高中生物 第一部分 微生物的利用课件 浙科版选修1.ppt

选修 1第一部分 微生物的利用,考点 一 培养基及无菌技术培养基(1)概念:由适于微生物生长繁殖需要的各种营养物质人工配制而成的基质。,(2)类型:,(3)培养基的成分:包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。,2.无菌技术(1)实验操作过程中，应从以下几个方面注意避免外来杂菌的污染:对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁、消毒。将用于微生物培养的实验用具和培养基等进行灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。,(2)消毒和灭菌:,【高考警示】不同器具选用的灭菌方法不同(1)接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法。(2)培养基、无菌水、玻璃器皿等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。(3)表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。,考点 二 大肠杆菌的培养和分离1.培养和分离实验步骤,2.保存菌种用接种环取出单菌落，用划线法接种在斜面上，37 培养24 h后，置于4 冰箱中保存。3.分离大肠杆菌的方法(1)划线分离法(方法简单易操作):通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面(也是分离纯化的方法)。在第一次划线后都从上次划线末端开始，目的是获得由单个细菌形成的标准菌落。,(2)涂布分离法(操作复杂，单菌落更易分开):将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。,【高考警示】划线分离法中接种环的使用注意事项(1)划线分离操作第一次划线及划线结束后需灼烧接种环，其目的不同:,(2)灼烧接种环后，需要等接种环冷却才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。,考点 三 分离以尿素为氮源的微生物1.实验原理(1)以尿素为唯一氮源的培养基培养细菌时，只有含有脲酶的细菌能够正常生长，据此可分离出以尿素为氮源的微生物。(2)细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3，使pH升高，使酚红指示剂变红。,2.实验步骤制备培养基:将已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基分别 倒入两个培养皿中，摇匀，平放至凝固。,制备细菌悬液:用1 g土样配制不同浓度的细菌悬液。,用涂布分离法分离细菌:将不同浓度的土壤稀释液分别加入到 有LB培养基和尿素培养基的培养皿中，并用玻 璃刮刀涂布到整个平面上。,培养:倒置培养皿，在37 恒温箱中培养24 h48 h。,观察:培养基中菌落数量。,3.实验分析(1)样品稀释:稀释原因:样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。稀释标准:选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数在30300之间,便于计数。,(2)与涂布平板有关的问题:平板倒置的原因:平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止培养基外溅:在倒平板的过程中，不能将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。,涂布器的灭菌:玻璃刮刀用70%酒精消毒，取出时，多余酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的玻璃刮刀在酒精灯火焰上引燃。(3)设置对照:可排除实验中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。,【思维拓展】常见选择培养基的用途不同(1)加高浓度食盐:用于筛选获得金黄色葡萄球菌。(2)加青霉素:用于筛选获得真菌(酵母菌和霉菌)，原理是青霉素能破坏原核生物的细胞壁，杀死原核生物。(3)缺少氮源的培养基，用于筛选得到自生固氮菌。(4)缺少碳源的培养基，筛选自养型微生物。,类型一 培养基及无菌技术【典例1】请回答下列与大肠杆菌有关的问题。