转基因动物与动物生物反应器TransgenicAnimalsandMammaryGlandBioreactor1转基因动物的制备方法2转基因动物的应用3乳腺生物反应器4基因打靶转基因动物•基因工程技术•胚胎工程技术•转基因动物（transgenicanimal）是指借助基因工程技术将外源基因导入受体动物染色体内，外源基因与动物基因整合后随细胞的分裂而扩增，在体内表达并能稳定地遗传给后代的动物。转基因动物转基因动物转基因动物的命名•原代转基因动物:founderG0G1G2•拟人化命名1982年,Palmiter生产超级小鼠世界上第一只转基因动物:转入了生长激素基因的巨鼠（supermouse）哺乳动物转基因技术的主要环节1目标基因克隆和体外重组2外源基因的导入3外源DNA整合、转录及表达的分子检测4转基因动物品系或品种的建立1转基因哺乳动物的制备方法显微注射法逆转录病毒载体感染精子载体介导法胚胎干细胞介导法细胞核移植技术YAC介导的基因转移1.显微注射法操作程序如下：首先，向供体母鼠注射孕马血清，48小时后再注射人绒毛膜促性腺激素，使其超排卵（排卵数可达25枚）。然后，将此鼠与雄鼠交配获取受精卵，随后将构建的外源基因在体外用显微注射器注射到受精卵的卵原核中。显微注射完成后，将受精卵移植到假孕母鼠输卵管内，大约3周后，代孕母鼠产下转基因鼠。MicroinjectionintothePronucleus克隆DNA供体母鼠酶解、分离、纯化、定量注射激素（PMSG，HCG）与雄鼠交配目的基因DNA片段鼠受精卵显微注射（卵原核中）注射DNA的受精卵输卵管移卵假孕母鼠表型分析胎鼠组织或幼鼠尾巴取出鼠胚胎或待娩幼鼠制备DNA外源基因的整合检测确定转基因鼠传代转基因鼠？？？显微注射法的优点：a、转移率较高、整合效率达30%；b、外源基因长度可达数百Kb；c、方法相对简单；d、导入过程直观。缺点：设备昂贵、操作复杂；随机整合、首尾相连的多拷贝；转基因效率较低；常造成插入位点附近宿主DNA大片段缺失、重组等突变，出现动物严重生理缺陷。2．逆转录病毒载体感染法•原理：利用携带外源基因的逆转录病毒感染胚胎是最早使用的动物转基因方法之一。其基本原理足当逆转录病毒的RNA进入细胞后，逆转录成DNA(DNA前病毒)，依靠逆转录病毒的整合酶及其末端特异的核苷酸序列，DNA前病毒可整合到染色体上，从而将其所携带的外源基因插入到染色体上。逆转录病毒载体•逆转录病毒感染法特点优点：在各种转基因方法中，逆转录病毒感染法的转基因效率是最高的，且为单拷贝随机整合。缺点...
