不同因素对包埋质量的影响_张睿.pdf

中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY AND CYTOCHEMISTRY第 31 卷第 6 期2022 年 12 月Vol.31.No.6December.2022收稿日期2022-05-16 修回日期2022-12-08基金项目湖北省卫生健康委科研项目（WJ2021F053）作者简介张睿，女(1986 年)，汉族，主管技师*通讯作者(To whom correspondence should be addressed)：不同因素对包埋质量的影响张睿1，罗锦1*，朱正鹏1，马健波1，徐佳佳2（1湖北医药学院附属国药东风总医院病理科，十堰 442008；2湖北医药学院附属国药东风总医院影像科，十堰 442008)摘要目的 改良包埋操作细节，以期提升包埋质量。方法 比较采用不同包埋模具温度、不同第一次注蜡量、冷台添加水与否、不同加盖包埋底盒方式、不同二次注蜡角度在组织包埋合格率、撬出蜡块甲级率、HE 切片组织结构完整性、细胞显示效果、免疫组织化学染色效果的差异。结果 通过预热包埋模具至 70、减少第一次注蜡量、在冷台上加入少量的水、待模具侧壁的石蜡稍凝固后再加盖包埋底盒、二次注蜡时将包埋模具连同包埋盒倾斜 1025 等条件可显著提高包埋合格率、蜡块质量甲级率、切片组织结构完整性、细胞显示效果和免疫组化染色优良率。结论 通过在包埋过程中延缓或加速石蜡凝固，控制注蜡量、调整注蜡角度等可显著提升包埋质量。关键词 石蜡包埋；改良方法；质量中图分类号R361 文献标识码A DOI：10.16705/ki.1004-1850.2022.06.012Exploration of improved methods for tissue embedding in paraffinZhang Rui1,Luo Jin1*,Zhu Zhengpeng1,Ma Jianbo1,Xu Jiajia2(1Department of Pathology,Sinopharm Dongfeng General Hospital,Hubei University of Medicine,Shiyan 442008,China;2Department of Radiology,Sinopharm Dongfeng General Hospital,Hubei University of Medicine,Shiyan 442008,China)AbstractObjective To improve the details of the embedding operation in order to improve the embedding quality.Methods Through experiments,the qualified rate of tissue embedding was compared between the two groups using different embedding mold temperatures,different amounts of first wax injection,whether water was added to the cold stage,different methods of embedding bottom boxes with lids,and different angles of secondary wax injection.Grade A rate of pried wax block,HE section tissue structural integrity,cell display effect,immunohistochemical staining effect difference were also compared.Results By preheating the embedding mold to 70C,reducing the amount of wax injection for the first time,adding a small amount of water on the cold table,and covering the embedding bottom box after the paraffin on the side wall of the mold is slightly solidified,tilting the embedding mold together with the embedding box by 10 to-25 angle when injecting wax for the second time can significantly improve the embedding qualification rate,the grade A rate of paraffin block quality,the structural integrity of slices,the effect of cell display and immunohistochemical staining excellent rate.Conclusion By delaying or accelerating paraffin solidification during the embedding process,controlling the amount of wax injection and adjusting the angle of wax injection can significantly improve the embedding quality.KeywordsParaffin embedded;improved method;quality包埋是指将组织放于受热熔化的载体中，通过载体冷却固化后支撑组织的过程1，是组织制片中重要的环节之一。