基于新型纳米酶构建适体传感器用于食品中AFB_%281%29的检测.pdf

基于新型纳米酶构建适体传感器用于食品中 AFB1的检测廖文椿，陈本奇，杨梦，陈志雄，李紫滢，孟爽，杨通，杨云慧*，黄龙*，胡蓉(云南师范大学化学化工学院，云南昆明650500)摘要：黄曲霉青素 B1(AFB1)是天然食品中最为常见的一类污染物，其毒性和致癌性也最强.实验合成了具有类过氧化氢酶性质的金属有机骨架材料 MnMOF 纳米酶，经高温炭化后得到 MnMOF-C，通过掺杂铂纳米颗粒得到复合材料 PtNPsMnMOF-C，发现其催化能力可进一步增强.将该复合材料作为标记物用于制备 AFB1适体传感器，利用适体的高度亲和力与高特异性，使其与 AFB1发生特异性结合从电极表面解离下来，导致 PtNPsMnMOF-C 催化过氧化氢产生的电流信号减小，从而实现食品中 AFB1的定量检测.在 0.001100ng/mL 范围内，随着目标物 AFB1质量浓度的增大，响应信号逐渐降低.研究构建的适体传感器灵敏度高、耗费时间短，可用于真实大米样品中 AFB1的检测，展现出良好的应用前景.关键词：纳米酶；黄曲霉毒素 B1；金属有机骨架材料；适体传感器中图分类号：O657.1文献标志码：A文章编号：02587971(2023)04091109黄曲霉毒素(Aflatoxin,AF)是由黄曲霉菌产生的毒素，具有强烈的致癌性，是一种常见的食品污染物，其主要成员为 B1、B2、G1、G2，天然食品中受黄曲霉毒素 B1(AflatoxinB1,AFB1)污染最为常见，其毒性和致癌性也最强1.肝脏是人类和动物中 AFB1攻击的最早目标2，AFB1进入肝脏后被代谢，同时肝脏自身也会受到损害.含有 AFB1的水产饲料会损害鱼虾胃肠道，改变新陈代谢，对生长造成不利影响，给养殖业带来经济损失3-4.与此同时，通过受到污染的鱼虾，毒素最终通过食物链到达人体并积累在体内，进一步引发疾病.当儿童长期摄入含 AFB1的饮食，则会导致发育迟缓5，对于成年人来说，其半致死量仅为 10mg/kg6.目前，已开发的 AFB1的检测方法有表面增强拉曼光谱(Surface-EnhancedRamanSpectroscopy,SERS)法7、比色法8、荧光法9、液相色谱质谱联用(LiquidChromatographyTandemMassSpectro-metry,LC-MS/MS)法10、免疫色谱法11等.这些方法灵敏度高、可靠性好，但是也仍然面临需要大型仪器和熟练操作人员的要求、耗时长等问题，这使它们无法更好适应快速、高效、低成本检测AFB1的要求.纳米酶是一类具有天然酶催化活性的纳米材料，与天然酶相比，纳米酶具有稳定性好、催化能力强、成本低、结构可调控并容易实现功能化等优点.自从 2007 年 Gao 等12首次发现 Fe3O4具有类似过氧化物酶的内在酶模拟活性以来，纳米酶因自身独特的优点迅速受到广泛关注与研究.目前，各种新型的纳米材料已经被开发并证明具有类过氧化物酶、氧化物酶、超氧化物歧化酶、还原酶等活性，例如金属纳米材料13、共价有机骨架材料14、金属氧化物/硫化物15-16、碳基材料17-18、金属有机骨架(Metal-OrganicFrameworks,MOFs)材料19等.其中，MOFs 是一类由有机配体与中心金属离子配位组装而成的具有分子内孔隙的无机有机杂化晶体，由于配体与金属离子在空间排列方式的不收稿日期：2022-08-05；接受日期：2022-11-23；网络出版日期：2023-02-17基金项目：国家自然科学基金（21765026）.作者简介：廖文椿（1998），女，云南人，硕士生，主要研究电化学及生物传感器.E-mail：.*通信作者：杨云慧（1963），女，云南人，博士，教授，主要研究电化学及生物传感器.E-mail：.黄龙（1988），男，广西人，博士，主要研究电化学.E-mail：.云南大学学报（自然科学版），2023,45（4）:911919JournalofYunnanUniversity:NaturalSciencesEditionDOI:10.7540/j.ynu.20220397同，可形成不同维度的材料.MOFs 可作为包裹天然酶的载体，由于 MOFs 的高稳定性，使得酶的活性得以保护，这为天然酶的稳定存在提供了新的方法；此外，MOFs 具有较大表面积，孔隙率高，可提供丰富的催化位点，通过改变有机配体以及中心金属离子可实现 MOFs 材料结构与功能的多样性.Liu 等20以 ZIF-67 为模板，通过调节 ZIF-67 与Cu(NO3)2质量比，成功制备出了具有类过氧化物酶、类谷胱甘肽过氧化物酶、类超氧化物歧化酶和类漆酶活性的纳米球，为合成具有多种酶活性的纳米酶材料提供了新思路.