鸡毒支原体活疫苗%28F36株%29的免疫效果评估.pdf

福建畜牧兽医第 45 卷第 4 期2023 年鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤的免疫效果评估张惠云兆丰华生物科技渊福州冤有限公司福州350014摘要鸡毒支原体在国内鸡场的感染率较高袁疫苗免疫是防控鸡毒支原体的有效方法之一遥 本试验旨在观察鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤免疫鸡群的安全性和有效性遥 选择体重相近的 7 日龄 SPF 鸡 80 羽袁免疫组点眼免疫鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤袁对照组点眼免疫生理盐水袁于 38 日龄对免疫组和对照组鸡群采用鸡毒支原体 R 株攻毒袁攻毒后每天观察鸡群采食尧精神状况尧呼吸道症状和死亡情况袁 分别于 38 日龄尧52 日龄对两组鸡进行称重袁7 日龄尧14 日龄尧21 日龄尧38 日龄尧52 日龄采血检测抗体袁52日龄采集咽喉拭子做 PCR 检测袁并于 52 日龄将所有鸡剖杀袁做气囊病理性损伤和增重检查遥 结果表明院鸡毒支原体活疫苗渊F36株冤免疫鸡群后袁未见明显免疫副反应与呼吸道症状袁免疫组相对于对照组增重显著渊P约0.05冤袁抗体滴度更好袁52 日龄咽喉拭子PCR 检测 R 株阳性率免疫组低于对照组袁攻毒后免疫组对气囊保护率达 99%袁而对照组均出现气囊病变遥 本试验结果证实鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤具备良好的安全性与有效性袁为该疫苗产品免疫效果评估提供数据参考遥关键词鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤 安全有效文献标识码院A文章编号院1003-4331渊2023冤04-0053-03Evaluation of the immune efficacy of live Mycoplasma gallisepticum vaccine(F36 strain)Zhang Huiyun渊Jofunhwa Biotechnology(Fuzhou)Co.Ltd,Fuzhou 350014冤Abstract The infection rate of Mycoplasma gallisepticum in domestic chicken farms is high.vaccination is one of the effective meth鄄ods to prevent and control MG.The purpose of this experiment was to observe the safety and effectiveness of live MG vaccine(F36strain)in immunizing chickens.80 7-day-old SPF chickens with similar weight were selected,the immunization group was immunizedwith live MG vaccine(F36 strain)and the control group was immunized with physiological saline by the spot-eye immunity.The immu鄄nized group and the control group were challenged with Mycoplasma gallisepticum R strain at the age of 38 days.After the challenge,the feed intake,mental condition,respiratory symptoms and death of the chickens were observed every day.The chickens of the twogroups were weighed at the age of 38 days and 52 days,respectively.Blood samples were collected at 7 days,14 days,21 days,38days and 52 days for antibody detection.Throat swabs were collected at 52 days for PCR detection.All the chickens were killed at 52days for balloon pathological damage and weight gain inspection.The results showed that the chickens immunized with live MG vac鄄cine(F36 strain)had no obvious immune side effects and respiratory symptoms.The weight of the immunized group was significantlyincreased compared with the control group(P0.05),and the antibody titer was better.The