基层疾病预防控制中心分子生物学实验室质量管理要点分析.pdf

医学检验与临床2 0 2 3年第34卷第8 期Medical Laboratory Science and Clinics,2023,Vol.34,No.873doi:10.3969/j.issn.1673-5013.2023.08.018基层疾病预防控制中心分子生物学实验室质量管理要点分析孙灵利(北京市朝阳区疾病预防控制中心，北京10 0 0 2 1)摘要 基层疾病预防控制中心分子生物学实验室在日常及应急工作中承担着重要的检测任务，为疾病预防控制领域提供了科学技术支撑。本文基于分子生物学实验流程，从人、机、料、法、环五个方面提出了目前基层疾病预防控制中心分子生物学实验室质量管理工作中存在的问题，并提出了完善分子生物学实验室质量管理的方案。关键词】疾病预防控制中心；分子生物学实验室；质量管理疾病预防控制中心作为承担我国各种传染性疾病预防与控制工作机构，它在疾病预防控制工作中占据核心地位I-3。其主要责任为通过预防控制疾病、残疾以及伤害来为创建一个健康的环境，有助于社会的稳定，对确保国家安全以及人民群众的安全均具有非常积极的意义4。新冠病毒的暴发给我国疾控体系提出了前所未有的挑战。而分子生物学实验室作为疫情检测的重要一环，更是承担着巨大的责任，因此确保疾病预防控制中心分子生物学实验室检测质量极为重要。近几年，基层疾病预防控制中心的分子生物学检测水平和能力得到了很大的提升，但是分子生物学实验程序较为复杂，多个环节均可影响实验结果，分子生物学实验室要求独立分区，因此需要提高实验室质量管理水平，确保实验室检验结果。本文针对基层疾病预防控制中心分子生物学实验室在质量管理及控制方面存在的问题，从人、机、料、法、环等方面进行了研究及探讨。1基层疾控中心分子生物学实验室工作流程分析1.1样本接收根据检测需要接收样本，例如血液、唾液、呼吸道分泌物等，接收时应严格遵守消毒规程，避免样本污染。实验室需要对样本信息进行登记，掌握样本采集的时间和标本类型等信息，以便后续分析使用。1.2核酸提取提取样本中的总RNA或DNA，这是分子生物学检测的关键步骤。提取方法可以采取化学法、机械法、磁珠法等多种方法。1.3核酸扩增对RNA样本进行反转录，合成cDNA后进行PCR扩增；对DNA进行PCR扩增。PCR扩增可以采用实时荧光PCR、普通PCR等方法。反应体系应严格控制，确保不发生假阳性等误判结果。1.4结果判定普通PCR方法将PCR扩增产物进行凝胶电泳，根据其扩增条带大小判定结果；实时荧光PCR方法根据其扩增图谱及Ct值判断结果。1.5序列分析随着高通量测序技术的成熟，部分分子生物学实验室配置了二代高通量测序仪或者三代高通量测序仪，通过对病原基因组测序可以第一时间获取病原的基因信息，解释病原的来源、传播、变异演化等问题。一基金项目：北京市朝阳区科技计划课题，项目编号：CYSF2206；科技部政府间合作项目，项目编号：2 0 2 2 YFE0102400；首都卫生发展科研专项（首发2 0 2 2-1G-4231）。.742基层疾控中心分子生物学实验室检验质量的影响因素2.1实验室人员操作技能不够熟练由于分子生物学实验人员的专业性要求较高，如果没有进行充分培训和考核，就容易出现操作不规范、实验失败、误判结果、数据记录不全等问题；而且还可能造成实验室的核酸污染等情况，这样会对检测结果的准确性产生很大的影响。2.2检测仪器的使用和维护不当分子生物学仪器是分子生物学实验室的重要工具，直接影响实验的结果质量。常使用的核酸提取仪、实时荧光PCR仪、测序仪等设备较昂贵，使用成本较高。常出现的问题有：不熟悉设备使用说明书、不正确的操作、不及时的维护保护、不充分的设备管理等。这些问题的出现可能导致实验室的设备故障或实验误差，实验数据和结果产生的负面影响不可忽视。实时荧光PCR扩增失败原因有很多，图1为在实验过程中因为仪器荧光通路未及时校准导致的实时荧光PCR扩增失败图谱。Amplfication Plot10.0007.5005.0002.500-2.500-6.00-7.500-10.00-12.500G2G1图1仪器荧光通路未及时校准导致的实时荧光PCR扩增失败图谱2.3试剂的选择和储存不当分子生物学试剂的研发和生产制造技术逐年提高，选择范围越来越广，有时试剂质量和不同批次之间有所差异，可能会导致实验结果的错误和不稳定性问题。分子生物学试剂的储存，一般都会有其相应的要求，如果试剂存储在错误的温度下或者超过其保质期，会导致试剂的活性和稳定性发生变化，进而对实验结果造成不利的影响。