本研究以 Mn2+为中心金属离子，2,5-二羟基对苯二甲酸为有机配体制备具有类过氧化物酶活性的 MnMOF.为进一步提高纳米酶的催化活性，将材料进行高温炭化并负载铂纳米颗粒(PtNPs,PtNanoparticles)得到 PtNPsMnMOF-C 复合材料，再将其修饰到 AFB1适体链上，通过催化过氧化氢产生差分脉冲(DifferentialPulseVoltammetry,DPV)电流信号，利用适体的高度亲和力与特异性，构建电化学适体传感器用于 AFB1的定量检测.当体系中有目标物 AFB1存在时，目标物会与 AFB1适体链发生特异性结合从电极表面解离下来，导致电极表面剩余纳米酶减少，电流信号随之减小，从而实现 AFB1的定量检测.实验以电流差值 I 作为响应信号，当 AFB1质量浓度在 0.001100ng/mL 时，响应信号与 AFB1质量浓度对数成反比，线性相关系数为 0.9965.该传感器具有较好的选择性，响应迅速、灵敏度高，在食品中 AFB1的检测领域中显示出良好的应用前景.1实验步骤1.1试剂与仪器1.1.1 试剂氯化镁（分析纯，98%）、氯化钠（分析纯，99.5%）、无水乙醇（分析纯，99.7%）、氧化石墨烯（GO，单层，98%）、L-抗坏血酸（AA，分析纯，98%），上海易恩化学技术有限公司；氯铂酸（H2PtCl6，99.995%）；四水合氯金酸（HAuCl44H2O，99.99%）、四水合氯化锰（MnCl24H2O，分析纯，99.0%）、二水合钼酸钠（分析纯，99.0%）、2,5-二羟基对苯二甲酸（DHTP，HPLC，98%）、羧甲基纤维素钠（CMC，USP 级，8001200mPas），上海阿拉丁生化科技股份有限公司；硼氢化钠（NaBH4，分析纯，98%）、硫脲（分析纯，99%），上海麦克林生化科技有限公司；氯化钾（分析纯，99.5%）、冰醋酸（分析纯，99.5%）、亚铁氰化钾（K4Fe（CN）6，分析纯，99.5%）、铁氰化钾（K3Fe（CN）6），99.5%），天津市风船化学试剂科技有限公司；黄曲霉毒素B1（98%，MedChemExpress）；AFB1aptamer:5-NH2-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCC-3;DNA1:3-SH-CACGTGCCCAACTTTTTTTTT-5.实验所用水均为去离子水；大米来自当地超市.1.1.2 仪器玻碳电极(GCE)（天津恒晟科技发展有限公司）、CHI660D 型电化学工作站（上海市辰华仪器公司）、真空干燥箱 DZF-6020（上海博讯实验有限公司）、T 超声波清洗器（上海市科道超声仪器有限公司）、GL-20M 离心机（长沙市湘仪离心机有限公司）、FEITecnaiG2F30S-TWIN 透射电子显微镜（美国 FEI 公司）.1.2材料制备1.2.1 MnMOF 的合成参照 Zhou 等21的方法，将 0.8784gMnCl4H2O 以及 0.2664gDHTP 加入到乙醇/水/DMF(体积比 1115)的混合溶液中，待固体充分溶解混匀后，转移至聚四氟乙烯高压反应釜中，在 135 下反应 24h.反应结束后自然冷却，将得到的红棕色固体分别用甲醇和 DMF 离心洗涤 2 次，最后在真空干燥箱中 60 干燥 24h.1.2.2 MnMOF-C 的合成将所制得的 MnMOF置于小瓷舟内，在管式炉中于 600 炭化 4h，冷却后就可得到 MnMOF-C.1.2.3 PtNPsMnMOF-C 的合成参照Guo 等22的方法，准确称取 11mgMnMOF-C 分散在 1mL去离子水中，超声2h 使其分散均匀，分别加入200L20mmol/LH2PtCl6、320L300mmol/LNaBH4溶液，快速搅拌并过夜，再用去离子水洗涤 3 次，最后置于真空干燥箱 60 过夜烘干.1.2.4 AFB1适体链的修饰基于 Yang 等23的方法，先将 PtNPsMnMOF-C 分散在去离子水中配制成 11mg/mL 的溶液，再将 55L100mol/L的 AFB1适体链加入到上述溶液中，在恒温培育箱中于 4 下持续混匀并培育过夜，使 PtNPsMnMOF-C 通过 PtNH2键结合到 AFB1适体链上.