positive rate of R strain detected by PCRon throat swabs at 52 days of age was lower than that in the control group.After challenge,the protection rate of the immunized groupto the airbag after the attack was 99%,while the control group had airbag lesions.The results of this test confirmed that the live MGvaccine(F36 strain)had good safety and efficacy,which provided data reference for the evaluation of the immune effect of the vaccineproduct.Key words Live Mycoplasma gallisepticum vaccine(F36 strain)safety efficacy鸡毒支原体 渊Mycoplasma gallisepticum袁MG冤属于柔膜体纲尧支原体目尧支原体科袁是一类无细胞壁尧能自我复制的单细胞原核生物1遥 鸡毒支原体主要引起鸡慢性呼吸道感染袁 是一种严重危害养禽生产的病原体袁 其主要危害是该病经常在规模化鸡场中缓慢的流行袁导致产蛋鸡产量下降袁肉鸡生长缓慢尧饲料报酬率低袁死淘率明显上升2袁对养禽业危害巨大遥 控制鸡毒支原体病普遍采取的办法有抗生素治疗尧疫苗免疫等袁在养殖端限抗尧禁抗的大环境下袁使用安全有效的疫苗和制定科学合理的免疫程序防控鸡毒支原体病是大势所趋遥 鸡毒支原体 F 株是毒力低尧免疫效果好的优势疫苗毒株遥 宁宜宝3对 F 株进行深入全面研究袁 在人工培养基中进行传代减毒培养袁培育出 F36 株遥 用 F36 株培养物以 10 倍免疫剂量点眼接种无鸡毒支原体尧 滑液囊支原体感染的小鸡袁均不引起临床症状和气囊损伤遥1材料与方法1.1材料鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤院由兆丰华生物科技渊福州冤有限公司生产袁批号为 2021001袁活菌计数 4伊108CCU/mL遥 攻毒菌株院鸡毒支原体 R 株由兆丰华生物科技渊福州冤有限公司实验室保存遥试验用鸡院 自山东济南斯帕法斯公司购买 SPF鸡胚袁由本实验室孵化至 7 日龄遥鸡毒支原体 ELISA抗体检测试剂盒院购自美国 IDEXX渊爱德士冤公司袁53福建畜牧兽医第 45 卷第 4 期2023 年批号 FS389遥1.2方法选用 80 羽 7 日龄 SPF 鸡袁 随机分成两组袁每组 40 羽遥 免疫组点眼免疫鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤袁对照组点眼免疫生理盐水遥 38 日龄免疫组和对照组进行鸡毒支原体 R 株攻毒袁52 日龄剖检进行气囊观察评分遥1.3指标检测1.3.1增重测定分别于 38 日龄尧52 日龄对两组鸡进行称重遥1.3.2抗体检测分别采集 7 日龄尧14 日龄尧21 日龄尧38 日龄尧52 日龄鸡血液袁分离血清袁按照 IDEXX检测试剂盒说明书进行 ELISA 抗体检测袁MG 抗体滴度大于 1 076 判定为阳性遥1.3.3观察鸡群健康状况免疫组和对照组鸡群以鸡毒支原体 R 株攻毒后袁 每天观察鸡群的采食尧精神状况尧呼吸道症状和死亡情况遥1.3.4咽喉拭子 PCR 检测引物院根据 GenBank 上鸡毒支原体 R 株 pvpA 基因序列 渊基因登录号为AE015450.1冤袁用软件 Primer5.0 设计引物袁引物序列为 MG-R-F院AGAATGCTCATCCAGGTCAAC曰MG-R-R院GGTGTAGACCATTTGGCATTG袁预期扩增的目的片段大小为 330 bp遥 引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成遥PCR 反应体系院超纯水 17.0 滋L袁模板 2.0 滋L袁10 伊buffer 2.5 滋L袁NTP 2.0 滋L袁 上 下 游 引 物 各0.5 滋L袁rTaqDNA 聚合酶用量 0.5 滋L遥PCR 反应条件院95 益预变性 5 min曰94 益变性30 s袁56 益退火 40 s袁72 益尧1 min袁72 益延伸 5 min袁共进行 35 个循环遥1.3.5剖检气囊评分按照 H.W.Yoder 等的评判标准袁将气囊损伤程度分为五个等级4遥 气囊病理计分标准见表 1遥表 1气囊病理计分标准气 囊 损 伤 的 保 护 率 评 定 计 算 公 式 院每羽鸡两侧气囊损伤计分总和试验鸡数曰保护率=对照鸡气囊损伤计分-免疫鸡气囊损伤计分对照鸡气囊损伤计分伊100%遥2结果2.1增重记录免疫组和对照组 38 日龄尧52 日龄鸡体重袁采用 SPSS Statistics17.0 进行单因素方差分析袁结果表明院38 日龄与 52 日龄鸡袁免疫组相对于对照组体重显著增加渊P0.05冤袁见表 2遥表 2免疫组和对照组鸡体重情况注院同行数据肩标不同字母表示差异显著渊P0.05冤遥2.2MG 抗体滴度检测免疫组鸡群抗体滴度几何平均值从 0 上升到 1208袁 对照组的值比较低袁免疫组抗体阳性率 21 日龄为 5%袁28 日龄为 30%袁38 日龄为 80%遥说明免疫组鸡群免疫 F 株后能产生抗体袁 