基底外侧杏仁核微量注射ghrelin对大鼠条件性味觉厌恶记忆的影响.pdf

第5 9卷 第3期2 0 2 3年0 6月青 岛 大 学 学 报(医 学 版)J OUR NA LO FQ I N G D AOUN I V E R S I T Y(ME D I C A LS C I E N C E S)V o l.5 9,N o.3J u n e 2 0 2 3 收稿日期2 0 2 2-0 1-0 7;修订日期2 0 2 2-0 6-2 8 基金项目中国博士后科学基金面上资助项目(2 0 1 9 M 6 6 2 2-9 2)第一作者田欣(1 9 9 6-),女,硕士研究生。通信作者周宇(1 9 7 3-),女,博 士,教 授,博 士 生 导 师。E-m a i l:y u z h o u 7 3 1 01 6 3.c o m。基底外侧杏仁核微量注射g h r e l i n对大鼠条件性味觉厌恶记忆的影响田欣,裴彤,赵鸿飞,谭雯璐,刘盼盼,周宇(青岛大学国家生理学重点(培育)学科,山东 青岛 2 6 6 0 7 1)摘要 目的 探讨胃促生长素(g h r e l i n)对条件性味觉厌恶(C T A)记忆的影响及其可能的分子机制。方法将成年S D大鼠随机分为h o m ec a g e组(未处理组)、对照组和实验组,C TA训练前2 0m i n实验组大鼠双侧基底外侧杏仁核(B L A)注射1 5m o l/L的g h r e l i n每侧0.5L,对照组大鼠B L A注射等量生理盐水。C TA训练2 4h后进行记忆测试,用厌恶指数(A I)对C TA记忆进行量化分析。C TA实验结束3 0m i n后取B L A组织,采用实时荧光定量P C R方法检测电压门控钾通道1(K c n a 1)和电压门控钾通道4(K c n a 4)的转录水平。结果 实验组A I明显低于对照组,差异具有统计学意义(t=3.0 5 2,P0.0 5)。与h o m ec a g e组相比,C TA训练后对照组大鼠K c n a 1转录水平下调(F=3.7 4 3,P0.0 5),K c n a 4转录水平上调(F=1 8.3 0 0,P0.0 5)。结论 C TA训练引起B L A脑区K c n a 1和K c n a 4表达的可塑性变化。B L A微量注射g h r e l i n抑制大鼠C TA记忆的获取,这可能与g h r e l i n抑制B L A脑区K c n a 1和K c n a 4表达的可塑性变化有关。关键词 胃促生长素;基底外侧核;钾通道,电压门控;记忆;大鼠 中图分类号 R 3 3 8.2 文献标志码 A 文章编号 2 0 9 6-5 5 3 2(2 0 2 3)0 3-0 3 6 7-0 4d o i:1 0.1 1 7 1 2/j m s.2 0 9 6-5 5 3 2.2 0 2 3.5 9.0 2 0 开放科学(资源服务)标识码(O S I D)网络出版 h t t p s:/k n s.c n k i.n e t/k c m s/d e t a i l/3 7.1 5 1 7.R.2 0 2 3 0 3 0 2.1 7 3 6.0 0 1.h t m l;2 0 2 3-0 3-0 3 1 7:1 6:5 2E F F E C TO F M I C R O I N J E C T I O N O FG H R E L I NI NT H EB A S O L A T E R A L AMY G D A L A O N C O N D I T I O N E DT A S T E A V E R S I O NMEMO R YI NR A T S T I AN X i n,P E IT o n g,ZHA O H o n g f e i,T AN W e n l u,L I U P a n p a n,ZHO UY u(S t a t eK e yD i s c i-p l i n e:P h y s i o l o y(i nI n c u b a t i o n),D e p a r t m e n to fP h y s i o l o g y,Q i n g d a oU n i v e r s i t y,Q i n g d a o2 6 6 0 7 1,C h i n a)A B S T R A C T O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t et h ee f f e c to fg h r e l i no nc o n d i t i o n e dt a s t ea v e r s i o n(C T A)m e m o r ya n dt oe x p l o r et h ep o s s i b l em o l e c u l a rm e c h a n i s m.M e t h o d s A d u l t S p r a g u eD a w l e y r a t sw e r e r a n d o m l