实时荧光PCR扩增失败原因有很多，图2 为在实验过程中因为试剂储存条件不当导致的实时荧光PCR扩增失败图谱；基因芯片自检失败原因有很多，图3为芯片质量不合格导致的三代高通量测序仪基因芯片自检失败图谱。Medical Laboratory Science and Clinics,2023,Vol.34,No.8Run state sequencing图3芯片质量不合格导致的三代高通量测序仪基因芯片自检失败图谱2.4未按标准操作流程进行实验操作分子生物学实验可针对多种病原，且涉及多种检测方法，每种方法的操作都需要有一份标准操作规程，以确保每个步骤的规范化和标准化。由于种种原因，有些实验室操作规程不够完善，有些规范措施也可能存在漏洞，这将给实验室带来不可预知的风险。基因测序实验操作较为复杂，多种原因会影响Cycle其结果，图4为实验过程中操作不规范导致的测序实验失败图谱。bkbb12456b17kkb20222kb2426782图4操作不规范导致的测序实验失败图谱2.5环境因素的影响实验室环境因素可分为屋内环境因素和生物化学环境因素，均可影响实验结果。物理因素包括温度、湿度和光照等。例如，天气特别炎热或潮湿可能导致实验室里的仪器、试剂等变得不稳定，进而影响实验结果的稳定性。生物化学环境因素包括化学污染物和微生物污染物等。分子生物学实验如果操作不当，可能会造成实验室环境的核酸污染，出现实验结果医学检验与临床2 0 2 3年第34卷第8 期AmplificationPlot1,00,000900.000800.000700.00600.00500.000400.00030002000100.00FAMIROXVIC图2 试剂储存条件不当导致的实时荧光PCR扩增失败图谱.1Pore1Recovering2998inactve0UnclassifiedCycle医学检验与临床2 0 2 3年第34卷第8 期假阳性的现象。实验过程中会有多种原因造成实时荧光PCR结果假阳性，图5为实验室环境核酸污染导致的实验结果假阳性图谱。AmplificationPlot1,300.001.20001,100.001,00000900.0800.0700.00600.000500.0400.00300.00200.000100.00-100.002NOV2NOV1图5实验室环境核酸污染导致的实验结果假阳性图谱3基层疾控中心分子生物学实验室质量管理存在问题的应对举措3.1规范实验人员的培训和考核分子生物学实验室充分发挥以人为本的管理理念，优化配置，合理管控。对实验人员进行培训，定期考核，持证上岗；定期组织开展人员比对、监督检查；落实质量管理人员的职责并定期督查，及时发现检测人员的不足之处，提高专业水平，进而促进检测质量与水平的提升。3.2规范仪器的使用和维护制定相应的操作规程和维护计划，资料进行定期整理更新，保证仪器设备良好运行；定期对仪器进行仪器比对，保证同类型仪器检测结果的真实有效；对需检定校准的设备进行及时的检定校准，并对检定校准结果进行及时确认；每台设备责任到人，落实责任根据仪器的操作规程进行定期维护保养、期间核查，发现问题及时报修停用；设备运行应完整记录并备份，定期进行监控。3.3规范试剂及耗材的管理和使用进行分子生物学实验时，需要选择有效期内的试剂及耗材；对新购置试剂和耗材进行验收，验收合格后方可使用；选择合适的试剂储存条件；对试剂及耗材的入库、出库和使用进行记录，定期进行监督抽查。3.4规范分子生物学实验检测方法实验室需要建立质量控制标准操作规范，确保实验室操作的标准化和规范化。正确选择检测方法，规范检测工作，减少其随意性，又能保证检测数据合理Medical Laboratory Science and Clinics,2023,Vol.34,No.84575合法合规；在方法的质量管理与控制中，在选择检测方法时，应选择通过实验室资质认定的国家标准、地方标准和行业标准，且在开展新的方法之前应进行能力确认及验证；在检测活动的开展过程中要开展必要的质量控制手段，如灵敏度及准确度测定、不确定度分析等措施；应建立严格的数据记录和管理制度，确保实验数据的完整性和准确性，防止数据丢失或误传；要求实验室人员做好记录工作，记录实验过程中产生的各项数据。3.5规范实验室的环境监测严格分子生物学实验室分区操作的原则，试剂准81012141620Cycle22242628备区、样品制备区、扩增区和产物分析区各区独立操作，避免交叉污染；定期对实验室环境进行核酸污染物监控，如果发现核酸污染，立刻停止实验，进行污染核酸清除工作，清除工作结束后，在此对本区域进行核酸污染物监测和评估；监控实验室的温度、湿度等因素，使之满足实验及设备的需求，防止对检测结果产生影响；采用监控记录的方式进行管理，一经发现监控指标与要求存在差异，则应立即停止检测，在调控环境条件符合检测标准后方可进行检测。