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NSFC案例精讲班(七)解螺旋课堂2017酸菜解 螺 旋 课 堂0课 程 内 容文献案例分析科学假设模式132标书写作讲解解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析Fig.1，3Fig.1Fig.1-5Fig.4Fig.4，5Fig.5Fig.3-5Fig.2启动子荧光素活性染色质免疫沉淀免疫共沉淀解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析肝癌ZEB2EMT转移FOXO1科学假设：逻辑思路：AFOXO1迁移表型Fig.1BFig.2，3FOXO1EMT迁移表型CFig.3TGF-迁移粘附DFOXO1Fig.4肺转移灶数目EFOXO1ZEB2Fig.5EMT迁移表型/动物验证解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析A.RYBP mRNA表达水平B.预测RYBP基因启动子区域CpG岛C.RYBP 5非编码区及预测的转录调控元件(ALGGEN,TFSEARCH，JASPAR)D.不同肝癌细胞的RYBP启动子区域多态性E.不同肝癌细胞的RYBP启动子区域CpG岛甲基化状态F.荧光素酶报告系统检测不同肝癌细胞中RYBP启动子活性解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析A.RYBP启动子序列缺失突变及其转录活性检测B.分析候选转录因子对RYBP的转录活性调节作用（Ets-1，KLF4，Mzf-1，Nkx2-5，YY-1，Sp1）C.检测Sp1，KLF4和RYBP在肝癌细胞株中的表达相关性解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析A.KLF4对RYBP启动子活性的调控B.过表达KLF4诱导RYBPmRNA上调C.过表达KLF4诱导RYBP 蛋白上调D.siRNA沉默KLF4诱导RYBP mRNA下调E.siRNA沉默KLF4诱导RYBP 蛋白下调解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析A.Sp1对RYBP启动子活性的调控B.过表达Sp1诱导RYBP mRNA下调C.过表达Sp1诱导RYBP 蛋白下调D.siRNA沉默Sp1诱导RYBP mRNA上调E.siRNA沉默Sp1诱导RYBP 蛋白上调解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析A.ChIP实验证实KLF4和Sp1与RYBP启动子DNA结合B.位点突变验证KLF4/Sp1与RYBP启动子的结合位点的策略C.验证突变体KLF4与RYBP启动子的结合位点活性D.验证突变体Sp1与RYBP启动子的结合位点活性E.突变体+转染野生型KLF4F.突变体+转染野生型Sp1G.确认RYBP启动子上转录调控位点（不同物种序列保守）解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析A.过表达KLF4/Sp1肝癌Huh7细胞MTS存活实验B.HepG2细胞再来一遍C.Sp1过表达+SYBR沉默观察克隆形成表型解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析解 螺 旋 课 堂1文 献 案 例 分 析肝癌RYBP细胞增殖生长KLF4/Sp1科学假设：逻辑思路：ARYBP启动子Fig.1BFig.2RYBP启动子KLF4/Sp1CFig.3KLF4RYBP 正DSp1Fig.4RYBP 负ERYBP启动子Fig.5位点KLF4/Sp1FFig.7表型临床Fig.6解 螺 旋 课 堂2科 学 假 设 模 式延伸机制疾病临床问题科学热点分子（X）机制（Y）效应（Z）12345转录因子临床/科学问题靶基因通路功能表型解 螺 旋 课 堂3标 书 写 作 讲 解案例分析1）题目：Nrf2通过负调控NLRP3炎性复合体的活化减轻脑缺血再灌注损伤的作用及机制研究1脑缺血再灌注损伤的临床问题3）立项依据：Mini-review600-800 字炎症反应在脑缺血再灌注损伤中的作用2Mini-review600-800 字NLRP3炎性小体复合物活化在脑缺血再灌注损伤中的功能3Mini-review800-1000 字4申请人发现转录因子Nrf2能够负向调节NLRP3的转录水平Mini-review600-800 字5本项目拟开展工作400 字2）假设：脑缺血炎性反应再灌注损伤Nrf2NLRP3解 螺 旋 课 堂3标 书 写 作 讲 解4）特色与创新123Nrf2负调控NLRP3炎性复合体的活化Nrf2在脑缺血再灌注损伤中调控炎症的作用在体验证和临床相关性研究提升学术价值案例分析5）拟解决关键科学问题12NLRP3启动子区调控元件分析，转录因子鉴定Nrf2调控NLRP3启动区的结合位点3Nrf2负调节NLRP3在脑缺血再灌注损伤中的作用解 螺 旋 课 堂3标 书 写 作 讲 解案例（春暖花开）解 螺 旋 课 堂3标 书 写 作 讲 解案例（春暖花开）1）题目：转录因子X诱导M2型小胶质细胞活化在脑出血后神经保护中的作用机制1脑出血后神经保护的分子机制及微环境调控的重要影响3）立项依据：Mini-review600-800 字M2型小胶质细胞活化在脑出血后神经保护中的扮演关键角色2Mini-review600-800 字申请人前期发现转录因子X具有调控M2型小胶质细胞活化功能3Mini-review800-1000 字4转录因子X能够调控NF-B干预M2型小胶质细胞活化过程Mini-review600-800 字5本项目拟开展工作400 字2）假设：脑出血M2型小胶质细胞活化神经损伤保护转录因子XNF-B解 螺 旋 课 堂3标 书 写 作 讲 解案例（hr）1）题目：HBV m12345介导Th17/Treg免疫平衡在慢性乙型肝炎中的作用机制1乙肝的诊疗现状及临床面临的瓶颈3）立项依据：Mini-review600-800 字免疫调节的平衡在病毒的感染及肝纤维化、肝硬化转归中的作用2Mini-review800-1000 字申请人前期发现一个功能性HBV病毒突变，可调节Th17/Treg3Mini-review800-1000 字4m12345经由某机制调控Th17/Treg在乙肝中扮演重要的角色Mini-review400-600 字5本项目拟开展工作400 字2）假设：乙肝免疫平衡通路/靶点Th17/TregHBVm12345THANKS2017-1-10