yd i v i d e d i n t oh o m e c a g e g r o u p(u n t r e a t e dg r o u p),c o n t r o lg r o u p,a n de x p e r i m e n t a lg r o u p.R a t si nt h ee x p e r i m e n t a lg r o u pr e c e i v e das i n g l ed o s eo fg h r e l i n(1 5m o l/L,0.5Le a c hs i d e)i nt h eb i l a t e r a l b a s o l a t e r a l a m y g d a l a(B L A)2 0m i nb e f o r eC TAt r a i n i n g,a n dr a t s i nt h e c o n t r o l g r o u pw e r ea d-m i n i s t r a t e da ne q u a l v o l u m eo fn o r m a l s a l i n e i nt h eB L A.M e m o r yw a se v a l u a t e d2 4ha f t e rC T At r a i n i n ga n dq u a n t i t a t i v e l ya n a-l y z e db yt h ea v e r s i v e i n d e x(A I).B L At i s s u e sw e r eo b t a i n e d3 0m i na f t e rC T At r a i n i n g,a n dq u a n t i t a t i v er e a l-t i m ep o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o nw a sd o n e t om e a s u r e t h emR NAe x p r e s s i o no fv o l t a g e-g a t e dp o t a s s i u mc h a n n e l 1(K c n a 1)a n dv o l t a g e-g a t e dp o t a s-s i u mc h a n n e l 4(K c n a 4).R e s u l t s T h eA I i nt h ee x p e r i m e n t a l g r o u pw a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a nt h a t i nt h e c o n t r o l g r o u p(t=3.0 5 2,P0.0 5).C o m p a r e dw i t ht h eh o m ec a g eg r o u p,t h ec o n t r o lg r o u ph a ds i g n i f i c a n t l yd o w n r e g u l a t e dK c n a 1t r a n s c r i p t(F=3.7 4 3,P0.0 5)b u t s i g n i f i c a n t l yu p r e g u l a t e dK c n a 4t r a n s c r i p t(F=1 8.3 0 0,P0.0 5).C o n c l u s i o n C T At r a i n i n g t r i g g e r s p l a s t i c i t y c h a n g e s i nK c n a 1a n dK c n a 4e x p r e s s i o n i n t h eB L Ab r a i nr e g i o n.G h r e l i nm i c r o i n j e c t e d i n t o t h eB L Ai n h i b i t sC T Am e m o r ya c q u i s i t i o n i n r a t s,w h i c hm a yb e a s s o c i a t e dw i t h t h e s u p p r e s s i v e e f f e c t o fg h r e l i no np l a s t i c i t yc h a n g e s i nK c n a 1a n dK c n a 4e x p r e s s i o n i nt h eB L Ab r a i nr e g i o n.K E Y WO R D S g h r e l i n;b a s o l a t e r a l n u c l e a r c o m p l e x;p o t a s s i u mc h a n n e l s,v o l t a g e-g a t e d;m e m o r y;r a t s 胃促生长素(g h r e l i n)是一种含有2 8个氨基酸的多肽激素,主要由哺乳动物的胃细胞分泌,对调节进食、葡萄糖代谢和能量稳态至关重要,对学习和记忆等多种脑功能也发挥着复杂的调控作用1。