基层疾病预防控制中心分子生物学实验室质量管理要素实验人员培训实验室质量管理要素和考核实验宝环境的监测分子生物学实验检测方法试剂及耗材的管理和使用提高实验室质量管理水平，确保实验室检验结果图6 基层疾病预防控制中心分子生物学实验室质量管理要素分析4基层疾控中心分子生物学实验室质量管理的效果评估4.1完善质量控制指标质量控制指标是评价检验质量的重要指标，通过质控指标的监测，可以评估实验室质量管理的效果。实验室应制定合理的质控程序和质控指标，通过检测质控样本评估实验室的检测准确度和稳定性。质量控制指标的选择应该与检测项目的性质一致，数据的异常变化或者超出控制限的情况下，应及时采取措施进行分析，包括检测方法的审查、器械的校准和维修等。样本接妆仪器的使用和维护分子生物学实验流程序列分析核酸提取站采翔定核酸扩增764.2内部审核内部审核是指实验室自我评估、自我监督和自我改进的过程。通过内部审核，可以及时发现实验室存在的问题和不足，对实验室质量管理进行全面的自我评估和提高。基层疾控中心分子生物学实验室可根据所属单位质量体系要求制定每年度的内审计划，成立内审工作小组，编制审查表，对实验室各个环节进行审查。内审后，可根据出现的问题形成不符合项及纠正措施报告。最后形成内审材料，对整个实验室质量体系及管理水平进行分析评价。4.3外部质量评估外部质量评估是通过向认证机构或者有关权威部门提供检测结果，由专业人员进行质量评估，给出评估意见和建议。外部评估过程包括实验室注册审核、检测标准参照检验、质量管理分析等几个环节。严格参加外部质量评估可以检查实验室质量管理的实施效果，加强实验室质量意识，提高实验室质量管理水平，确保检验结果的准确性。实验室应定期参加各级机构组织的能力验证和考核活动，积极参与国际间、国内同部门间的实验室比对试验。根据外部评审、能力验证、考核、比对等结果来评估本实验室的工作质量并采取相应的质控改进措施。4.4检测结果效率提高通过加强实验室人员的专业化培训、建立和实施标准操作规程等措施，产生了一定的推动作用，使得实验室内操作规范、样本处理流程更加流畅，检测结果效率有了显著提升。通过检测时间、检测准确度、检测通量和样本处理量等方面的效率提升，评估实验室质量管理水平，完善实验室质量管理体系，提高实验室质量管理水平。综上所述，随着我国政府部门以及社会群众对于基层公共服务部门服务质量提升的重视度不断提升。在当今时代背景下，疾病预防控制中心实验室的质Medical Laboratory Science and Clinics,2023,Vol.34,No.8参考文献1叶昌远,程晓玲,陈伟君.影响微生物检验结果因素及质量控制效果分析.内蒙古医学杂志,2 0 2 0,52(3):53-54.2范玉萍.疾控中心微生物实验室质量控制的影响因素及对策分析).中国保健营养2 0 2 0,30(2 1),39 2.3张娜.疾控中心微生物实验室质量控制的影响因素及对策分析.世界最新医学信息文摘（连续型电子期刊),2 0 2 0,2 0(7 7),157-158.4刘欣.基层疾控中心微生物检验的常见问题与对策分析.心理月刊,2 0 2 0,15(6):2 33-2 33.5皇甫素慧.疾控中心微生物实验室质量控制的影响因素及对策分析.临床检验杂志(电子版),2 0 2 0,9(1):12-14.6孙晓朋,闫文斌,曹莹,等.药品微生物检查实验室质量控制影响因素探索.首都食品与医药,2 0 2 0,2 7(23):113-114.7谢珊,郭华.基层疾控机构实验室质量管理存在问题与应对举措.中国卫生标准管理,2 0 19,10(0 9):48-50.8蔡灵,许述松,黄小平,等.基层疾病预防控制机构理化实验室质量管理中存在的问题及对策探讨.大众标准化,2 0 2 3,39 2(0 8):19-2 1.医学检验与临床2 0 2 3年第34卷第8 期量管理与控制变得至关重要7-8 。随着分子生物学技术的大范围提升和普及，其在疾控工作中发挥的作用也越来越重。结合分子生物学实验本身的特点，构建有效的质量管理体系，从人、机、料、法、环五个方面进行有效管控，强化质量控制，在实践中结合先进的管理理念，不断完善和改进质量管理及控制措施，对质量控制效果进行有效评价，从而不断提高实验室的检测质量，提高基层疾病预防控制中心的检测质量和服务效能。