然后用 1%MCH 封闭非活性位点 30min，采用磷酸盐缓冲液（PBS）离心洗涤 3 次，得到 PtNPsMnMOF-C 所修饰的 AFB1适体链，最后，将其分散在PBS 中，于 4 下保存.912云南大学学报（自然科学版）http:/第45卷1.2.5 MoS2/GO 的合成参考 Xiang 等24的合成方法，将 1.903gNa2MoO42H2O 和 1.2095g 硫脲溶解在 100mL 去离子水中，接着将 0.1345gGO 添加到上述溶液中，将其充分超声溶解均匀后，转移到聚四氟乙烯高压反应釜中，在 210 下保持 24h.之后，离心收集黑色沉淀物，用蒸馏水和乙醇洗涤 3 次，然后于烘箱中 80 干燥 12h.1.2.6 AuNPsMoS2/GO 的合成参考 Yuwen等25的合成方法，准确称量 10mgMoS2/GO 分散在 2mL 去离子水中，超声溶解 2h，依次加入 500L 的 100mmol/LAA、100L 的 100mmol/LCMC、100L 的 48.5mmol/LHAuCl43H2O 并充分混合.然后在干燥箱中 60 加热 5min，用去离子水离心洗涤 3 次后置于真空干燥箱中，于 60 干燥 12h.1.2.7 0.5%壳聚糖溶液的配制准确称取 0.02g壳聚糖，分别加入冰醋酸 14L 和超纯水 4mL，并持续搅拌 24h，最后置于 4 下保存.1.2.8 AFB1标准溶液配制将 AFB1(1mg)配制成 1mg/mL 的原液，再用去离子水稀释至不同质量浓度，于 4 下保存.1.3检测原理本研究以 AuNPs/MoS2/GO 为基底材料固定与 AFB1适体部分互补的 DNA 链（SH-DNA1），AuNPs 的加入可增强基底材料的导电性和电极表面电子的传递效率，除此以外，还可利用Au-S 将 AFB1适体部分互补的互补链 SH-DNA1固定在电极表面.随后采用 MCH 封闭电极表面的非特异性结合位点；而修饰有 PtNPsMnMOF-C 的AFB1适体可与电极表面的 SH-DNA1通过碱基互补配对原则进行杂交，形成双链结构，从而构建AFB1适体传感器.利用 PtNPsMnMOF-C 的类过氧化物酶的催化性能，检测其催化溶液中 H2O2还原的电流信号.当加入目标物 AFB1时，目标物会与 AFB1适体发生特异性结合使适体从电极表面解离下来，从而导致电极表面的纳米酶减少，电流响应信号随之减小.检测原理如图 1 所示.1.4适体传感器的制备将 GCE 分别用 1.5m、0.5m、50nm3 种不同粒径的 Al2O3抛光粉在麂皮上进行抛光，随后用硝酸水（体积比 1:1）溶液、无水乙醇、去离子水分别进行超声洗涤 5min，晾干备用.按体积比 15 准确量取 0.5%的壳聚糖与 5mg/mLAuNPsMoS2/GO 溶液并混合均匀，接着取 10L 混合溶液滴加到处理好的 GCE 表面，室温下晾干.取 10L2.5mol/LDNA1滴到电极表面，37 下 培 育 60min；再 量 取 10L1%的MCH 滴加至电极表面，在恒温培育箱中于 37培 育 15min.然 后 取 10L 修 饰 有 PtNPsMnMOF-C 的 AFB1适体链继续滴加在电极表面，室温下培育 60min；最后移取 10L 配制好的 AFB1溶液滴加至电极表面，室温培育 60min（空白对照组将 AFB1换成 10mmol/LPBS 溶液即可）.备注：每次培育后需用 34 滴 10mmol/L图1AFB1适体传感器的构建及检测原理Fig.1ConstructionanddetectionprincipleofAFB1aptasensor第45卷廖文椿等：基于新型纳米酶构建适体传感器用于食品中 AFB1的检测913PBS 溶液冲洗电极，并在室温下晾干.1.5检测方法将制备好的电极插入装有 10mLPBS 溶液的小烧杯中，采用三电极体系，甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，AFB1适体传感器作为工作电极，待加入 100L2.61mol/L 的H2O2溶液并迅速混匀后采用 DPV 进行测量.测量电位范围为0.90V，脉冲宽度为 25ms，脉冲幅度为 50mV.2结果与讨论2.1MnMOF 的表征2.1.1 X 射线衍射(XRD)分析利用 XRD 对所合成 MnMOF 的结构进行表征，将所得到图谱与文献 21 中数据对比可得，两者衍射谱图在衍射峰角度位置、相对强度及衍射峰形上基本一致（见图 2），表明 MnMOF 合成成功.