有研究发现,g h r e l i n通过激活海马中的内源性生长激素促分泌素受体(GH S-R 1 a)来促进学习和记忆2-3。而本团队的前期研究发现,g h r e l i n通过激活GH S-R 1 a损害杏仁核相关的情绪记忆4。杏仁核是情绪学习和记忆最重要的脑结构,被认为是整个情绪记 3 6 8青 岛 大 学 学 报(医 学 版)5 9卷忆神经网络的核心。条件性味觉厌恶(C T A)是用来研究厌恶记忆过程的常用行为学范式。已有研究表明,基底外侧杏仁核(B L A)是C T A记忆环路形成的关键脑区5-8。而g h r e l i n能够调节B L A脑区锥体神经元的兴奋性9-1 5。电压门控钾离子通道在调节神经元兴奋性中起着关键作用,并与阿尔兹海默病、帕金森病和精神障碍等神经系统疾病密切相关1 5-2 5。电压门控钾通道1(K c n a 1)和电压门控钾通道4(K c n a 4)属于电压门控钾通道的S h a k e r亚家族,对中枢和外周神经系统的兴奋性有重要调节作用。因此,本研究一方面观察B L A微量注射g h r e-l i n对C T A记忆获取的影响,同时利用实时荧光定量P C R技术观察g h r e l i n对K c n a 1和K c n a 4基因表达的影响,以初步探讨g h r e l i n对C T A记忆获取影响的可能分子机制。1 材料与方法1.1 动物及分组成年S D大鼠,体质量2 8 03 2 0g,购自青岛派特福德白鼠养殖专业合作社。饲养条件为2 1 恒温、5 0%恒湿、1 2h/1 2h昼夜等长循环光照,大鼠可自由进食、饮水、活动。大鼠适应实验室环境至少1周后进行实验。将S D大鼠随机分为h o m ec a g e组(A组)、对照组(B组)和实验组(C组),每组7只。实验组大鼠双侧B L A注射1 5m o l/L的g h r e l i n每侧0.5L,对照组大鼠B L A注射等量的生理盐水,h o m ec a g e组大鼠不做任何处理。本研究得到青岛大学动物伦理委员会批准。1.2 杏仁核埋管大鼠腹腔注射8 0g/L水合氯醛溶液5m L/k g,待麻醉后将大鼠俯卧位固定于脑立体定位仪上。碘附消毒皮肤后,于颅骨顶端正中开口,剥离骨膜,暴露前后囟。调节大鼠头部,使其前囟和后囟位于同一水平面上。参照大鼠脑图谱(P a x i n o s&W a t s o n,2 0 0 5)定位,于颅骨表面钻孔,利用脑立体定位仪,将事先磨好并消毒的不锈钢外导管(2 2g a u g e,长度1.5c m)置于双侧B L A区的上方(前囟后2.8mm,旁开5.2mm,深度7.5mm),用4 1 6胶和自凝牙托粉固定套管,并用自制不锈钢内芯封闭套管,以免外部杂物堵塞套管。术后大鼠休息7d。1.3 微量注射C T A训练前2 0m i n进行B L A区给药。将注射用内管(2 8g a u g e)连接到微量注射器上,注射用内管在脑区的深度比外管长出0.8mm,到达大鼠B L A区域。使用微量蠕动泵,将药物以0.2 5L/m i n的恒定流量缓慢注射到B L A区,给药时间为2m i n,给药量为每侧0.5L。药物注射完毕,要将内管保留在原位超过5m i n,等药物吸收后再缓慢移出,以防药物溢出。1.4 C T A实验大鼠禁水2 4h,准备2支都装有1 5m L自来水的相同吸管,让大鼠饮用1 0m i n。然后互换位置,再让大鼠饮用1 0m i n。每天定时进行适应,共适应4d。第5天进行训练,准备2支都装有1 5m L2g/L甜味剂(S a c c h a r i ns o d i u ms a l th y d r a t e,S i g m a,美国)的相同吸管,让大鼠饮用1 0m i n,2 0m i n后腹腔注射1 0 0mm o l/L氯化锂2 0m L/k g,2 4h后测试。测试方法:在鼠笼中放6支吸管,3支装有5m L自来水,另3支装有同体积的2g/L甜味剂,交叉放置,让大鼠自由饮用2 0m i n,然后测量吸管内剩余的液体量。用厌恶指数(A I)作为评价指标,A I=消耗的水的量/消耗的水和甜味剂的总量1 0 0%。以5 0%作为随机临界点,A I比5 0%高的越多说明味觉厌恶记忆越好,反之,A I越接近5 0%说明味觉厌恶记忆越差。1.5 实时荧光定量P C R法检测K c n a 1和K c n a 4mR NA表达C T A实验完成3 0m i n后,将3组小鼠断颈处死,取出两侧杏仁核。