Trizol法提取总RNA原理：Trizol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。在样品裂解或匀浆过程中，Trizol能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的形式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能析出有机层的蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。Trizol试剂可用于小量样品（50~100mg组织，5×106细胞），也可用于大量样品（≥1g组织或≥107细胞），对人、动物、植物和细菌、血液提取都适用，可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应，提取的总RNA没有DNA和蛋白质污染，可用于Northernblot、RT-PCR、Dotblot、RNase保护分析等。本试剂为红颜色，便于区分水相和有机相，同时最大限度的保持RNA的完整性。保存条件：2~8℃避光保存12个月。实验前需要准备的试剂：Trizol，氯仿，异丙醇，75%乙醇（用RNase-Free水配制），RNase-Free水。实验前需要准备的物品：1ml注射器，1.5mlEP管（DEPC处理过），大、中、小号枪头（DEPC处理）样品前处理注意点：1.选择新鲜血液，不得超过4小时。2.选择新鲜组织，生长旺盛的组织。3.选择新鲜的幼嫩组织。4.选择处于生长旺盛的时期收集细胞。RNA纯化要求：1.纯化后不应存在对酶（如逆转录酶）有抑制作用的物质。2.排除有机溶剂和金属离子的污染。3.蛋白质、多糖和脂类分子等的污染降到最低程度。4.排除DNA分子的污染。RNA提取的注意事项：1.杜绝外源酶的污染。（1）严格戴好口罩，手套。（2）实验所涉及的离心管，Tip头，移液器杆，电泳槽，实验台面等要彻底处理。（3）实验所涉及的试剂/溶液，尤其是水，必须确保RNase-Free。2.阻止内源酶的活性。（1）选择合适的匀浆方法。（2）选择合适的裂解液。（3）控制好样品的起始量。3.明确自己的提取目的。（1）任何裂解液系统在接近样品最大起始量时，提取成功率急剧下降。（2）RNA提取成功的唯一经济的标准是后续实验的一次成功，而不是得率。Rnase污染的10大来源1.手指头2.枪头3.水/缓冲液4.实验台面5.内源Rnase6.RNA样品7.质粒提取8.RNA保存9.阳离子（Ca，Mg）10.后续实验所用的酶流程：1.样品处理：（1）培养细胞：收获细胞1~5×107，加入1mlTrizol（异硫氰酸胍/酚）（在冰箱旁边取出白细胞即刻加入Trizol），混匀；用1ml注射器反复抽取（约30次）以破裂细胞及剪切DNA，室温静置5m...
