植物组织培养实验(3)(1).ppt

实验三菊花花瓣组织培养,（一）实验目的掌握菊花花瓣愈伤组织和不定芽的诱导，进一步熟练无菌操作过程。,（二）实验原理菊花是异质六倍体，遗传背景复杂，杂交后代性状分离严重，并且自交不亲和性高，所以通过自交获得自交系可能性极小，通过杂交培育菊花新品种需要的时间也很长，因此，组培技术在菊花品种的改良等方面起着较为重要的作用。离体条件下，菊花花瓣能诱导出愈伤组织和不定芽，然后再分化成完整植株，变异频率较高，选育效率高，是选育菊花新品种的良好手段。,（三）实验材料和用具 实验材料：菊花花瓣实验药品：MS、1mg/ml NAA、1mg/ml 2,4-D、1mg/ml 6-BA、1mol/L HCl、1mol/L NaOH、蒸馏水、灯用酒精、70酒精、2次氯酸钠，吐温-80，无菌水。,灭菌培养基：MS2：MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAAMS3：MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAAMS4：MS+2.0mg/L 6-BA+2.0mg/L NAA实验用具：天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。,（四）实验步骤 配制以下培养基各100ml：MS5：MS+1.0mg/L 6-BA+2.0mg/L NAAMS6：MS+1.0mg/L 6-BA+3.0mg/L 2,4-D取200ml烧杯2只，标记，各加入4g MS培养基和100ml蒸馏水，加热直至完全溶解。各加入 1mg/ml 6-BA 100l，并不断搅拌。分别加入 1mg/ml NAA 200l和1mg/ml 2,4-D 300l，并不断搅拌。用1mol/L HCl或NaOH调节pH至5.86.0。,分装。将2种培养基分别分装到4个三角瓶中，做好标记。灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121、0.1MPa条件下灭菌1520min。操作按仪器操作步骤进行。灭菌后待压力下降到0Pa时取出，凝固后待用。,4.接种 菊花花瓣，洗净，70乙醇浸泡30s，2次氯酸钠液（加12滴吐温-80）浸泡20min。进入无菌室，用70乙醇擦洗双手、盛放外植体的烧杯外壁和工作台面，点燃酒精灯。将次氯酸钠倒掉，加无菌水冲洗35次。剪成3mm小片，每瓶接种5片。每组每种培养基各4瓶。光照培养箱25、60光照16h/d培养。,作业,1周后观察培养体系有无污染，计算每一个平皿内染菌外植体数和外植体外的菌落数，分析染菌原因。1周后计算每种培养基的花瓣愈伤组织（不定芽）诱导率（形成愈伤组织（不定芽）的外植体数/总接种外植体数100）。,实验报告内容,实验名称实验目的实验原理实验材料和用具实验步骤实验结果与分析,