图2实验(a)与文献(b)所合成 MnMOF 的 XRD 对比图Fig.2XRDspectracomparisonofMnMOFsynthesized(a)andsimulated(b)2.1.2 傅里叶变换红外光谱（FTIR）表征利用 FTIR 对实验合成 MnMOF 的结构进行表征，如图 3 所示.在 1556cm1和 1395.68cm1处存在羧基化配体的明显的对称和不对称伸缩振动，与文献 26 中报道一致，证明 MnMOF 的成功合成.2.1.3 MnMOF 微观形貌表征为了观察了 MnMOF 的微观形貌，研究采用扫描电子显微镜（SEM）对 MnMOF 进行表征.如图 4(a)所示，MnMOF 具有六面立方晶体型结构、花簇状结构等；由图 4(b)可知，MnMOF 表面粗糙，细致分布着小孔，具有孔道结构.图4不同放大倍数的 MnMOF 的扫描电镜图Fig.4SEMimagesofMnMOFwithdifferentmagnifications2.1.4 MnMOF-C 微观形貌表征为了观察 MnMOF-C 的微观形貌，研究采用透射电子显微镜（TEM）对 MnMOF-C 进行表征.由图 5(a)可知，MnMOF 经过 600 的高温炭化后，其六面立方晶体结构及花簇状结构发生了一定程度的坍塌，但仍有部分 MOF 保留了原有的六面立方晶体结构.图 5(b)可看到 PtNPs 均匀且密集地负载到 MnMOF-C 上.图5MnMOF-C(a)和PtNPsMnMOF-C(b)的透射电镜图Fig.5TEMimagesofMnMOF-C(a)andPtNPsMnMOF-C(b)2.1.5 MoS2/GO 以及 AuNPsMoS2/GO 的微观形貌表征采用透射电子显微镜(TEM)研究了MoS2/GO 和 AuNPsMoS2/GO 的微观形貌，如图 6 所示.图 6(a)显示，该二维材料呈现出明显的薄层褶皱状，图 6(b)为 AuNPsMoS2/GO 的形貌，可 清 晰 观 察 到 Au NPs 均 匀 且 密 集 地 负 载 在MoS2/GO 上.2.2可行性分析为证明本研究所设计方案的可行性，故进行验证实验.如图 7(a)所示，与空白实验相比，有 AFB1存在时 H2O2的响应电流大大减小.该实验结果可归因于检测体系中由于目标物图3MnMOF 的红外光谱图Fig.3FTIRspectrumofMnMOF914云南大学学报（自然科学版）http:/第45卷AFB1与适体传感器中的 AFB1适体链结合，使适体链从电极表面解离下来，从而使电极表面剩余的纳米酶 PtNPsMnMOF-C 减少，最终导致 H2O2的响应电流减小.由此可证明本实验所设计的方案具有可行性.与此同时，实验在相同条件下进行了11mg/mL 的 MnMOF、MnMOF-C、PtNPsMnMOF-C 纳米酶的催化活性对比分析，结果如图 7(b)所示.由图清晰可见，相较 MnMOF，炭化后的 MnMOF 具有更好的催化活性，在 MnMOF-C 上掺杂PtNPs 后催化性能最好.图7验证实验结果(在 10mLPBS 缓冲溶液中加入 100L2.61mol/LH2O2）Fig.7Verifyexperimentalresults(performedbyadding100Lof2.61mol/LH2O2in10mLofPBSbuffer)2.3不同修饰电极表面的交流阻抗行为为了探究电极表面的修饰过程，采用电化学交流阻抗法(EIS)对电极表面的修饰过程进行表征，如图 8 所示.曲线(a)为裸 GCE 的 EIS 曲线，表明裸电极具有较好的导电性（Rct=500)；曲线(b)为裸电极修饰了 AuNPsMo2S 材料的 EIS 曲线，由于 AuNPsMo2S 具有良好的导电性，可促进电极表面的电子传输效率，故所测得阻抗值减小(（Rct=150)；曲线(c)为基底上滴加了 SH-DNA1后的 EIS 曲线，由于 DNA 不具导电性，故使得电极阻抗值增大（Rct=1000)；曲线(d)为在曲线(c)基础上又加入标记有 PtNPsMnMOF-C 的 AFB1aptamer-NH2的 EIS 曲线，此时由于 AFB1aptamer-NH2与 SH-DNA1通过碱基互补配对，形成了双链结构，同时将 PtNPsMnMOF-C 纳米酶带到了电极表面，降低了电子之间的传递效率，使得阻抗值明显增大（Rct=1650).