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临床医学检验技师考试辅导　　　　　 临床化学 　　　　　　　　　 　临床化学常用分析技术 临床化学常用分析方法 　　一、光谱分析（分光光度技术） 　　利用各种化学物质所具有的发射、吸收或散射光谱谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的技术，称为光谱分析技术。具有灵敏、快速、简便等特点，是生物化学分析中最常用的分析技术。 　　 　　 　　二、电泳分析 　　在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳。 　　 　　三、离心技术 　　离心技术分为制备离心技术和分析离心技术。制备离心技术主要用于物质的分离、纯化，而分析离心技术主要用来分析样品的组成。 　　 　　四、层析技术 　　层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由固定相和流动相组成。 　　 　　五、电化学分析技术 　　利用物质的电化学性质，测定化学电池的电位、电流或电量的变化进行分析的方法称为电化学分析法。包括电位法、电导法、电容量分析法。 　　离子选择电极法：离子选择电极（ISE）能对某特定离子产生响应，在一定范围内，其电位与溶液中特定离子活度的对数呈线性关系，因此可用离子选择电极来定量分析某些离子的活度或浓度。 　　例题 　　用于分离不同分子大小蛋白质的方法是 　　A.琼脂糖凝胶电泳 　　B.凝胶层析 　　C.密度梯度离心法 　　D.免疫比浊法 　　E.电化学分析法 　　[答疑编号700818140101]   【正确答案】B 血清酶催化活性浓度和代谢物浓度检测技术 　　一、酶反应动力学原理 　　酶反应动力学主要研究酶催化反应的过程与速率，以及各种影响酶催化速率的因素，定量时的观察对象是总单位时间内底物的减少或产物增加的量。 　　当底物[S]＞＞Km时，公式可近似为V＝Vmax；从理论上说只有测定的是酶Vmax，反应速度才和酶量成正比。 　　 　　二、酶活性的定义及单位 　　在实验规定的条件下（温度、最适pH、最适底物浓度时），在1分钟内催化1μmol底物发生反应所需的酶量作为1个酶活力国际单位（U）。 　　习惯用U／L来表示体液中酶活性浓度。 　　 　　三、测定酶活性浓度的两大类方法 　　（一）固定时间法（取样法） 　　（二）连续监测法：酶耦联法（指示酶、辅助酶） 　　 　　 　　（三）影响酶活性测定的因素 　　1.底物浓度的影响：底物的种类和浓度。多种底物中，Km最小的底物往往是此酶的生理底物。 　　2.反应体系的最适pH、缓冲液的种类和浓度。 　　3.温度的控制：37℃。 　　 　　四、代谢物浓度酶法测定 　　（一）代谢物酶促终点法测定 　　1.一步法：最简单的底物法测定。 　　2.酶促耦联法：工具酶（指示酶、辅助酶） 　　在临床生化测定中，最常用的耦联指示系统有两个：一个是脱氢酶系统，另一个为氧化酶系统。 　　脱氢酶系统：测定NAD＋或NADP＋在340nm处的吸光度增高或下降来计算被测物的浓度。但会受到内源性脱氢酶及其底物如乳酸脱氢酶和乳酸／丙酮酸的干扰。 　　（二）动力学法测定：实际操作中，测定两个固定时间的吸光度差值，只要此期间待测物消耗＜5%，就可以采用标准浓度对照法计算样本浓度，所以动力学法有时又称为固定时间法。 　　与终点法相比，动态法测定中待测物无须完全转化，故工具酶的用量较少。 　　产物的堆积和样品色原对动态法影响较小，而对终点测定法影响较大。如碰到乳糜或溶血，在做终点法测定时，有时需设样本空白。 　　　　　　 第3页