不同炒制程度陈皮炭止泻作用及对血清5-HT的影响_陈志能.pdf

第21卷第6期总第398期2 0 2 3年3月下 半 月 刊中国中医药现代远程教育CHINESE MEDICINE MODERN DISTANCE EDUCATION OF CHINA不同炒制程度陈皮炭止泻作用及对血清 5-HT 的影响*陈志能1黄立卉2黄颖露3方杨冰4黄莹莹4杨婷4李沁如4徐启键4夏荃4（1.岭南中药饮片有限公司，广东 佛山 528200；2.北京中医药大学人文学院，北京 100029；3.茂名市中医院药学部，广东 茂名 525000；4.广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006）摘要：目的探究不同炒制程度陈皮炭对腹泻大鼠的治疗作用及对血清 5-HT 的影响。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、蒙脱石组（阳性对照组）、陈皮炭轻炭组、陈皮炭标准炭组、陈皮炭重炭组，除空白组外各组蓖麻油灌胃造腹泻模型，造模 1 h 后各治疗组分别相应药物灌胃后观察大鼠的腹泻情况，计算腹泻指数，取结肠组织 HE 染色观察病理损伤情况，采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定血清中 5-HT 水平。结果与模型组相比，陈皮炭标准炭组和蒙脱石组腹泻指数显著降低（P0.05）；各治疗组结肠组织 HE 染色可见结肠炎症反应均有不同程度好转；陈皮炭标准炭组和蒙脱石组血清 5-HT 含量显著降低（P0.05）。结论陈皮炭对腹泻大鼠具有较好的止泻作用，其止泻的作用机制可能与降低腹泻大鼠血清 5-HT 的含量，从而减弱肠道蠕动有关。同时，陈皮炭炒制不及或太过会降低止泻效果。关键词：陈皮炭；腹泻；五羟色胺；实验研究doi:10.3969/j.issn.1672-2779.2023.06.059文章编号：1672-2779（2023）-06-0167-04Anti-diarrhea Effect on Tangerine Peel Charcoal under Different Stir-frying Degree and the Influence on Serum 5-HTCHEN Zhineng1,HUANG Lihui2,HUANG Yinglu3,FANG Yangbing4,HUANG Yingying4,YANG Ting4,LI Qinru4,XU Qijian4,XIA Quan4(1.Lingnan Traditional Chinese Medicine Tablets Co.,Ltd.,Guangdong Province,Foshan 528200,China;2.School of Humanities,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China;3.Department of Pharmacy,Maoming Hospital of Traditional Chinese Medicine,Guangdong Province,Maoming 525000,China;4.College of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangdong Province,Guangzhou 510006,China)Abstract：Objective To explore the therapeutic effect of tangerine peel charcoal under different stir-frying degrees and its influenceon serum 5-HT.Methods SD rats were randomly divided into blank group,model group,positive control group,tangerine peel charcoal light degree group,heavy degree group and standard degree group.Expect for the blank group,the diarrhea model was established by castor oil.After 1 hour of modeling,the rats in each group were given corresponding drugs.The diarrhea index of rats ineach group was observed,and the pathological damage to the colon was evaluated by HE staining.The levels of serum 5-HT weredetermined by ELISA.Results Compared with the model group,the diarrhea index was significantly decreased in the tangerine peelcharcoal standard group and the positive control group(P0.05).HE staining showed that the colonic inflammatory reaction of eachtreatment group was improved in varying degrees.The serum 5-HT content was significantly decreased in the positive control groupand the tangerine peel charcoal standard group(P0.05).Conclusion