由 EIS 结果表明，所构建传感器层层修饰成功.2.4实验条件的优化为获得实验所构建适体传感器的最佳性能，实验考察了 DNA1浓度、毒素培育时间、双链杂交时间、纳米酶质量浓度对电流响应信号的影响.电流响应信号为空白与目标物AFB1质量浓度为 50ng/mL 的信号差值 I.2.4.1 DNA1浓度对电流响应信号的影响DNA1链通过 AuS 键固定到电极表面后，再与 AFB1适体链进行杂交形成双链结构.实验分别考察采用1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mol/L 的 DNA1链组装电极时的电流响应信号，如图 9（a）所示，随着 DNA1链图6MoS2/GO(a)和 AuNPsMoS2/GO(b)的透射电镜图Fig.6TEMimagesofMoS2/GO(a)andAuNPsMoS2/GO(b)图8在 5mmol/LK3Fe(CN)4/K4Fe(CN)6溶液中修饰电极不同界面的交流阻抗曲线Fig.8AC impedance curves with different interfaces ofmodifiedelectrodesin5mmol/LK3Fe(CN)4/K4Fe(CN)6第45卷廖文椿等：基于新型纳米酶构建适体传感器用于食品中 AFB1的检测915浓度的增大，响应电流差值随之增大，当达到 2.0mol/L 时，电流响应值达到最大，继续增加 DNA1浓度，响应信号未发生明显变化.因此，实验选择2.0mol/L 作为 DNA1的最佳浓度.2.4.2 AFB1培育时间对电流响应信号的影响当存在目标物 AFB1时，目标物会与适体链发生特异性结合从电极表面解离下来，从而导致电极表面剩余纳米酶减少，响应信号随之减小.所以，合理选择毒素 AFB1的培育时间是提高传感器性能的重要因素.如图 9(b)所示，当培育时间为 60min 时可获得最大响应信号，所以选择 60min 为 AFB1的最佳培育时间.2.4.3 双链杂交时间对电流响应信号的影响为进一步提高传感器性能，对双链杂交时间进行了优化.结果如图 9(c)所示，在 4060min 时间范围内，随着杂交时间的增加，响应信号随之增大，在60min 处达到最大值，若杂交时间继续延长，则响应信号反而会发生降低.故实验选择 60min 为双链杂交的最佳时间.2.4.4 纳米酶质量浓度对电流响应信号的影响纳米酶是传感器催化信号来源，所以纳米酶质量浓度是决定传感器性能的直接因素.如图 9(d)所示，增大纳米酶质量浓度，响应信号随之增大，并在11mg/mL 时响应信号达到最大；若继续增大纳米酶质量浓度，发现响应信号略有降低.因此实验选择 11mg/mL 作为纳米酶最佳质量浓度.2.5AFB1适体传感器的响应性能在最优实验的条件下，使用所构建 AFB1适体传感器对不同质量浓度的 AFB1进行测定，所得结果如图 10 所示.图 10(a)为适体传感器对不同质量浓度的 AFB1的DPV 响应曲线，图 10(b)为适体传感器的校正曲线；由图可知，在 0.001100ng/mL 范围内，传感器的电流响应值与 AFB1质量浓度的对数呈良好的线性，所得线性方程为 I=3.2358lg+13.113，线性相关系数 R2=0.9965，根据 3 规则，检出限为 0.33pg/mL.2.6AFB1适体传感器的选择性为考察适体传感器的选择性，实验测定了传感器对几种可能存在的干扰物质的电流响应，即伏马毒素 B1(FB1)、赭图9条件优化实验结果Fig.9Optimizationresultsofdetectionconditions916云南大学学报（自然科学版）http:/第45卷曲霉毒素 A(OTA)、赭曲霉毒素 B(OTB)、玉米赤霉烯酮(ZEN)，干扰物质质量浓度为 AFB1的 10 倍，结果如图 11 所示.实验表明，该适体传感器对 AFB1具有较好的选择性.图11适体传感器的选择性Fig.11Selectivityofaptamersensor2.7回收率为考察所构建适体传感器的实用性，将适体传感器应用到真实样品的测定中.实验采用标准加入法，将 500ng/mLAFB1与制备好的大米样品液分别按照体积比(149)、(545)、(842)混合均匀.每组样品平行测定 3 次.