日常工作中最常用的包埋方法即石蜡包埋。石蜡包埋质量的好坏会直接影响后续的切片、染色效果，但石蜡包埋的过程中细节多，容易出现包埋不佳的情况。为了达到满意的包埋效果我们进行了技术探索，通过优化操作细节，以期提升包埋质量。资料与方法1 材料与分组从国药东风总医院病理科2020年6月的病理标本中，选取 800 例标本，其中大标本（直径 0.4 cm）650 块，小标本（直径 0.4 cm）150 块，将标本随机分成对照组（325 个大标本+75 个小标本）和实验组（325 个大标本+75 个小标本），各 400 块。2 方法对照组：先往常温包埋模具中开始第一次注蜡，一次性注满模具，置于热台上2，放入组织，盖上包埋中国组织化学与细胞化学杂志612第 31 卷盒，进行第二次注蜡，蜡液的液面高度接近包埋盒上缘。实验组：每例取 1 个加热至 70 的包埋模具，将热包埋模具放置包埋机蜡嘴下方热台（温度为 70），开始第一次注蜡，注蜡量为包埋模具容量的2/3；用加热的包埋镊夹取组织，放入模具底部中央；将包埋模具移至表面添加有少量水的包埋机冷台上，轻压组织，使组织稳稳的黏连在包埋模具上；待模具侧壁的石蜡稍凝固后加盖包埋盒底盒，包埋底盒倾斜一定夹角，先将长轴一侧接触蜡液再缓缓放平，轻压；二次注蜡时包埋模具连同包埋盒倾斜1025（图1），蜡液液面没过包埋盒下缘，置于冻台充分冷却，再进行常规切片，然后行 HE 染色（表 1）。图 1 包埋过程中的操作要点。A，包埋盒盖于包埋模具时，包埋盒倾斜一定夹角，先将长轴一侧接触蜡液再缓缓放平，轻压，可减少气泡的残留；B，二次注蜡时包埋模具连同包埋盒倾斜 10 25Fig.1 Key points of the embedding procedure.A,when the embedding box was covered with the embedding mold,the embedding box was inclined at a certain angle.First touch the wax liquid on one side of the long axis,then slowly flatten it and press lightly to reduce the residual air bubbles;B,during the second injection of wax,the embedding mold and the embedding box were inclined at an angle of 1025.表 1 实验组与对照组蜡包埋方法对比Tab.1 Comparison of paraffin embedding methods between experimental group and control group步骤对照组实验组包埋模具常温70 第一注蜡一次性注满整个包埋模具注蜡量为包埋模具容量的 2/3冷却方式单纯冷台冷却在冷台上加入少量的水加盖包埋底盒直接加盖包埋底盒待模具侧壁的石蜡稍凝固后加盖包埋盒底盒，包埋底盒倾斜一定夹角，先将长轴一侧接触蜡液再缓缓放平，轻压二次注蜡包埋模具与注蜡方向相垂直，注蜡量为注满包埋底盒包埋模具连同包埋盒倾斜 10 25，注蜡量为没过包埋底盒下缘即可3 观察指标3.1 组织包埋合格标准组织蜡块与包埋盒平行无裂隙、包埋组织居中、组织排列整齐、排列方向一致、包埋面准确、包埋面高低一致、石蜡与组织融合、注蜡适宜、蜡块无气泡、包埋无污染。包埋合格率=达到包埋合格标准的蜡块数/蜡块总数。3.2 撬出蜡块质量标准甲级：四周边缘无残蜡；乙级：一边或两边仅有少量残蜡；丙级：一边有大量残蜡或三边以上有少量残蜡；丁级：两边及以上有大量残蜡。3.3 后续工作质量观察指标由两名高年资医师对 HE 染色效果进行评判，评判组织结构完整性、细胞透明度和核质对比度，每项 10 分，根据质量缺陷扣减相应分值，每项指标的分数取其均值。选取两组中进行免疫组化染色的切片各 120 张，进行阅片评分，分值 90 分为优良切片，分别统计两组的免疫组化切片优良率。评分标准参考免疫组织化学病理诊断3。张睿等.不同因素对包埋质量的影响第 6 期 613结 果1 蜡块包埋质量对照组合格率为86.75%（347/400），实验组包埋合格率为 93.50%（374/400），显著高于对照组；其中实验组与对照组在包埋面高低一致、石蜡与组织融合、蜡块无气泡方面也显著优于对照组（表 2）。2 撬出蜡块质量对照组蜡块质量甲级率为 68.75%，实验组蜡块质量甲级率为 98.25%，实验组蜡块质量甲级率显著高于对照组（表 3）。3 HE 染色切片质量对 HE 染色切片比较发现，对照组 HE 切片完整度欠佳，组织结构欠清晰，细胞核与细胞质对比欠清晰；实验组组织切面较为完整，无刀痕、裂隙、颤痕，切片厚薄均匀，组织结构和细胞形态清晰（图2）；实验组的组织结构完整性、细胞显示效果评分均显著高于对照组（表 4）。4 免疫组织化学染色切片质量对照组切片中皱褶较多，皱褶区域组织结构不清，且有背景着色（图 3A、C）；实验组切片平整，无皱褶折叠，组织结构清晰，对比鲜明（图 3B、D）；实验组切片优良率（97.50%）显著高于对照组切片优良率（90.83%）（表 5）。表 5 免疫组织化学染色切片质量统计学分析Tab.5 Statistical analysis of quality of immunohistochemically stained sections 分组优良率2P对照组90.83%4.8550.028实验组97.50%讨 论包埋是组织制片过程中的重要环节，包埋质量的好坏直接影响到后续的制片效果。随着医疗技术的不断发展，胃肠镜、纤维支气管镜活检及超