(1)从生态系统的成分上看,大肠杆菌属于。(2)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。,根据用途划分,该培养基属于(固体、液体)培养基。该培养基中的碳源是。,(3)在微生物培养操作过程中,为防止杂菌污染,需对培养基和培养皿进行(消毒、灭菌);操作者的双手需要进行清洗和。空气中的细菌可用紫外线杀灭,其原因是紫外线能使蛋白质变性,还能_。(4)将配制好的培养基分装到试管中,加棉塞后若干支试管一捆,包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入中灭菌,温度为,时间为。灭菌完毕拔掉电源,待锅内压力自然降到大气压时,将试管取出。如果棉塞上沾有培养基,此试管应。,(5)使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅内倒入。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。若在灭菌前,没有排尽锅内的冷空气会导致_。(6)从一支试管向另一支试管接种时注意,接种环要在酒精灯_(选填“内焰”或“外焰”)灭菌,并且待接种环后蘸取菌种,试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管在适宜温度下培养,长成菌落后放入冰箱中保存。,【解析】(1)大肠杆菌营腐生生活,从生态系统的成分来看,大肠杆菌属于分解者。(2)表中的培养基配方中含有琼脂,是固体培养基,其中能为大肠杆菌提供碳元素的物质有蛋白胨、乳糖和蔗糖。(3)微生物培养过程中,培养基和培养皿要进行灭菌,操作者的双手要进行消毒;紫外线杀菌的原理是紫外线不仅能使蛋白质变性,还能损伤DNA的结构。,(4)玻璃器皿的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅,在压力为1 kg/cm2、温度为121条件下,灭菌15 min。若棉塞上沾有培养基,易被杂菌污染,应废弃。(5)使用高压蒸汽灭菌锅时要先加入适量水,否则没有高压蒸汽,还有可能损坏设备。(6)酒精灯外焰温度高,灭菌效果好。灼烧后待冷却后再蘸取菌种,否则会杀死菌种造成实验失败。,答案:(1)分解者(2)固体乳糖、蔗糖、蛋白胨(3)灭菌消毒损伤DNA的结构(4)高压蒸汽灭菌锅12115 min废弃(5)适量水锅内温度上升不到应有度数,使灭菌不彻底(6)外焰冷却4,【互动探究】(1)培养大肠杆菌除用题中所给培养基外,还可用何种培养基?提示:培养大肠杆菌常用LB液体培养基。(2)表中的培养基在配制时应如何操作?提示:表中的培养基中含有琼脂成分,配制时要不断搅拌,否则易引起琼脂糊底而使烧杯炸裂。,类型二 大肠杆菌的培养和分离【典例2】(2013浙大附中)大肠杆菌是生活在人和高等动物体内的一种常见细菌,在饮用水的检测中常用它作为水源是否受到污染的指示菌,在遗传学上常作为实验材料,在基因工程中常用它作为受体细胞,为人类的健康和科学技术的发展作出了许多贡献。请回答下列有关大肠杆菌的问题:,(1)在大肠杆菌培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑、和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、易培养、等优点,因此常作为遗传学研究的实验材料。(2)分离大肠杆菌时常用的接种方法是法和法。前者操作简单,后者更易分开,但操作复杂些。,(3)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当的时间,观察。(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数,要想使所得估计值更接近实际值,下列对操作过程说法不妥的是()A.严格操作、多次重复B.保证待测样品稀释的浓度比较合适C.倒平板培养D.计数所有菌落,取其平均值,(5)通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小、硬度和颜色等对细菌进行初步的鉴定(或分类)。(6)若用大肠杆菌进行实验,使用过的培养基及其培养物必须经过处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。,【解析】(1)大肠杆菌的培养除需要合适的营养条件外,还需要适宜的温度、酸碱度(pH)和渗透压。由于大肠杆菌变异类型容易选择、繁殖速度快,常作为遗传学研究的实验材料。