结果如表 1 所示，实验所测得回收率为 93.10%106.70%，说明该适体传感器可使用于真实样品的测定.3结论本实验基于 MOFs 纳米酶构建 signal-off 适体传感器用于食品中 AFB1的定量检测.MOFs 具有较大表面积与较多活性位点，孔隙率高，易掺杂纳米材料以提高催化性能.实验利用 MnMOF-C 的类过氧化氢酶性能，掺杂 PtNPs 以提高纳米酶催化能力，并将掺杂后的纳米酶修饰到 AFB1适体链上，催化过氧化氢产生响应信号，利用适体的高度亲和力与特异识别功能实现对 AFB1的定量检测.实验所构建传感器灵敏度高、检测快速、无需大型仪器，可应用到真实样品的黄曲霉毒素的检测中，显示出良好的应用前景.参考文献：ZhangZQ,ZhangQW,LiMN,etal.SeMetattenu-atesAFB1-inducedintestinalinjuryinrabbitsbyactiv-atingtheNrf2pathwayJ.EcotoxicologyandEnviron-mentalSafety,2022,239:113640.DOI:10.1016/j.eco-1表1真实样品的回收率Tab.1Recoveryinrealsample样品添加量/(ngmL1)测出量/(ngmL1)回收率/%相对标准偏差/%(n=3)100210.0010.26102.612.1110.33103.2710.67106.70350.0046.5593.103.3949.6399.2547.2294.43480.0081.67102.081.0983.43104.2982.84103.55图10适体传感器对不同 AFB1质量浓度的 DPV 响应曲线(a)和校准曲线(b)Fig.10DPVresponsecurves(a)andcalibrationcurves(b)oftheaptamersensorwithdifferentAFB1concentrations第45卷廖文椿等：基于新型纳米酶构建适体传感器用于食品中 AFB1的检测917env.2022.113640.TaranuI,HermeneanA,BulgaruC,etal.Dietcontain-inggrapeseedmealby-productcounteractsAFB1tox-icityinliverofpigafterweaningJ.EcotoxicologyandEnvironmental Safety,2020,203:110899.DOI:10.1016/j.ecoenv.2020.110899.2BaranyA,GuillotoM,Cosano,J,etal.Dietaryaflatox-inB1(AFB1)reducesgrowthperformance,impactinggrowthaxis,metabolism,andtissueintegrityinjuven-ilegiltheadseabream(Sparusaurata)J.Aquaculture,2021,533:736189.DOI:10.1016/j.aquaculture.2020.736189.3Wang Y L,Wang B J,Liu M,et al.Aflatoxin B1(AFB1)induceddysregulationofintestinalmicrobiotaand damage of antioxidant system in pacific whiteshrimp(Litopenaeusvannamei)J.Aquaculture,2018,495:940-947.DOI:10.1016/j.aquaculture.2018.06.065.4Mustafa M,Ashraful A M,Mohammad F S,et al.AflatoxinexposureinchildrenlivinginMirpur,Dhaka:datafromMAL-EDcompanionstudyJ.JournalofEx-posureScience&EnvironmentalEpidemiology,2019,29(5):655-662.DOI:10.1038/s41370-018-0066-5.5潘振朝.花生及花生油中黄曲霉毒素 B1 检测方法优化及危害分析D.