不同工艺制备的替米考星颗粒体外释放度研究_李敏.pdf

动物医学进展,2 0 2 3,4 4(2):6 1-6 6P r o g r e s s i nV e t e r i n a r yM e d i c i n e不同工艺制备的替米考星颗粒体外释放度研究 收稿日期:2 0 2 2-0 2-2 4 基金项目:国家现代农业产业技术体系(C A R S-3 7);动物专用新化学实体药物创制与产业化(C AA S-Z D X T 2 0 1 9 0 0 1)作者简介:李 敏(1 9 9 5-),女,甘肃平凉人,硕士研究生,主要从事兽医药理与毒理学。*通讯作者李 敏1,2,程富胜2,郭丽华3,周凯仁2,白玉彬2,李 冰2,魏彦明1,张继瑜1,2*(1.甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州7 3 0 0 7 0;2.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,甘肃兰州7 3 0 0 5 0;3.山东德州神牛药业有限公司,山东德州2 5 3 0 0 0)摘 要:通过考察3种替米考星颗粒制剂在酸性溶液和缓冲液中的释放情况,为新制剂的进一步研发和临床应用提供理论依据。采用高效液相色谱法对3种不同制剂中替米考星的含量及其体外溶出度进行测定。色谱柱选择H y p e r s i lO D S-2C 1 8(4.6mm2 5 0mm,5m),以水乙腈四氢呋喃磷酸二丁胺(7 9 0 1 3 05 52 5)为流动相,流速1.0m L/m i n,检测波长2 9 0n m,柱温3 0。分别以盐酸溶液和磷酸盐缓冲液为溶出介质,测定3种新研制的替米考星不同制剂体外溶出曲线,溶出方法选用浆法,转速为7 5r/m i n,温度为3 70.5。在所建立的方法学基础上,替米考星在1 0g/m L1 0 0 0g/m L范围内与峰面积呈良好的线性关系,在9 0m i n时3种新研制的替米考星不同制剂在酸性溶液中的溶出度分别为1 0 0%、5.7 3%和8.2 9%,供试品1与供试品2、供试品3及对照品之间差异显著(P0.0 5)。3种不同工艺制备的替米考星颗粒,在酸性溶液和磷酸盐缓冲溶液中累积溶出度差异显著(P0.0 5定义为不具有显著性差异,P0.0 5定义为具有显著性差异,P0.0 1定义为具有极显著性差异。2 结果2.1 含量测定2.1.1 专属性考察 结果见图1和图2,表明空白溶液对样品含量测定无干扰,该方法专属性强。图1 空白溶液F i g.1 B l a n ks o l u t i o n2.1.2 线性考察 以替米考星标准品的质量浓度(C)为横坐标,绘制峰面积(Y)-质量浓度(C)标准曲线,得到的标准曲线见图3,线性回归方程为y=2 69 7 1x-1 9 66 0 8,R2=0.9 9 96,表明替米考星在浓5 0g/m L1 0 0 0g/m L的质量浓度范围内与对应的峰面积的线性关系良好。2.1.3 回收率与精密度 替米考星的平均回收率为1 1 0.0%,R S D值均不大于2%,表明该方法的准确度较高。2.1.4 重复性 按照1.2.2供试品的配置方法,分别配制5份供试样品,测定5份替米考星含量R S D值分别为1.2 5%、1.6 5%、1.6 9%、1.9 7%和1.0 6%,表明该方法重复性良好。2.1.5 替米考星不同制剂含量测定 结果显示供试样品替米考星含量均在标示量的9 0%1 1 0%,结果见表1。图2 替米考星标准溶液色谱图F i g.2 C h r o m a t o g r a mo f t i l m i c o s i ns t a n d a r ds o l u t i o n图3 替米考星标准曲线图F i g.3 S t a n d a r dc u r v eo f t i l m i c o s i n表1 不同替米考星供试样品含量T a b l e1 C o n t e n t so fd i f f e r e n t t i l m i c o s i nt e s t s a m p l e s样品S a m p l e含量/%C o n t e n t供试样品1S a m p l e11 0 5.9 2供试样品2S a m p l e21 0 4.7 9供试样品3S a m p l e39 4.1 9对照样品C o n t r o l1 0 2.8 32.2 溶出度2.2.1 专属性考察 结果表明,两种溶出介质对替米考星 的 测 定 无 干 扰,该 方 法 专 属 性 强(图4图6)。2.2.2 稳定性 在不同时间段对供试品溶液进样分析,替米考星峰面积的R S D值均小于2.0%,表明供试品溶液在2 4h内稳定。2.2.3 滤膜吸附性试验 分别对3种滤过方式的峰36李 敏等:不同工艺制备的替米考星颗粒体外释放度研究面积进行比较,结果发现,3种滤膜滤过后峰面积无差异。说明滤膜对替米考星无吸附作用,故选择最常用的0.2 2mP E S滤膜过滤。图4 空白缓冲液色谱图F i g.4 C h r o m a t o g r a mo fb l a n kp h o s p h a t eb u f f e r图5 空白酸色谱图F i g.5 C h r o m a t o g r a mo fb l a n kh y d r o c h l o r i ca c i ds o l u t i o n图6 替米考星供试样品色谱图F i g.6 C h r o m a t o g r a mo f t i l m i c o s i nt e s t s a m p l e2.2.4 酸中溶出度 替米考星供试样品1、供试样品2、供试样品3、替米考星对照样品,在酸中的溶出度见图7。结果显示,供试样品1在酸中溶解良好,累积溶出度为1 0 0%;供试样品2在酸中的累积溶出度为5.7 3%,供试样品3在酸中的累积溶出度为8.2 9%;替米考星对照样品在酸中的累积溶出度为2.3 6%,因此只有供试样品2和3符合兽药典对替米考星肠溶制剂在酸中溶出度小于1 0%的规定。