参附注射液对创伤失血性休克...κB、TNF-α表达的影响_胡嗣钦.pdf

2023 年 第 26 卷 第 1 期广西中医药大学学报参附注射液对创伤失血性休克肝损伤大鼠NF-B、TNF-表达的影响胡嗣钦1，张荣臻1，周小博2，王兵1，陈林1*（1.广西中医药大学第一附属医院，广西南宁530023；2.广西中医药大学，广西南宁530200）摘要：目的 观察大鼠创伤失血性休克肝损伤后核转录因子-B（NF-B）、肿瘤坏死因子-（TNF-）表达的情况及不同剂量参附注射液对NF-B、TNF-表达的调控作用，探讨参附注射液对创伤失血性休克肝损伤的保护机制。方法 取100只 Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、模型对照组和参附注射液低、中、高剂量组，每组20只。除空白对照组外各组大鼠做双侧股骨骨折合并休克实验制造模型，各组分别于造模后0 h、2 h、4 h、6 h进行药物干预，空白对照组和模型对照组予生理盐水腹腔注射，参附注射液低、中、高剂量组分别以5 ml/kg、10 ml/kg、20 ml/kg剂量腹腔注射给药。实验过程中死亡大鼠立即进行解剖，切取肝脏标本。空白对照组大鼠直接活杀取相应组织及其标本。采用免疫组化法检测各组大鼠肝脏的NF-B和TNF-的蛋白表达水平。结果大鼠创伤失血性休克后NF-B和TNF-在肝组织中迅速表达，伤后6 h左右达到含量的高峰，伤后8 h仍持续在相当高的水平。与空白对照组比较，模型对照组及参附注射液低、中、高剂量组不同时间点（0.5 h、2 h、4 h、6 h、8 h）肝组织NF-B、TNF-表达水平均明显升高，差异有统计学意义（P0.05）；与模型对照组比较，参附注射液低、中、高剂量组不同时间点肝组织NF-B、TNF-表达水平均有不同程度下降，差异有统计学意义（P0.05）；参附注射液低、中、高剂量组比较，不同时间点肝组织NF-B、TNF-的下降水平与剂量呈正相关关系，差异有统计学意义（P0.05）。结论 参附注射液通过抑制NF-B和TNF-的表达而减少创伤失血性休克的损伤，降低死亡率，进而发挥对肝脏的保护作用。关键词：创伤失血性休克；肝损伤；NF-B；TNF-；参附注射液中图分类号：R605.971文献标识码：A文章编号：2095-4441（2023）01-0035-05引文格式：胡嗣钦，张荣臻，周小博，等.参附注射液对创伤失血性休克肝损伤大鼠NF-B、TNF-表达的影响 J.广西中医药大学学报，2023，26（1）：35-39.Shenfu Injection on Expression of NF-B and TNF-in Rats with Liver Injury fromTraumatic Hemorrhagic ShockHU Si-qin1,ZHANG Rong-zhen1,ZHOU Xiao-bo2,WANG Bing1,CHEN Lin1*（1.The First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning,Guangxi，530023；2.Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning,Guangxi，530200）Abstract：ObjectiveTo observe the expression of NF-B and TNF-in rats with liver injury from traumatichemorrhagic shock and the control effect of different dose of Shenfu injection on their expressions,so as to investigate收稿日期：2021-12-10基金项目：广西自然科学基金项目（编号：2017GXNSFAA198319）；广西高校中青年教师科研基础能力提升项目（编号：2019KY0308）第一作者简介：胡嗣钦（1977），硕士，主任医师，研究方向：普外科常见疾病的防治*通信作者：陈林（1983），硕士，副主任医师，研究方向：创伤的规范化救治；E-mail：实验研究 352023，Vol.26 No.1Journal of Guangxi University of Chinese Medicine创伤性休克属中医“脱证”范畴，称为“血脱”“脱血”，是导致多脏器功能不全甚至多脏器功能衰竭的主要因素或主要发病原因之一1。该病病机是各种原因如邪毒内陷、心阳衰微、亡津失液等导致人体阴阳不相顺接，进而出现阳气暴脱。因此，回阳救逆、益气固脱是本病的治疗原则。参附注射液中应用大补元气之人参配伍回阳救逆之附子，共奏回阳救逆、益气固脱之功效。在发生严重创伤或出血性休克的23 h 内，机体有效血容量明显减少，心输出量明显下降，导致血液灌流不足及微循环障碍，直接影响主要脏器如心、脑、肺、肝、肾等的功能2-3。研究表明4，在严重创伤性休克时，在肝组织中的核转录因子-B（NF-B）、肿瘤坏死因子-（TNF-）会产生变化，它们主要参与创伤后肝脏继发性损害的过程，参与创伤性休克的发生、发展。本研究通过检测参附注射液干预的创伤失血性休克大鼠肝组织中NF-B、TNF-的表达水平，探讨NF-B、TNF-在创伤失血性休克中的表达情况及不同剂量的参附注射液对损伤后肝细胞的相关影响。1实验材料1.1动物健康雄性 Wistar 大鼠 100 只，体质量（25030）g，由长沙市天勤生物技术有限公司提供，动物生产许可证号：SCXK（湘）2014-0011。大鼠在医学生物实验室恒温23 条件下饲养。1.2药物及试剂参附注射液（规格：每支10 ml，雅安三九药业有限公司，国药准字Z51020664）；肝素钠注射液（规格：2 ml/1.25万单位，天津生物化学制药有限公司，国药准字 H12020505）；兔抗鼠 NF-B 抗体（上海碧云天生物科技公司，批号：AN371-1）；兔抗鼠TNF-抗体（上海碧云天生物科技公司，批号：AN862）；Western一抗稀释液（上海碧云天生物科技公司，批号：AN371-2）；3%戊巴比妥钠（上海榕柏生物技术有限公司，批号：P3761）；4%多聚甲醛溶液（苏州巨能世纪信息科技有限公司，批号：1670405）。