植物组织培养实验(7)(1).ppt

实验七剑兰花药培养,（一）实验目的掌握花药培养基本过程，熟悉花药培养的基本原理和主要应用。,（二）实验原理花药培养是指将发育到一定阶段的花药接种到人工培养基上，诱导其花粉粒改变发育进程，形成花粉胚或愈伤组织，进而分化为苗的技术。最适宜的诱导时期是单核小孢子时期。不同的激素配比会影响小孢子的发育途径，使其形成花粉胚或愈伤组织。花粉培养可获得单倍体植株，通过秋水仙碱或再生技术可进一步获得同型纯合二倍体。,（三）实验材料和用具 实验材料：剑兰花蕾实验药品：灯用酒精、70酒精、2次氯酸钠、无菌水。,灭菌培养基：MS8：MS+2.0mg/L NAAMS9：MS+3.0mg/L 2,4-D+3.0mg/L KT实验用具：无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。,（四）实验步骤 进入无菌室，用70乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒精灯。剑兰花蕾70乙醇浸泡30s，2次氯酸钠浸泡15min，无菌水冲洗35次，无菌滤纸吸干。小心剥取花药（尽量防止触伤花药壁，尽量除尽花丝），每瓶接种3粒。每组每种培养基4瓶。光照培养箱27、光照14h/d培养。,作业,1周后观察培养体系有无污染，计算每个三角瓶内染菌花药数和外植体外的菌落数，分析染菌原因。1周后计算每种培养基的愈伤组织诱导率（形成愈伤组织的花蕾数/总接种花蕾数100）。判断哪种培养基更适合诱导愈伤组织？,