2.2.5 缓冲液中累积溶出度 替米考星供试样品1、供试样品2、供试样品3、对照样品在5、1 0、1 5、2 0、3 0、4 0、5 0、6 0、7 5、9 0、1 2 0m i n时累积溶出度见图8,结果显示替米考星供试样品1、2、3以及对照样品在缓冲溶液中的累积溶出度分别为1 0 0%、9 7.5 3%、9 3.6 0%和9 3.1 5%。图7 不同替米考星供试样品在酸中的溶出曲线F i g.7 D i s s o l u t i o nc u r v e so fd i f f e r e n t t i l m i c o s i nt e s ts a m p l e s i na c i d图8 不同替米考星供试样品在缓冲液中的溶出曲线F i g.8 D i s s o l u t i o nc u r v e so fd i f f e r e n t t i l m i c o s i nt e s ts a m p l e s i np h o s p h a t eb u f f e r3 讨论针对不同的动物和用药途径,目前市面上有许多不同剂型的替米考星制剂,包括可溶性粉末、预混剂、注射液、肠溶颗粒、固体脂质纳米粒、固体分散体等8,1 0-1 3。临床上预混剂、注射剂和肠溶颗粒最为常见。研究发现,替米考星预混剂口服给药后,吸收迅速,但是吸收不完全,并且替米考星味极苦,适口性差,给药比较困难1 4。通过对替米考星的注射剂研究发现,替米考星对心脏具有很强的毒性,进入血管的替米考星可以导致动物出现心动过速和心肌收缩力下降1 0。我国 兽药典 明确指出给猪肌肉注射1 0m g/k g的替米考星后,会出现呼吸急促、呕吐和惊厥等不良反应,加大剂量至2 0m g/k g进行肌肉注射时,大多数猪出现死亡等现象9。因此,同一种药物,经过不同生产工艺和制备技术所得到的不同制剂,其药物活性成分的释放速度、吸收程度以及安全剂量范围不尽相同。46动物医学进展 2 0 2 3年 第4 4卷 第2期(总第3 5 6期)试验中3种替米考星供试样品,为不同工艺和技术生产而成的颗粒制剂。研究结果显示,在酸液中5 m i n替米考星 供试样品1累计溶 出度已达6 3.8 3%,9 0m i n可完全溶出,说明在酸性介质中,颗粒崩解快,能快速释放出主药成分,与对照品相比极显著(P0.0 1);供试样品2、3在5m i n时,累积溶出度分别为2.5 6%和5.5 4%,与样品1比有显著性(P0.0 5),但于样品1在9 0m i n的溶出度差异显著(P0.0 5)。在磷酸盐缓冲溶液中,5m i n时,样品1的累积溶出度明显高于样品2、样品3和对照品,而样品2、样品3与对照品之间无明显差异。在中间点6 0m i n时,供试样品1、2、3的累积溶出度分别为9 4.8 8%、9 0.2 3%和8 2.9 6%,对照样品在6 0m i n时累积溶出度为7 9.0 1%,3种供试样品累积溶出度均高于对照样品,其中样品1的累积溶出度最高。1 2 0m i n时试样品1中替米考星已完全释放,样品2、样品3和对照样品 的 累 积 溶 出 度 分 别 为9 7.5 3%、9 3.6 0%和9 3.1 5%,供试样品之间、供试样品与对照品之间累积溶出度均无显著差异(P0.0 5)。试验结果表明,在缓冲溶液中,供试样品均具有理想的溶出度。试验结果显示,试验中所用的供试样品所采用的原辅料的不同直接影响了在酸和缓冲液中溶出度。供试样品1未经过包被工艺直接由主药替米考星与辅料加工而成的颗粒,在酸和缓冲液中均容易释放出活性成分,供试样品2和供试样品3经过包被后,在酸中,溶出度呈下降趋势,对原药的释放具有很强阻抗作用,包被所用材料和所形成的包被结构具有很强的耐酸性,与对照品的累积溶出度无显著差异(P0.0 5)。在磷酸盐缓冲液中,供试样品2和供试样品3溶出度趋势有差异性(P0.0 5),这主要与两者的主药成分有关,供试样品2主药为替米考星,而供试样品3为磷酸修饰过的替米考星磷酸盐,结果显示出样品2在缓冲溶液中具有良好的释放效果。综合酸和缓冲液中3种供试样品的试验结果,依据兽药典的相关规定,供试样品2、3均符合肠溶制剂在酸中溶出量小于1 0%,在缓冲液中供试样品均符合累积溶出度不低于7 0%,与对照品相比较,均可以作为替米考星肠溶颗粒新制剂进一步研发,而供试样品1不宜作为肠溶颗粒制剂研发。参考文献:1 TU C K E RIG,J A I NR,A L AW IF,e ta l.T r a n s l a t i o n a ls t u d i e so nar e a d y-t o-u s ei n t r a m u s c u l a ri n j e c t i o no fp e n e t h a m a t ef o rb o v i n em a s t i t i sJ.D r u gD e l i vT r a n s lR e s,2 0 1 8,8(2):3 1 7-3 2 8.2 P R E S T I NA C IF,P E Z Z O T T IP,P AN T O S T IA.A n t i m i c r o b i a lr e s i s t a n c e:ag l o b a lm u l t i f a c e t e dp h e n o m e n o nJ.P a t h o gG l o bH e a l t h,2 0 1 5,1 0 9(7):3 0 9-3 1 8.3 J O R D AN W H,B Y R DRA,C O C HR AN ERL,e ta l.Ar e v i e wo f t h e t o x i c o l o g yo f t h ea n t i b i o t i cM I C OT I L3 0 0J.V e tH u mT o x i c o l,1 9 9 3