广州:华南农业大学,2016.DOI:10.7666/d.D01037994.PanZC.Hazardanalysisanddetectionmethodestab-lishment of aflatoxin B1 in peanut oil and rawmaterialsD.Guangzhou:South China AgriculturalUniversity,2016.6ChenQS,JiaoTH,YangMX,etal.PreetchedAgnanoclusterasSERSsubstratefortherapidquantifica-tionofAFB1inpeanutoilviaDFTcoupledmultivari-atecalibrationJ.SpectrochimicaActaPartA:Molecu-lar and Biomolecular Spectroscopy,2020,239:118411.DOI:10.1016/j.saa.2020.118411.7KhansiliN,RattuG,KumarA,etal.Developmentofcolorimetric sensor with zinc oxide nanoparticles forrapid detection of aflatoxin B1 in RiceJ.MaterialsToday:Proceedings,2020,21:1846-1855.DOI:10.1016/j.matpr.2020.01.240.8LiM,QianZJ,PengCF,etal.Ultrafastratiometricde-tectionofaflatoxinB1basedonfluorescent-CDCunanoparticlesandPt2+ionsJ.ACSAppliedBioMater-ials,2022,5(1):285-294.DOI:10.1021/acsabm.1c01079.9ZhangK,SchaabMR,SouthwoodG,etal.Acollabor-ativestudy:Determinationofmycotoxinsincorn,pea-nutbutter,andwheatflourusingStableIsotopeDilu-tion Assay(SIDA)and Liquid Chromatography-Tan-10dem Mass Spectrometry(LC-MS/MS)J.Journal ofAgriculturalandFoodChemistry,2017,65(33):7138-7152.DOI:10.1021/acs.jafc.6b04872.RenML,XuHY,HuangXL,etal.Immunochromato-graphic assay for ultrasensitive detection of aflatoxinB1 in maize by highly luminescent quantum dotbeadsJ.ACS Applied Materials&Interfaces,2014,6(16):14215-14222.DOI:10.1021/am503517s.11GaoLZ,ZhuangJ,NieL,etal.Intrinsicperoxidase-like activity of ferromagnetic nanoparticlesJ.NatureNanotechnology,2007,2(9):577-583.DOI:10.1038/nnano.2007.260.12DengHH,LuoBY,HeSB,etal.Redoxrecycling-triggeredperoxidase-likeactivityenhancementofbaregoldnanoparticlesforultrasensitivecolorimetricdetec-tion of rare-earth Ce3+ionJ.Analytical Chemistry,2019,91(6):4039-4046.DOI:10.1021/acs.analchem.8b05552.13SuYY,WuD,ChenJ,etal.Ratiometricsurfaceen-hancedramanscatteringimmunosorbentassayofaller-genicproteinsviacovalentorganicframeworkcompos-itematerialbasednanozymetagtriggeredramansignal“Turn-on”andamplificationJ.AnalyticalChemistry,2019,91(18):11687-11695.DOI:10.1021/acs.anal-chem.9b02233.14WuJH,YangQT,LiQ,etal.Two-dimensionalMnO2nanozyme-mediatedhomogeneouselectrochemicalde-tectionoforganophosphatepesticideswithouttheinter-ference