Tangerine peel charcoal has a certain therapeutic effect on diarrhea rats,one of its mechanisms may be related to the reduction of serum 5-HT content in diarrhea rats,and fried tangerine peelcharcoal less or too much will reduce the effect of anti-diarrhea.Keywords：tangerine peel charcoal;diarrhea;serotonin;experimental study*基金项目：广东省大学生创新创业训练计划项目【No.S201910572118】；国家中医药管理局中药炮制技术传承基地项目【No.粤中医办函 202252号】通信作者：陈皮为芸香科植物橘（C itru s re tic u la ta Blanco）及其栽培变种的干燥成熟果皮，为中医常用的理气药，性温，味辛、苦，具有理气化痰、健脾燥湿的功效1。陈皮的炮制历史悠久，炮制品种众多，除陈皮外，还有麸炒陈皮、蒸陈皮等多个炮制品种，通过炮制可起到增强疗效、缓和燥性等作用。在全国中药炮制规范2及地方炮制规范中，还收载有陈皮炭这一炮制品种。陈皮炭这一炮制品种在多地的炮制规范中均有收载，但关于该炮制品的炮制作用，各炮制规范中的记载有所不同。陈皮炭的炮制作用在全国中药炮制规范中并未明确，在北京、四川、宁夏等地炮制规范的记载中，普遍认为陈皮炭具有止血、化痰的功效，常用于痰中带血等症的治疗3-5。但在施今墨临床经验集6侍师襄诊漫笔（续 5）7等临床治疗经验中，认为陈皮炭亦具有较好的收敛止泻功效，故常用于腹泻、痢疾等病症的治疗。目前国内外已围绕陈皮开展了系列研究，但是陈皮炭的相关研究较少，且多围绕炒炭前后化学成分的含量变化和炮制工艺展开8，针对陈皮炭止泻作用的研究则更少，有必要对此进行深入研究。炒炭法是中药炮制的常用方法之一，炒炭后，药167第21卷第6期总第398期2 0 2 3年3月下 半 月 刊中国中医药现代远程教育CHINESE MEDICINE MODERN DISTANCE EDUCATION OF CHINA物的收敛作用增强，可用于腹泻、出血等多种病症。明代陈嘉谟在 本草蒙筌9中提到“凡药制造，贵在适中，不及则功效难求，太过则气味反失”，说明了炮制适度的重要性，传统炮制理论中要求的“炒炭存性”是炮制适度的典型体现。炒炭存性指药物在炒炭时，外部虽然炭化，但内部不应炭化，以保存其固有药性。只有准确掌握炮制程度，才能使饮片在临床应用中发挥最佳疗效。因此本研究以陈皮炭为研究对象，探究不同炒制程度陈皮炭对腹泻大鼠的治疗作用及对血清五羟色胺（5-HT）的影响，为陈皮炭的临床应用提供理论依据。1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物SPF 级雄性 SD 大鼠 36 只，体质量210250 g，由广州中医药大学中药学院动物中心提供，许可证号：SCXK（粤）2018-0034，实验单位使用许可证编号：SYXK（粤）2019-0202；大鼠饲养于广州中医药大学中药学院 SPF 级动物实验中心，室温 1922，相对湿度 50%60%，光照周期保持 24 h 昼夜节律，正常自由饮水、进食。1.1.2实验药物（红）陈皮丝（佛山市南海北沙药材加工厂提供，产品批号：190311），经广州中医药大学中药学院夏荃教授鉴定为芸香科植物橘（C itru s re tic u la taBlanco）的干燥成熟果皮。1.1.3主要试剂及仪器蓖麻油（上海源叶生物科技有限公司，批号：S24344）；苏木素染色液、伊红染色液（Solarbio 科技有限公司）；大鼠五羟色胺 ELISA 试剂盒（江苏酶免实业有限公司，批号：MM-044R1）；全自动酶标仪（上海宝予德科学仪器有限公司，型号：K3Plu6）；光学显微镜（日本 OLYMPUS，型号：BX53）。1.2实验方法1.2.1陈皮炭的炮制1.2.1.1标准炭的制备参照 全国中药炮制规范2进行炮制，取适量陈皮置热锅内，用武火炒至表面焦黑色，内部焦褐色时，喷淋少许清水，熄灭火星，取出，晾干，即得。1.2.1.2轻炭的制备取适量陈皮置热锅内，用武火炒至表面焦褐色，内部焦黄色时，喷淋少许清水，熄灭火星，取出，晾干，即得。1.2.1.3重炭的制备取适量陈皮置热锅内，用武火炒至表面焦黑色、内部焦黑色时，喷淋少许清水，熄灭火星，取出，晾干，即得。1.2.2陈皮炭水煎液的制备分别称取适量轻炭、标准炭、重炭，加入 10 倍量水浸泡 30 min，微沸煎煮30 min，滤过，滤渣加入 10 倍量水煎煮 30 min，滤过，合并 2 次滤液，减压浓缩至含生药量为 0.1 g/mL，置 4 冰箱存放。1.2.3分组与造模将 36 只 SD 大鼠随机分为 6 组，每组 6 只，即空白组、模型组、蒙脱石组（1 g kg-1）、陈皮炭轻炭组（1 g kg-1）、陈皮炭重炭组（1 g kg-1）、陈皮炭标准炭组（1 g kg-1）。空白组给予同体积的生理盐水，其他试验组均以蓖麻油 1 mL 100 g-1灌胃造模10。1 h 后，空白组和模型组给予生理盐水，其他组给予相应药物，灌胃剂量均为 1 mL 100 g-1。1.2.4大鼠稀便指数的测量灌胃给药后单鼠单笼，鼠笼底部铺置报纸，每 1 h 换纸 1 次，连续观察 6 h，记录大鼠的腹泻潜伏期、稀便率、稀便等级等指标数据，并计算腹泻指数11作为评价大鼠腹泻情况的指标。粪便颗粒计数以每粒或每堆（不能分清粒数者）记为 1 次，干便与稀便的区分以滤纸上有无污迹为标准。腹泻指数计算方法见表 1，稀便级的测量方法见表 2、表 3。1.2.5大鼠结肠组织病理学观察取大鼠结肠组织，经 4%多聚甲醛固定后，进行石蜡包埋、切片，并用苏木素-伊红（HE）染色，通过光学显微镜观察各组大鼠结肠病理学特征。1.2.6血清 5-HT 水平的测定大鼠腹主动脉采血，离心