山东医药2023年第63卷第3期采用胶原酶Ⅱ循环灌流消化法急性分离的成年大鼠心肌细胞活性及瞬时外向钾电流观察何水静1，2，徐瀚哲1，2，胡棣文1，2，孟宪睍1，2，李辛一1，2，王腾1，2，胡丹1，2，黄燕1，21武汉大学人民医院心内科武汉大学心血管病研究所心血管病湖北省重点实验室，武汉430060；2武汉大学第一临床学院摘要：目的通过观察采用胶原酶Ⅱ循环灌流消化法急性分离的成年大鼠心肌细胞形态、活性及瞬时外向钾电流，以验证胶原酶Ⅱ循环灌流消化法对心肌细胞急性分离的效果。方法利用自制Langerdorff灌流装置进行主动脉逆行灌流，胶原酶Ⅱ循环灌流消化，分离成年大鼠单个心肌细胞；利用逐步梯度复钙法选出耐钙心肌细胞；在共聚焦显微镜下观察单个心肌细胞的形态、舒缩能力，并用全细胞膜片钳记录心肌细胞瞬时外向钾电流。结果胶原酶Ⅱ循环灌流消化法分离大鼠心肌细胞可获取90%质量良好的细胞，分离出来的心肌细胞边缘锐利、横纹清晰，折光性强，舒缩规律；复钙后仍有60%质量良好的活细胞；用全细胞膜片钳可记录到标准的瞬时外向钾电流。结论采用胶原酶Ⅱ循环灌流消化法急性分离的成年大鼠心肌细胞活性较好且耐钙，可记录到标准的瞬时外向钾电流。关键词：心肌细胞分离术；细胞急性分离术；胶原酶Ⅱ循环灌流消化法；心肌细胞；细胞活性；钾电流doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.03.004中图分类号：R33文献标志码：A文章编号：1002-266X（2023）03-0017-05ActivityandtransientoutwardpotassiumcurrentinadultratcardiomyocytesacutelyisolatedbycollagenasetypeⅡcirculatingperfusiondigestionHEShuijing1，XUHanzhe，HUDiwen，MENGXianxian，LIXinyi，WANGTeng，HUDan，HUANGYan1DepartmentofCardiology，RenminHospitalofWuhanUniversity，Wuhan430060，ChinaAbstract：ObjectiveToobservethemorphologyandactivityaswellastheelectrophysiologicalcharacteristicsinacutelyisolatedratcardiomyocytesdigestedbycyclicperfusionofcollagenasetypeⅡandtoevaluatetheeffectofcollage⁃nasetypeⅡcirculatingperfusiondigestion.MethodsSinglecardiomyocytesofadultratswereisolatedbyusingtheself-madeLangerdorffapparatusforretrogradeaorticperfusionandcollagenasetypeⅡcirculatingperfusiondigestion.Myo⁃cytestoleratedtocalciumwerescreenedbyaddingcalciumstepbystep.Themorphologyandcontractioncapacityofindi⁃vidualcardiomy...
