1CHAPTER2细胞生物学研究方法ExperimentalApproachesforStudyingCells2OUTLINE2.1显微成像技术（TECHNIQUESOFMICROSCOPY）2.2细胞组分的分析方法（TECHNIQUESOFCYTOCHEMISTRY、CELLSORTING、ISOLATIONOFCELLCOMPONENT）2.3细胞工程技术（CELLENGINEERING）2.4组学研究技术(GENOME、TRANSCRIPTOMICS、PROTEOME)32.1TECHNIQUESOFMICROSCOPY镜像形成的三要素:照明系统(illumination)样品(sample)透镜系统(optics)物镜:玻璃vs电磁透镜目镜：玻璃vs荧光屏可见光vs电子束LightElectron光学显微镜电子显微镜(TheLightMicroscope)(Electronmicroscope)42.1.1光学显微镜（TheLightMicroscope）2.1.1.1技术参数：放大率(magnification,M)M=物镜放大率X目镜放大率分辨率（resolution,R）:分辨出相邻两个物点间的最小距离R=0.61λ/NA（λ:波长，可见光0.4~0.7μm）显微镜的数值孔径(numericalaperture,NA)NA=nsin（n，介质折射率;，镜口角）???最大分辨率70°n:1.5(油)λ:450nm(可见光)200nm(紫外光)52.1.1.2常用光学显微镜：◆普通双筒显微镜(binoularmicroscope)◆相差显微镜:(phasecontrastmicroscope)◆微分干涉显微镜(differentialinterferencemicroscope）◆暗视野显微镜(darkfieldmicroscope)◆荧光显微镜(fluorescencemicroscope)◆激光共聚焦显微镜(laserconfocalscaningmicroscope)6倒置显微镜正置显微镜7◆相差显微镜：(phasecontrastmicroscope)无色、透明、活细胞结构环形光阑（annulardiaphragm）相位板（annularphaseplate）标本密度不同导致光程差振幅差8DIC◆微分干涉显微镜：(differentialinterferencemicroscope）更强立体感，便于显微操作9◆暗视野显微镜(darkfieldmicroscope)：物体轮廓，无微细结构丁达尔现象：光斜射到样品上10◆荧光显微镜：(fluorescencemicroscope)紫外光源激发细胞内荧光标记染料ExcitationEmission11◆激光共聚焦显微镜：(laserconfocalscaningmicroscope)激光扫描、分辨力提高、可立体三维重建122.1.2电子显微镜(Electronmicroscope)电子束波长比光短100000倍亚显微结构（超微结构）：R<1nm基本结构◆电子光学系统由照明系统、标本室、成像系统、观察窗和记录用的照相机等组成；◆真空系统是保持电镜的真空度；◆电子学系统即供电系统，需要高压稳压。13电子显微镜种类：◆透射电子显微镜：细胞内部结构观察(transmissionelectronmicroscope)◆扫描电子显微镜：样品表面形貌特征观察(sca...