实时荧光定量P C R方法检测K c n a 1和K c n a 4mR NA表达:用R NA提取试剂盒(I n v i t r o g e n1 4 0 4 6 9 0)提取细胞总R NA,用R NA逆转录试剂盒(I n v i t r o g e n1 8 0 8 0-0 5 1)将mR NA逆转录成c D NA,采用S Y B RG r e e n染料法定量检测目的基因K c n a 1和K c n a 4及内参照基因G A P DH表达,按照荧光定量P C R说明书配制P C R反应体系,采用两步法经过4 0个循环完成扩增,采用2-C T法计算目的基因相对表达量。P C R扩增引物及其序列见表1。表1 P C R引物及其序列引物名称位置 引物序列(5 3)K c n a 1上游AG C AA G C T C C T GA C C GA T G T T T AAA下游G T T G G G T T T T T T T T T T C T T T T T G C TK c n a 4上游C G GA G GA G GA G G C GA C A G C GAA C下游C C T C C T C C T C G C T C A G C T C C C T AA GG A P DH上游G G C A C AG T C AA G G C T GA GAA T G下游AT G G T G G T GAA GA C G C C A G T A 3期田欣,等.基底外侧杏仁核微量注射g h r e l i n对大鼠条件性味觉厌恶记忆的影响3 6 91.6 统计学分析应用G r a p hP a dP r i s m6软件进行统计学分析。实验结果以xs表示,两组比较采用双尾t检验,与随机值5 0%相比较采用单样本t检验;多组比较采用单因素方差分析(O n e-w a yANOVA),继以T u r k e y法进行组间两两比较。P0.0 5表示差异具有统计学意义。2 结 果2.1 训练前微量注射g h r e l i n对大鼠C T A记忆获取的影响C T A测试结果显示,对照组和实验组大鼠A I分别为(8 7.6 99.5 0)%和(4 0.9 21 1.5 8)%(n=7),实验组大鼠A I与对照组相比较明显降低(t=3.0 5 2,P0.0 5)。对照组大鼠A I显著高于随机值5 0%(t=9.1 8 0,P0.0 0 1),实验组大鼠A I接近随机值5 0%(t=3.4 8 9,P0.0 5)。表明实验组大鼠味觉厌恶记忆差于对照组,提示训练前B L A微量注射g h r e l i n可抑制大鼠C T A记忆的获取。2.2 g h r e l i n对C T A训练大鼠B L A脑区K c n a 1和K c n a 4转录的影响与h o m ec a g e组相比,C T A训练后对照组大鼠B L A脑区K c n a 1的转录水平明显下调(F=3.7 4 3,P0.0 5),K c n a 4转录水平明显上调(F=1 8.3 0 0,P0.0 5)。见表2。表2 各组大鼠B L A脑区K c n a 1和K c n a 4基因表达的比较(n=7,xs)组别K c n a 1K c n a 4A组11B组0.6 0 270.0 9 761.7 7 900.7 7 88C组0.9 3 380.4 9 460.7 8 960.2 1 043 讨 论本文研究结果表明,经B L A注射1 5m o l/L的g h r e l i n(每侧0.5L)可以抑制大鼠味觉条件性厌恶记忆的获取。这一研究结果与以往g h r e l i n及GH S-R 1 a促进学习和记忆的报道不一致1-5。推测可能的原因为,研究的脑区、药物剂量、采用的行为范式以及动物的年龄和遗传背景等均不同。值得注意的是,先前的许多研究中g h r e l i n的用量均较大(1 0 0n g 1 0 0g),这可能远远超出了其生理值范围6-9。而本研究中仅向B L A脑区注射了低剂量的g h r e l i n(1 2n g)。有文献报道,在中枢神经系统中只有下丘脑中少量细胞能够产生g h r e l i n,而外周循环中的g h r e l i n也只有少量能够通过血-脑脊液屏障到达杏仁核等深部脑区1 0-1 1。因此,本研究中g h r e l i n的作用可能更接近其生理作用,而不是药理作用。本研究结果与部分人体研究结果一致,这些研究表明血清g h r e l i n水平与健康个体和轻度认知障碍病人的认知功能呈负相关1 2-1 5。研究发现,g h r e l i n可增加树突棘密度并促进长时程增强的诱导和维持,这被认为是海马脑区g h r e-l i n调节长期记忆巩固和维持的重要突触机制。g h-r e l i n调节记忆获取的机制尚未明确。除了学习诱导的突触强度的可塑性变化外,神经元内在兴奋性的可塑性变化也被认为是学习和记忆的关键细胞机制1 6-2 1。我们的前期研究结果表明,g h r e l i n可调节外侧杏仁核神经元的兴奋性。电压门控钾通道对神经元兴奋性起着至关重要的调控作用2 2-2 5。有研究发现,K c n a 1通道在杏仁核微环路中的兴奋性和前馈抑制中起重要的调控作用,并且与癫痫发作有关2 5。本研究结果显示,C T A记忆获取时B L A脑区K c n a 1基因表达下调,而K c n a 4基因表达上调。