安儿宁颗粒在幼年大鼠临床前安全性评价研究_徐聪.pdf

2022 年 12 月第 30 卷 第 8 期中国实验动物学报ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICADecember 2022Vol.30 No.8徐聪,杨正标,王海苹,等.安儿宁颗粒在幼年大鼠临床前安全性评价研究 J.中国实验动物学报,2022,30(8):1050-1057.Xu C,Yang ZB,Wang HP,et al.Safety evaluation of oral administration of Anerning granules in young rats J.Acta Lab Anim Sci Sin,2022,30(8):1050-1057.Doi:10.3969/j.issn.1005-4847.2022.08.005基金项目国家科技重大专项(2011ZX0931-003),青海省重大科技专项(2020-SF-A3-2),浙江省医药卫生科技计划项目(2020KY105)。Funded by the National Science and Technology Major Project of China(2011ZX0931-003),Major Science and Technology Projects in Qinghai Province(2020-SF-A3-2),Medical Health Science and Technology Project of Zhejiang Provincial Health Commission(2020KY105).作者简介徐聪(1987),女,助理研究员,硕士,研究方向:药物毒理学。Email:xiaoxue-87 通信作者陈颖(1967),女,高级实验师,大专,研究方向:药物毒理学。Email:chenyinap 安儿宁颗粒在幼年大鼠临床前安全性评价研究徐聪1,2,杨正标1,2,王海苹3,李怀平3,郑高利1,2,宣尧仙1,2,陈颖1,2(1.杭州医学院安全性评价研究中心,杭州 310053;2.浙江省药物安全性评价技术研究重点实验室,杭州医学院,杭州 310053;3.金诃藏药(山东)健康产业有限公司,济南 250104)【摘要】目的 研究安儿宁颗粒单次给药和 3 个月重复给药对幼年大鼠的毒性影响,评估安儿宁颗粒对临床儿童患者的长期使用安全性。方法 20 只幼年大鼠(3 4 周龄),按最大给药量法,单次给予安儿宁颗粒 240 g生药/kg 体重的剂量,观察大鼠的毒性反应和死亡情况;200 只幼年大鼠(3 4 周龄)按体重均衡随机分为溶媒对照组、唐古特乌头组、安儿宁颗粒低、中、高剂量组,每组 40 只,雌雄各半,分别灌胃给予纯水、唐古特乌头 5.5 g 生药/kg 体重、安儿宁颗粒 3、11、40 g 生药/kg 体重,每天 1 次,连续 91 d,于给药中期(给药 1.5 个月)、停药(给药3 个月)和恢复期结束(停药后4 周)分别抽样剖检大鼠40 只(每组10 只,雌雄各半)、80 只(每组20 只,雌雄各半)和 40 只(每组 10 只,雌雄各半),检测体重、摄食、血液学、血清生化学、凝血、尿液、眼科及组织病理学等相关指标。结果 幼年大鼠单次经口给予最大给药量的安儿宁颗粒,未见明显急性毒性;重复经口给予安儿宁颗粒 91 d,仅见高剂量雄鼠摄食量减少和体重增长减缓、唐古特乌头组和给药组雄鼠中性粒细胞和单核细胞数、血清白蛋白均可逆性升高,AST、Na+、Cl-可逆性下降,其余指标均未见显著毒性反应。结论 安儿宁颗粒对幼年大鼠无显著毒性反应。相对安全剂量为 40 g 生药/kg 体重,未观察到有害作用(NOAEL)剂量为 11 g 生药/kg 体重。【关键词】安儿宁颗粒;儿科用药;幼年大鼠;毒性实验【中图分类号】Q95-33 【文献标识码】A 【文章编号】1005-4847(2022)08-1050-08Safety evaluation of oral administration of Anerning granules in young ratsXU Cong1,2,YANG Zhengbiao1,2,WANG Haiping3,LI Huaiping3,ZHENG Gaoli1,2,XUAN Yaoxian1,2,CHEN Ying1,2(1.Center of Safety Evaluation,Hangzhou Medical College,Hangzhou 310053,China.2.Key Laboratory of Drug Safety Evaluation and Research of Zhejiang Province,Hangzhou Medical College,Hangzhou 310053.3.Arura Tibetan Medicine(Shandong)Health Industry Co.,Ltd,Jinan 250104)Corresponding author:CHEN Ying.E-mail:chenyinap 【Abstract】Objective To study the toxicity of a single administration and 3-month repeated administration of Anerning(AEN)granules in juvenile SD rats,and evaluate the long-term safety in children.Methods 20 juvenile SD rats(3 4 weeks)were given the maximum administration dosage(240 g crude drug/kg).This was followed by an observation of toxicity reactions