畜牧兽医学报2023,54(9):3884-3894ActaVeterinariaetZootechnicaSinicadoi:10.11843/j.issn.0366-6964.2023.09.027开放科学(资源服务)标识码(OSID):基于串联亲和层析法纯化并鉴定猪初乳中SIgA杨悦1,2,王锐3,甘源2,4,郝飞2,4,谢星2,4,张磊2,4,邵国青2,4,孟庆国1,陈蓉2,4*,冯志新1,2,4*(1.南京师范大学海洋科学与工程学院,南京210023;2.江苏省农业科学院兽医研究所,农业农村部兽用生物制品工程重点实验室,南京210014;3.南京农业大学生命科学院,南京210095;4.兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心,泰州225300)摘要:分泌型免疫球蛋白A(SIgA)是黏膜免疫的主要效应分子,在临床上常常作为疾病早期诊断的靶标,此外,基于SIgA的治疗性单抗和靶向SIgA产生的黏膜疫苗也越来越受到关注。分离并纯化出完整且具有活性的SIgA是产品研发的前提。为了提高猪初乳中SIgA的纯化效率,本研究采用串联亲和层析,强阴离子柱和精细分子筛层析进行纯化,从10mL初乳中获得3mg具有活性的SIgA。使用Westernblot对纯化的SIgA进行鉴定,结果表明,纯化的SIgA与抗猪的重链蛋白单抗和抗SC单抗均具有良好的反应性。使用ELISA测试SIgA与抗猪的IgA重链单抗的反应性,结果发现使用本方法纯化的SIgA较原先方法(即硫酸铵沉淀,DEAE52弱阴离子层析,Sepha-dexG-200凝胶层析和多次亲和层析的纯化方法)具有更高的反应性。最后使用质谱鉴定纯化的蛋白,结果表明为猪的SIgA。本研究为从猪初乳中纯化SIgA建立了一种高效的纯化方法,也为其它来源的SIgA的纯化提供参考。关键词:猪初乳;SIgA;纯化;鉴定中图分类号:S852.4文献标志码:A文章编号:0366-6964(2023)09-3884-11收稿日期:2023-02-13基金项目:国家重点研发计划政府间国际科技创新合作重点专项(2019YFE0107300);江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(22)3029);国家自然基金面上项目(32273011)作者简介:杨悦(1998-),女,江苏兴化人,硕士,主要从事动物支原体致病机制研究*通信作者:冯志新,主要从事动物支原体致病机制研究,E-mail:fzxjaas@163.com;陈蓉,主要从事动物支原体致病机制研究,E-mail:chenronggrape@163.comPurificationandIdentificationofSIgAinPorcineColostrumbasedonTandemAffinityChromatographyYANGYue1,2,WANGRui3,GANYuan2,4,HAOFei2,4,XIEXing2,4,ZHANGLei2,4,SHAOGuoqing2,4,MENGQingguo1,CHENRong2,4*,FENGZhixin1,2,4*(1.SchoolofMarineScienceandEngineering,NanjingNormalUniversity,Nanjing210023,China;2.KeyLaboratoryofVeterinaryBi...