表明B L A区g h r e l i n微量注射阻断了记忆获取过程中K c n a 1和K c n a 4表达的可塑性变化,这一作用可能与g h r e l i n所致B L A神经元的兴奋性异常以及味觉厌恶记忆无法正常形成有关。综上所述,B L A脑区微量注射g h r e l i n可抑制C T A记忆获取,这一过程可能与g h r e l i n阻碍记忆编码过程中特定钾通道的可塑性变化从而影响神经元兴奋性相关。本研究结果为深入探讨g h r e l i n及GH S-R 1 a调控学习记忆的分子机制提供了新的实验依据。参考文献1AN D R EWSZB.T h ee x t r a-h y p o t h a l a m i ca c t i o n so f g h r e l i no nn e u r o n a l f u n c t i o nJ.T r e n d s i nN e u r o s c i e n c e s,2 0 1 1,3 4(1):3 1-4 0.2D I ANOS,F A R RSA,B E NO I TSC,e ta l.G h r e l i nc o n t r o l sh i p p o c a m p a ls p i n es y n a p s ed e n s i t ya n d m e m o r yp e r f o r m a n c eJ.N a t u r eN e u r o s c i e n c e,2 0 0 6,9(3):3 8 1-3 8 8.3R I B E I ROLF,C A TA R I NOT,S AN T O SSD,e t a l.G h r e l i nt r i g g e r s t h es y n a p t i c i n c o r p o r a t i o no fAMP Ar e c e p t o r si nt h eH i p p o c a m p u sJ.P r o c e e d i n g so ft h e N a t i o n a lA c a d e m yo fS c i e n c e so f t h eU n i t e dS t a t e so fAm e r i c a,2 0 1 4,1 1 1(1):E 1 4 9-E 1 5 8.3 7 0青 岛 大 学 学 报(医 学 版)5 9卷4 朱倩倩.G h r e l i n/GH S-R 1 a通路对大鼠味觉厌恶情绪记忆的调控作用及分子机制探讨D.青岛:青岛大学,2 0 1 4.5C HE NL,X I NGTR,WAN G M,e t a l.L o c a l i n f u s i o no f g h-r e l i n e n h a n c e d h i p p o c a m p a ls y n a p t i c p l a s t i c i t y a n d s p a t i a lm e m o r yt h r o u g ha c t i v a t i o no fp h o s p h o i n o s i t i d e3-k i n a s e i nt h ed e n t a t eg y r u so fa d u l tr a t sJ.E u r o p e a nJ o u r n a lo fN e u r o-s c i e n c e,2 0 1 1,3 3(2):2 6 6-2 7 5.6C A R L I N IV P,VA R A S M M,C R A GNO L I N IA B,e ta l.D i f f e r e n t i a l r o l eo ft h e H i p p o c a m p u s,a m y g d a l a,a n dd o r s a lr a p h en u c l e u s i nr e g u l a t i n g f e e d i n g,m e m o r y,a n da n x i e t y-l i k eb e h a v i o r a l r e s p o n s e s t og h r e l i nJ.B i o c h e m i c a la n dB i o p h y s i-c a lR e s e a r c hC o mm u n i c a t i o n s,2 0 0 4,3 1 3(3):6 3 5-6 4 1.7C A R L I N IVP,MON Z N ME,VA R A SM M,e t a l.G h r e l i ni n c r e a s e sa n x i e t y-l i k eb e h a v i o ra n d m e m o r yr e t e n t i o ni nr a t sJ.B i o c h e m i c a la n dB i o p h y s i c a lR e s e a