(2)分离微生物常用的接种方法有划线分离法和涂布分离法。前者方法简单;后者单菌落更易分开,但操作复杂些。,(3)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当的时间,观察培养基上是否有菌落产生。若固体培养基被细菌污染,在适宜条件下培养一段时间,细菌会大量繁殖,形成菌落,可根据菌落数量的多少判断污染程度。(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数,要想使所得估计值更接近实际值,应该采用倒平板培养,并且严格操作、多次重复;保证待测样品稀释的浓度比较合适。,(5)对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。(6)因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素,并可能导致肠道出现严重症状,所以使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。答案:(1)温度酸碱度(pH)生活周期短(或繁殖快)(2)划线分离涂布分离单菌落(3)培养基上是否有菌落产生(4)D(5)菌落特征(6)灭菌,【变式训练】要获得遗传特性单一的大肠杆菌菌种,一般必须对原有的大肠杆菌菌种进行扩大培养、并利用纯化技术得到单菌落的菌种。请回答下列有关大肠杆菌的培养和分离实验的相关问题:(1)对买回来的大肠杆菌菌种进行扩大培养,一般用LB培养基,在培养基中为微生物提供碳源、氮源和能源的物质主要是,为调节渗透压,要加入一定量的。为进行大肠杆菌的分离,还要加入琼脂配制成固体培养基,并进行倒平板的操作。,(2)获得纯净微生物培养物的关键是_,为此,必须对培养器皿、接种用具和培养基进行严格灭菌。培养器皿和培养基一般采用法灭菌,接种环采用灼烧法灭菌。同时在接种或倒平板操作时,除了在超净台上进行操作并对实验者的衣着、手和实验空间进行严格清洁和消毒外,还必须以防止空气中的杂菌污染。,(3)大肠杆菌菌种的扩大培养一般采用液体培养基,接种后将培养基置于37摇床震荡条件下培养12小时。菌种的分离一般在固体培养基上采用法,并将培养皿以状态放置于适宜温度的恒温箱中,培养1224小时后,_,接种于固体斜面培养基上,37培养24小时后,得到的纯化菌种在条件下保存。,【解析】(1)LB培养基的主要成分有蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、水、琼脂,其中蛋白胨和酵母提取物为微生物提供碳源、氮源和能源,氯化钠可以调节培养基的渗透压,琼脂作为凝固剂。(2)微生物纯培养的关键是防止外来杂菌的污染,因此操作过程中要严格灭菌,培养器皿和培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌,接种环等接种器具采用灼烧法灭菌,对操作者的相关部位进行消毒,而接种时要在酒精灯火焰旁进行。,(3)大肠杆菌菌种分离采用划线分离法,接种后将培养皿置于恒温箱中倒置培养,以防培养过程中被污染;培养后菌种的保藏方法是:用接种环将单菌落挑出,接种于斜面培养基上,37培养24小时后置于4条件下保存。答案:(1)蛋白胨和酵母提取物氯化钠(2)防止外来杂菌的侵入高压蒸汽灭菌保证操作过程在酒精灯火焰旁进行(3)划线分离倒置将单菌落用接种环取出4,类型三 分离以尿素为氮源的微生物【典例3】(2012浙江高考)幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后,进行分离培养。实验基本步骤如下:配制培养基 灭菌、倒平板 X 培养 观察,请回答:(1)在配制培养基时,要加入尿素和酚红指示剂,这是因为Hp含有,它能以尿素作为氮源;若有Hp,则菌落周围会出现色环带。(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是灭菌。A.高压蒸汽B.紫外灯照射C.70%酒精浸泡 D.过滤,(3)步骤X表示。在无菌条件下操作时,先将菌液稀释,然后将菌液到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得菌落。(4)在培养时,需将培养皿倒置并放在中。若不倒置培养,将导致。(5)临床上用14C呼气实验检测人体是否感染Hp,其基本原理是Hp能将14C标记的分解为NH3和14CO2。,【解析】(1)幽门螺杆菌中含有脲酶,能将尿素分解成为NH3和CO2,故尿素为氮源。NH3为碱性,能使酚红呈红色,故菌落周围会出现红色环带。