抗体持续上升遥 抗体阳性率液也是持续上升的袁这与宁宜宝1F 株活疫苗免疫后 1 个月袁抗体阳性率应达 80%相一致遥 抗体滴度与抗体阳性率见图 1-图 2遥图 1免疫组和对照组 MG 抗体滴度图 2免疫组和对照组 MG 阳性率2.3鸡群健康状况2.3.1攻毒前鸡群健康状况免疫组和对照组鸡群分值症状0 分 气囊正常袁清洁透明而薄1 分气囊稍有增厚和轻度混浊袁局部有少数灰色和黄色渗出物斑点2 分部分气囊区域有可见的灰色和黄色渗出物袁同时伴有气囊中度增厚3 分 大片气囊布满黄色干酪样渗出物4 分 整个气囊布满黄色干酪样渗出物袁气囊失去弹性日龄体重渊g 羽冤免疫组对照组38 日龄52 日龄629.56依1.85a1 235.89依2.17a598.07依10.32b980.54依45.04b54福建畜牧兽医第 45 卷第 4 期2023 年精神状况好袁 采食量正常袁 无支原体感染的临床症状遥2.3.2攻毒后鸡群健康状况攻毒后免疫组有 1 羽鸡出现支原体感染症状袁而对照组 40 羽鸡均出现鸡毒支原体感染症状遥 鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤免疫鸡群能有效抵抗强毒 R 株的攻击遥 见表 3遥表 3攻毒后鸡群健康状况2.4咽喉拭子检测采集免疫组和对照组 52 日龄鸡群的咽喉拭子袁 进行鸡毒支原体 R 株的 PCR 检测遥 结果为免疫组 52 日龄鸡咽喉拭子 R 株检测阳性率为 5%袁而对照组 52 日龄鸡咽喉拭子 R 株检测阳性率为 90.9%袁见表 4遥表 452 日龄鸡咽喉拭子 PCR 检测阳性率2.5攻毒 14 日龄鸡的气囊损伤情况对照组鸡在攻毒后均出现严重的气囊病变袁 免疫组仅 2 羽出现病变遥 免疫组鸡的气囊损伤保护率为 99%袁见表 5遥该结果与宁宜宝报道 F 株能保护鸡群不发生由鸡毒支原体强毒攻击诱发的气囊炎1和宁宜宝等5提出鸡毒支原体 F 株有较好的免疫效力相符合遥表 5免疫组和对照组攻毒 14 日龄鸡气囊损伤情况3讨论评判疫苗好坏的标准是安全尧有效遥本试验用鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤免疫 SPF 鸡袁验证该疫苗的安全性与有效性遥首先袁鸡群免疫鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤后袁对生长性能没有影响袁且相对于对照组袁增重显著渊P约0.05冤遥 同时袁鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤能刺激鸡群较早产生 MG 抗体曰鸡群 7 日龄免疫后袁21 日龄即可检测到抗体袁且抗体水平尧鸡群抗体阳性率随着日龄增加呈现上升趋势遥孙丰兰等6提出 F 株能有效定殖在鸡气管黏膜的纤毛和气囊上袁 当强毒 R 株攻击时袁F 株已经占位袁R 株无法定殖遥本试验对鸡群免疫鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤袁以鸡毒支原体 R 株攻毒后袁采用 PCR方法对 14 日龄鸡 R 株带毒情况进行检测袁 结果发现免疫组鸡的 R 株阳性率为 5%袁 明显低于对照组的 90.9%遥且免疫组鸡群仅 1 羽出现张口呼吸症状袁其余鸡无鸡毒支原体感染临床症状袁 气囊损伤计分为 0.05袁免疫保护率达到 99%曰而对照组均出现呼吸道症状袁与史爱梅等7得出的 F 株免疫接种能有效降低呼吸道疾病的结论一致遥因此袁笔者认为鸡毒支原体活疫苗渊F36 株冤是安全有效的遥参考文献院1 宁宜宝.鸡毒支原体病的预防控制J.中国家禽,2007(11):6-8.2Ito S,Hanaoka N,Shimuta K,et al.Male non-gonococcalure-thritis:from microbiological etiologies to demographicand clinical featuresJ.Int J Urol,2016,23(4):325-331.3 宁宜宝.鸡毒支原体弱毒株F株对鸡的病原性和近期免疫效果的研究J.中国兽药杂志,1989(3):6-10.4 刘栓江,李国徽.鸡支原体病及综合防治措施J.养禽与禽病防治,2012(5):32-33.5 宁宜宝,李嘉爱,王卓明,等.鸡毒支原体弱毒疫苗的研究-中试生产及检验结果J.中国兽药杂志,1992(3):9-11.6 孙丰兰.鸡毒支原体病渊CRD冤的防控策略J.中国动物检疫,2008,25(6):42-43.7 史爱梅,张明富,李莲瑞.鸡毒支原体流行现状及防控方案J.河南农业,2022(10):47-48.组别鸡群健康状况渊羽冤死亡咳嗽尧打喷嚏尧张口呼吸眼结膜角膜炎尧眼内豆渣样渗出物面部肿胀尧眼睛失明免疫组对照组0012101108组别MG R 株阳性率渊%冤免疫组对照组5.090.9组别攻毒 14 日龄保护率渊%冤出现气囊损伤鸡数渊羽冤每羽鸡平均损伤计分免疫组对照组2/4040/400.054.63990农业农村部印发叶生猪产地检疫规程曳等 22 个动物检疫规程为进一步规范动物检疫工作袁按照叶中华人民共和国动物防疫法曳尧叶动物检疫管理办法曳规定袁我国农业农村部修订了叶生猪产地检疫规程曳等 19 个检疫规程袁制定了叶马属动物屠宰检疫规程曳尧叶鹿屠宰检疫规程曳尧叶动物和动物产品补检规程曳遥相关检疫规程已于 2023 年 5 月印发尧执行遥 2010-2020 年制定的有关规程同时废止袁此前关于动物检疫的相关文件规定要求与新的检疫规程不一致的袁按照新的检疫规程执行遥55