r c hC o mm u n i c a t i o n s,2 0 0 2,2 9 9(5):7 3 9-7 4 3.8GO S HA D R OU F,R ONA GH IA.A t t e n u a t i n gt h ee f f e c to fG h r e l i no nm e m o r ys t o r a g ev i ab i l a t e r a l r e v e r s i b l e i n a c t i v a t i o no f t h eb a s o l a t e r a la m y g d a l eJ.B e h a v i o u r a lB r a i nR e s e a r c h,2 0 1 2,2 3 2(2):3 9 1-3 9 4.9S ON GLG,Z HU Q Q,L I U T W,e ta l.G h r e l i nm o d u l a t e sl a t e r a l a m y g d a l an e u r o n a l f i r i n ga n db l o c k s a c q u i s i t i o n f o r c o n-d i t i o n e dt a s t ea v e r s i o nJ.P L o SO n e,2 0 1 3,8(6):e 6 5 4 2 2.1 0Z HU QQ,X I AOK W,YU M,e t a l.G h r e l i nb u tn o tn e s f a-t i n-1a f f e c t sc e r t a i n f o r m so f l e a r n i n ga n dm e m o r y i nb o t hr a t sa n dm i c eJ.B r a i nR e s e a r c h,2 0 1 3,1 5 4 1:4 2-5 1.1 1C A B R A LA,L P E ZS O T OEJ,E P E L B AUMJ,e t a l.I s g h-r e l i ns y n t h e s i z e di nt h ec e n t r a ln e r v o u ss y s t e mJ?I n t e r n a-t i o n a l J o u r n a l o fM o l e c u l a rS c i e n c e s,2 0 1 7,1 8(3):6 3 8.1 2K E R NA,MAV R I KAK IM,U L L R I C HC,e ta l.H i p p o c a m-p a l d o p a m i n e/D R D 1s i g n a l i n gd e p e n d e n to nt h eg h r e l i nr e c e p-t o rJ.C e l l,2 0 1 5,1 6 3(5):1 1 7 6-1 1 9 0.1 3S P I T Z NA G E LMB,B E N I T E ZA,U P D E G RA F FJ,e t a l.S e-r u mg h r e l i n i s i n v e r s e l ya s s o c i a t e dw i t hc o g n i t i v e f u n c t i o n i nas a m p l eo fn o n-d e m e n t e de l d e r l yJ.P s y c h i a t r ya n dC l i n i c a lN e u r o s c i e n c e s,2 0 1 0,6 4(6):6 0 8-6 1 1.1 4B E L L A RD,G L I C KMANEL,J UD G EL W,e ta l.S e r u mg h r e l i ni sa s s o c i a t e d w i t hv e r b a ll e a r n i n ga n da d i p o s i t yi nas a m p l eo fh e a l t h y,f i t o l d e r a d u l t sJ.B i o M e dR e s e a r c hI n t e r-n a t i o n a l,2 0 1 3,2 0 1 3:2 0 2 7 5 7.1 5YO S H I NOY,F UNAHA S H IY,NAKA T AS,e t a l.G h r e l i nc a s c a d ec h a n g e si nt h ep e r i p h e r a lb l o o do fJ a p a n e s ep a t i e n t sw i t hA l z h e i m e r sd i s e a s eJ.J o u r n a lo fP s y c h i a t r i cR e s e a r c h,2 0 1 8,1 0 7:7 