管内的菌体洗两遍后放入烘箱烘干，24h后称量测得生物量；⑤发酵过程中应每间隔30min记录一次pH值，并自行设置时间间隔取发酵液来测定罐内残还糖含量及生物量；5.下罐①当残糖含量接近10g/L时，终止发酵。取100ml发酵液加入100ml水后，蒸馏出100ml液体，用酒精计测酒精度；②清洗实验仪器，发酵罐灭菌后放回原处；实验要求：1、运用生化过程工程策略设计实验方案：1）改变初始底物浓度；2）改变发酵方式，如批式、补料、连续等；3）改变通气，如微氧、好氧、阶段控氧等；4）改变发酵pH值；5）改变接种...