(2)尿素在高温下分解,故不能用高温灭菌法,只能采取过滤的方法。(3)由细菌和真菌培养操作步骤可知,X为接种。接种时,应将菌种均匀涂布在培养基上。为了获得单菌落,接种前应该稀释菌液。(4)为了形成单菌落还应该将培养皿倒置在恒温箱中。(5)用14C标记尿素,分解后标记物全部在二氧化碳中。,答案:(1)脲酶红(2)D(3)接种涂布单(4)恒温培养箱无法形成单菌落(5)尿素,【变式训练】下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方:,请根据以上配方,回答下列问题:(1)该培养基含有微生物所需要的营养物质,其中最主要的碳源是,氮源是。(2)该培养基按物理性质划分是培养基;按培养基的作用划分是培养基。,(3)该培养基具有选择作用的原因是_。(4)在该培养基中,可通过检测pH的变化来判断尿素是否被分解,依据的原理是_。(5)若用该培养基来鉴定某种细菌是否能分解尿素,可在培养基中加入指示剂,尿素被分解后指示剂变_色。,【解析】(1)葡萄糖是主要的碳源,为分解尿素的细菌提供能量。该细菌能分解尿素,尿素是主要的氮源。(2)琼脂能使培养基凝固,按物理性质划分是固体培养基。该培养基用来分离分解尿素的细菌,属于选择培养基。,(3)培养基中尿素是唯一氮源,其他微生物因缺乏氮元素而无法生长和繁殖,只有分解尿素的微生物才能生存。(4)尿素分解产生氨,氨呈碱性,使培养基pH升高。(5)碱性物质可使酚红指示剂呈现红色,尿素分解产生的氨呈碱性,可使酚红指示剂呈红色,以此检验尿素是否被分解。,答案:(1)葡萄糖尿素(2)固体选择(3)该培养基中,唯一的氮源是尿素,只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长和繁殖(4)在细菌分解尿素的化学反应中,细菌合成的脲酶将尿素分解成氨,氨会使培养基的碱性增强,pH升高(5)酚红红,1.(2013宁波模拟)微生物指的是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，绝大多数微生物是对人类有利的。请回答下列有关微生物的培养和分离的问题:(1)在培养微生物时，培养基和各种器皿必须是无菌的，一般的灭菌方法是_。,(2)“大肠杆菌的培养和分离”实验中，先用LB_进行扩大培养，再在LB固体平面培养基上进行_分离。在配制固体培养基时，为了使培养基凝固需用到的材料是_。在培养基上完成接种后，需将培养皿_，然后置于恒温箱中培养。,(3)尿素是_(物质)降解的产物，有一些细菌由于含有_酶，便可以通过降解尿素作为其生长的氮源。(4)在“分离以尿素为氮源的微生物”实验中，对照实验的培养基是_，实验组与对照组最后要观察并比较_的数目。,【解析】(1)培养微生物时，一般采用高压蒸汽灭菌法对培养基和各种器皿进行灭菌。(2)一般用液体培养基进行扩大培养，用固体培养基进行菌种分离和鉴定。分离微生物时常用的方法有划线分离法和涂布分离法。配制固体培养基时，常用的凝固剂是琼脂。为防止水滴滴落在培养基上污染培养基，需将培养皿倒置，在恒温箱中培养。,(3)蛋白质降解产生尿素，有一些细菌由于含有脲酶，能降解尿素，以尿素为氮源。(4)在“分离以尿素为氮源的微生物”实验中，LB全营养培养基培养的细菌为对照，该全营养培养基上各种细菌均可生长，故其上面菌落数目多于尿素培养基上的菌落数。,答案:(1)高压蒸汽灭菌(2)液体培养基 划线(或涂布)琼脂 倒置(3)蛋白质 脲(4)LB全营养培养基 菌落,2.(2013嘉兴模拟)观察下列实验操作的流程，回答相关问题:,A,接种,配制培养基,培养,观察,(1)如果A是取自野生植株的植物组织，接种前需对其进行灭菌消毒，正确的方法是_。A.高压蒸汽灭菌70%酒精浸泡5%次氯酸钠溶液浸泡B.高压蒸汽灭菌5%次氯酸钠溶液浸泡70%酒精浸泡C.5%次氯酸钠溶液浸泡70%酒精浸泡5%次氯酸钠溶液浸泡D.70%酒精浸泡5%次氯酸钠溶液浸泡5%次氯酸钠溶液浸泡,(2)如果A是大肠杆菌菌种，用于扩大培养接种，配制的培养基为_。(3)如果A是土壤稀释液，用于分离以尿素为氮源的微生物，则对照组配制的培养基为_，实验组配制的培养基使用的凝固剂是_，含尿素的溶液可以用_过滤使之无菌。将A中的细菌分离，常用的方法是_，接种以后，将培养皿倒置，37 恒温箱中培养后观察。用同浓度的土壤稀释液接种，实验组培养皿中的菌落数_对照组。能利用尿素的细菌菌落周围，有红色环带出现，其原因是_。,【解析】(1)若用自然生长的外植体进行组织培养，灭菌、消毒顺序为先用70%的酒精浸泡，再用5%的次氯酸钠溶液浸泡5 min，然后用另一5%的次氯酸钠溶液浸泡5 min，最后在超净台中用无菌水清洗。