9-8 5.1 6C AOX,Z HU M,HEY,e t a l.I n c r e a s e ds e r u ma c y l a t e dg h-r e l i nl e v e l si np a t i e n t s w i t h m i l dc o g n i t i v ei m p a i r m e n tJ.J o u r n a l o fA l z h e i m e r sD i s e a s e:J A D,2 0 1 8,6 1(2):5 4 5-5 5 2.1 7D AOUD A LG,D E B ANN ED.L o n g-t e r mp l a s t i c i t yo f i n t r i n s i ce x c i t a b i l i t y:l e a r n i n gr u l e sa n d m e c h a n i s m sJ.L e a r n i n g&M e m o r y(C o l dS p r i n gH a r b o r,NY),2 0 0 3,1 0(6):4 5 6-4 6 5.1 8Z HAN G W,L I N D E NDJ.T h eo t h e r s i d eo f t h ee n g r a m:e x-p e r i e n c e-d r i v e nc h a n g e si nn e u r o n a li n t r i n s i ce x c i t a b i l i t yJ.N a t u r eR e v i e w sN e u r o s c i e n c e,2 0 0 3,4(1 1):8 8 5-9 0 0.1 9D I S T E RHO F TJF,OH M M.L e a r n i n g,a g i n ga n di n t r i n s i cn e u r o n a lp l a s t i c i t yJ.T r e n d si n N e u r o s c i e n c e s,2 0 0 6,2 9(1 0):5 8 7-5 9 9.2 0MAT THEWSEA,L I NA R D AK I SJM,D I S T E RHO F TJF.T h ef a s ta n ds l o w a f t e r h y p e r p o l a r i z a t i o n sa r ed i f f e r e n t i a l l ym o d u l a t e d i nh i p p o c a m p a ln e u r o n sb ya g i n ga n dl e a r n i n gJ.T h eJ o u r n a l o fN e u r o s c i e n c e:t h eO f f i c i a l J o u r n a l o f t h eS o c i e-t yf o rN e u r o s c i e n c e,2 0 0 9,2 9(1 5):4 7 5 0-4 7 5 5.2 1OH M M,O L I V E I RAFA,D I S T E RHO F TJF.L e a r n i n ga n da g i n gr e l a t e dc h a n g e si ni n t r i n s i cn e u r o n a le x c i t a b i l i t yJ.F r o n t i e r s i nA g i n gN e u r o s c i e n c e,2 0 1 0,2:2.2 2OH M M,D I S T E RHO F TJF.I n c r e a s e de x c i t a b i l i t yo fb o t hp r i n c i p a ln e u r o n sa n di n t e r n e u r o n sd u r i n ga s s o c i a t i v el e a r n i n gJ.T h eN e u r o s c i e n t i s t,2 0 1 5,2 1(4):3 7 2-3 8 4.2 3YA S O S H I MA Y,YAMAMO T O T.S h o r t-t e r m a n dl o n g-t e r me x c i t a b i l i t yc h a n g e so ft h ei n s u l a rc o r t i c a ln e u r o n sa f t e rt h ea c q u i s i t i o no f t a s t ea v e r s i o nl e a r n i n gi nb e h a v i n gr a t sJ.N e u r o s c i e n c e,1 9 9 8,8 4(1):1-5.2 4K I M MJ,M I Z UMO R ISJY,B