and death for 15 days.Juvenile SD rats(200)were divided into vehicle control,Aconitum tanguticum control,low-dose,middle-dose,and high-dose groups.Each group was composed of 40 rats(half male and half female),each of which was given purified water,A.tanguticum(5.5 g crude drug/kg),and AEN(3,11,and 40 g crude drug/kg),all in a volume of 10 mL/kg,for 91 days.Food intake and body weight were measured,and hematology,中国实验动物学报 2022 年 12 月第 30 卷第 8 期 Acta Lab Anim Sci Sin,December 2022,Vol.30,No.8biochemistry,coagulation,urine,ophthalmologic,and histopathology examinations of 5,10 and 5 rats for each sex in each group were conducted mid-administration,upon drug withdrawal,and 4 weeks after withdrawal.Results No obvious toxic effects or deaths were recorded after the single administration of AEN.After the 3-month repeated administration of AEN,male rats in the high-dose group had decreased body weights,decreased food intake,reversibly increased NEUT count,NEUT ratio,MONO count,MONO ratio,and ALB,and reversibly decreased AST,Na+,and Cl-.ConclusionsThere were no obvious toxicity reactions in young rats given AEN granules.The relative safe dosage of AEN was 40 g crude drug/kg,and the no observed adverse effect level(NOAEL)is 11 g crude drug/kg.The clinical administration of AEN is safe.【Keywords】Anerning granule;pediatric drugs;juvenilerat;toxicity testConflicts of Interest:The authors declare no conflict of interest.安儿宁颗粒为经典藏医儿科用药“久协更卓”的现代剂型,处方由天竺黄、红花、人工牛黄、岩白菜、甘草、高山辣根菜、洪连、檀香、唐古特乌头九味藏药组成1。安儿宁颗粒具有清热祛风、化痰止咳功效,临床上主要用于治疗小儿风热感冒、咳嗽有痰、发热咽痛等上呼吸道感染2-3。处方中青藏高原特有药材唐古特乌头,为毛茛科乌头属,含有内酯型二帖生物碱,文献报道对小鼠具有一定的急性毒性4-5;另红花,为活血化瘀药材,可显著延长凝血酶原和凝血酶时间,可能具有潜在的安全风险6。安儿宁颗粒上市近 20 年,据 2018 2020 年国家药品不良反应数据库数据反馈显示7,安儿宁颗粒使用患儿约为 1480 万,其中有 122 例报告发生腹泻或皮疹等不良反应。虽然其不良反应报告率 0.01%,但鉴于安儿宁颗粒正逐渐被联合用药用于其他小儿适应症8-13,且目前缺少安儿宁颗粒对幼龄动物的相关毒理学数据,本文特开展大剂量安儿宁颗粒在幼年大鼠的单次给药以及 3 个月重复给药的毒性研究,进一步评价其儿科用药安全性。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物240 只 3 4 周龄健康 SPF 级 SD 大鼠,雌雄各半,体重为 40 60 g,购自上海市西普尔-必凯实验动物有限公司【SCXK(沪)2018-0016】。饲养期间各组大鼠自由饮水(经 LAWS-2000 实验动物反渗透纯水机处理纯水和摄食(钴 60 辐照的全价营养颗粒饲料),给药前大鼠禁食不禁水,温度 20.5 25.5,相对湿度 50%68%,每小时通风次数15 次,12 h 光照明暗交替,饲养于杭州医学院安全性评价研究中心屏障系统【SYXK(浙)2017-0010】。实验机构通过国家 GLP 认证和 AAALAC 认证,实验遵循 GLP 原则。本研究方案获得本机构实验动物伦理委员会的批准(GLP-A-003)。1.1.2 主要试剂与仪器安儿宁颗粒(清膏),黄棕色胶状物,3.1 g 生药/g 清膏,批号:20160201,金诃藏药股份有限公司提供;人工牛黄,批号:150731,青海九康中药饮片有限公司生产;临用前,按处方量比例 1 g 安儿宁颗粒清膏加 34.2 mg 人工牛黄,配制成“安儿宁颗粒”原液,用于高剂量组给药,中、低剂量组受试物取“原液”按比例用纯水配制成相应的给药浓度。唐古特乌头提取清膏(3.57 g 生药/g,金诃藏药股份有限公司,批号:20160201),棕褐色粘稠液体,用纯水配制成给药浓度。CA-1500 全自动血凝分析仪(Sysmex,日本);7100 全自动生化分析仪(H