(2)常用LB液体培养基扩大培养细菌，用LB固体培养基分离微生物。,(3)从土壤稀释液中分离微生物时，对照组应为LB全营养培养基。制作培养基时，常用琼脂作为凝固剂。尿素在高温下易分解，不能用加热法灭菌，常用G6玻璃漏斗过滤，以除去杂菌。分离细菌常用的方法有划线分离法和涂布分离法。实验组中只有唯一氮源，并不是所有的微生物都能生存，故菌落数量少于对照组。脲酶分解尿素产生氨，氨是碱性物质，能使酚红变为红色。,答案:(1)D(2)LB液体培养基(3)LB全营养培养基 琼脂 G6玻璃漏斗 涂布分离法 少于 因为能利用尿素的细菌产生脲酶，将培养基中的尿素分解，产生氨使指示剂(酚红)呈红色,3.(2013宁波模拟)大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便中含有109个，且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，因而常将大肠杆菌的数量作为食品卫生的检测指标之一。请据此回答下列问题:,(1)测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用涂布分离法进行测定。该方法首先配制LB_培养基，进行高压蒸汽灭菌后冷却至60，在_旁倒在培养皿中形成平板；对奶茶样品进行一定倍数的稀释，取0.1 mL奶茶稀释液，加在培养皿的固体培养基上，用_涂布在培养基平面上，然后进行培养；观察统计培养皿中_数目；该数据比实际数值要_(高、低)，原因是_。实验完成后需要对培养基进行_处理，然后才能倒掉。,(2)若要对上述培养基中的菌种进行扩大培养，则需配制LB_培养基，灭菌后，将_在酒精灯火焰上烧红后冷却，然后蘸取单菌落中的菌体接种到新的培养基中，在适宜环境中培养_h即可。,【解析】(1)微生物的分离通常用固体培养基。为防止杂菌污染，要在酒精灯火焰旁倒平板。在用涂布分离法分离细菌时，为了使细菌均匀涂布在固体培养基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培养基上。通过观察菌落数推算细菌数目。培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落，因此观察到的菌落数可能比实际菌落数低。为了防止实验菌污染环境，实验完成后需要对培养基进行灭菌处理，然后才能倒掉。,(2)对微生物进行扩大培养，通常使用液体培养基。一般用接种环转移带菌的培养物。接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，然后蘸取带菌的培养物，放到新的培养基中。在液体培养基中，只要接种培养12 h，每毫升培养基中就有几亿个细菌。,答案:(1)固体 酒精灯火焰 玻璃刮刀(涂布棒)菌落 低 培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落 灭菌(2)液体 接种环 12,4.(2013杭州模拟)微生物与人类的生活、健康有着密切的联系。请回答下列有关微生物的问题。(1)无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。在组织培养过程中通常利用_对外植体进行消毒。(2)在果醋、泡菜的制作过程中，需要氧气的是_的制作；在制作果醋过程中，榨取的果汁非常浑浊，解决的方法是_。,(3)根据微生物的特点，可以利用相应的培养基进行分离或培养，如用_的培养基筛选能分泌脲酶的细菌；用_的培养基培养苹果青霉，以提高果胶酶的产量。(4)在微生物培养或分离过程中，下列操作不恰当的是_。A.在超净台中进行接种时应该关闭紫外灯B.扩大培养时必须保证氧气的供应C.控制液体培养基中营养物质的浓度D.空白的平板培养基需进行无菌实验,(5)从土壤中分离能分解尿素的细菌时，通常在尿素培养基中添加酚红，用以指示脲酶的分泌情况，其原理是尿素被脲酶分解产生的_可以使酚红变色。,【解析】(1)在组织培养过程中通常利用次氯酸钠对外植体进行消毒。(2)果醋的制作需要氧气，泡菜的制作需要厌氧环境。在制作果醋过程中，榨取的果汁非常浑浊，是因为细胞粘连在一起，形成组织块，应该使用果胶酶使细胞分散开。(3)分泌脲酶的细菌能以尿素为氮源，据此可分离出此种细菌。苹果青霉中含有果胶酶，为该青霉提供充足的果胶能促进它的快速繁殖和生长，能生产更多的果胶酶。,(4)为防止伤害操作者，在超净台中进行接种时，应当关闭紫外灯，A项正确。扩大培养时，根据微生物的特点确定是否该提供无菌氧气，B项错误。