of H2O2 and colorJ.Analytical Chemistry,2021,93(8):4084-4091.DOI:10.1021/acs.analchem.0c05257.15LianML,LiuMH,ZhangX,etal.Template-regu-latedbimetallic sulfide nanozymes with high spe-cificityandactivityforvisualcolorimetricdetectionofcellularH2O2J.ACSAppliedMaterials&Interfaces,2021,13(45):53599-53609.DOI:10.1021/acsami.1c15839.16ZhangLF,ZhangL,DengH,etal.InvivoactivationofpH-responsiveoxidase-likegraphiticnanozymesforselectivekillingofHelicobacterpyloriJ.NatureCom-munications,2021,12(1):2002.DOI:10.1038/s41467-021-22286-x.17WuG,McHughEA,BerkaV,etal.Oxidizedactiv-atedcharcoalnanoparticlesascatalyticsuperoxidedis-mutasemimetics:EvidencefordirectparticipationofanintrinsicradicalJ.ACSAppliedNanoMaterials,2020,3(7):6962-6971.DOI:10.1021/acsanm.0c01285.18HuWC,PangJ,BiswasS,etal.Ultrasensitivedetec-tionofbacteriausinga2DMOFnanozyme-amplified19918云南大学学报（自然科学版）http:/第45卷electrochemical detectorJ.Analytical Chemistry,2021,93(24):8544-8552.DOI:10.1021/acs.analchem.1c01261.LiuJ,ZhangW,PengMH,etal.ZIF-67asatemplategeneratingandtuning“raisinpudding”-typenanozymeswith multiple enzyme-like activities:Toward onlineelectrochemicaldetectionof3,4-dihydroxyphenylacet-icacidinlivingbrainsJ.ACSAppliedMaterials&In-terfaces,2020,12(26):29631-29640.DOI:10.1021/acsami.0c05667.20ZhouW,WuH,YildirimT.EnhancedH2adsorptioninisostructuralmetal-organicframeworkswithopenmet-alsites:strongdependenceofthebindingstrengthonmetalionsJ.JournaloftheAmericanChemicalSoci-ety,2008,130(46):15268-15269.DOI:10.1021/ja807023q.21Guo Y D,Di Z Y,Guo X N,et al.N/Ce dopedgraphene supported Pt nanoparticles for the catalyticoxidation of formaldehyde at room temperatureJ.Journal of Environmental S