2实验方法2.1实验分组100只 Wistar雄性大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型对照组和参附注射液低、中、高剂量组共5组，每组20只。2.2模型制备模型制备前 12 h大鼠禁食，自由饮水，随机编号致伤。模型对照组和参附注射液低、中、高剂量组大鼠经3%戊巴比妥钠（1 ml/kg）腹腔注射麻醉后置于37%恒温操作台，折断双侧股骨中段，分离大the protective mechanism of Shenfu injection on liver injury from traumatic hemorrhagic shock.MethodsA total of100 Wistar male rats were randomly divided into blank control group,model control group,and low,medium and highdose groups of Shenfu injection with 20 rats in each group.The rats in each group except the blank control group weretreated with bilateral femoral fracture combined with shock experiment to create models.Drug intervention was conducted at 0 h,2 h,4 h and 6 h after modeling.The blank control group and the model control group were given saline intraperitoneal injection,while Shenfu injection was given intraperitoneally with 5 ml/kg,10 ml/kg,and 20 ml/kg to the low,medium,and high dose groups respectively.During the experiment,the dead rats were immediately dissected to get theliver specimens.Rats in the blank control group were directly killed to collect their tissues and specimens.Immunohistochemistry was used to detect the expression of NF-B and TNF-protein in their liver.ResultsAfter traumatichemorrhagic shock,NF-B and TNF-were rapidly expressed in liver tissues,reached the peak after 6 hours,and remained at a very high level after 8 hours.Compared with the blank control group,the expression level of NF-B andTNF-in the liver tissue of the model group and the low,medium and high dose group at different time（0.5 h,2 h,4 h,6 h,8 h）were significantly increased,and the difference was statistically significant（P0.05）；compared with the modelgroup,the expression level of NF-B and TNF-in the liver tissue of the low,medium and high dose group at differenttime decreased to varying degrees and the difference was statistically significant（P0.05）；the decline level of NF-Band TNF-in liver tissue at different time in the low,medium and high dose groups were positively correlated with thedose,and the difference was statistically significant（P0.05）.ConclusionShenfu injection can effectively reduce theinjury and mortality caused by traumatic hemorrhagic shock through inhibiting the expression of NF-B and TNF-,and plays an important role in protecting the liver.Keywords：traumatic hemorrhagic shock；liver injury；NF-B；TNF-；Shenfu injection 362023 年 第 26 卷 第 1 期广西中医药大学学报鼠股动脉及股静脉，