液体培养基中营养物质的浓度不宜过低，营养物质不充足，影响生长；也不能过高，造成细胞失水，抑制微生物生长，C项正确。空白的平板培养基可作为对照，以证明培养基中无菌，D项正确。(5)脲酶分解尿素产生氨，氨是碱性物质，能使酚红变为红色。,答案:(1)次氯酸钠(2)果醋 果胶酶处理(3)以尿素为唯一氮源 富含果胶(4)B(5)氨,【易错提醒】选择培养基一般只生长特定选择的微生物培养基中加入特定条件或特定碳源或特定氮源，只有某种或某类微生物才能存活。示例如下:(1)以尿素作为唯一氮源的选择培养基，能分离出含脲酶的微生物；(2)高盐、强酸、无氧等特定条件选择耐盐、耐酸、厌氧的微生物；(3)根据是否含有机碳选择自养、异养微生物。,5.(2011新课标全国卷)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题:(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于_培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_和_。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。,(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。,【解题指南】解答本题时要注意以下两点:(1)强调获取信息的能力:实验目的是筛选能高效降解原油的菌株，原油就是含碳的有机物。(2)引导学生回顾实验室常用的灭菌方法。,【解析】(1)实验目的是为了筛选出可以分解原油的高效菌株，因此在筛选时选择性培养基的碳源为原油。(2)纯化分离微生物的方法有两种:划线分离法和涂布分离法；灭菌的方法有三种:灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。答案:(1)原油 选择(2)划线分离法 涂布分离法(3)强(4)干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰,6.(能力挑战题)尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解,就不能很好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们为探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题:,(1)此培养基能否用于植物组织培养？_。理由是_。(2)培养基中加入尿素的目的是筛选_，因此这种培养基属于_培养基。(3)目的菌生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的_，实验过程中振荡培养的主要目的是_。(4)转到固体培养基上时，常采用_的方法接种,获得单菌落后继续筛选。,(5)下列材料或用具:培养细菌用的培养基与培养皿，玻璃棒、试管、三角瓶和移液管，实验操作者的双手。其中需要灭菌的是_；需要消毒的是_。(填序号)(6)简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理_。,【解题指南】(1)知识储备:微生物分离培养的方法。(2)解题关键:分离降解尿素的细菌的培养基与植物组织培养所需的培养基成分不同。以尿素为唯一氮源的培养基上只有含有脲酶的细菌能够生长。,【解析】(1)筛选降解尿素的细菌的培养基不含有植物激素，而植物组织培养时需要在培养基中添加植物激素以调节植物的生长发育。(2)加入尿素的培养基能够筛选出降解尿素的细菌，属于选择培养基。(3)目的菌生长所需的碳源和氮源来源于培养基中的含碳和含氮物质，目的菌的生长过程需要氧，培养时补充氧气常用振荡方法。(4)在固体培养基上筛选细菌时，常用划线分离法或涂布分离法进行接种。(5)实验中培养,基及器具需灭菌处理，操作者的双手则需消毒处理。(6)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶催化尿素分解为氨，pH 升高，使酚红指示剂变红，从而选择出能降解尿素的细菌。答案:(1)不能 缺少植物激素(或缺少植物生长所需要的各种营养)(2)目的菌(分解尿素的细菌)选择,(3)尿素、葡萄糖 为目的菌提供氧气(4)涂布分离(5)和(6)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶催化尿素分解为氨，pH 升高，使酚红指示剂变红,