黑龙江八一农垦大学学报第35卷收稿日期：2022-05-17基金项目：黑龙江省自然科学基金联合引导项目（LH2019C046）。作者简介：李钰昌（1997-），男，黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院2019级硕士研究生。通信作者：曹宏伟，女，教授，博士研究生导师，Email：byndcaohongwei@163.com；肖莉杰，女，副教授，硕士研究生导师，E-mail：371579562@qq.com。PCV2Cap蛋白原核表达、纯化及多克隆抗体的制备李钰昌1，郑亮1，2，张华1，2，3，吴志军1，2，3，肖莉杰1，2，3，曹宏伟1，2，3（1.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆163319；2.黑龙江八一农垦大学动物科技学院；3.黑龙江八一农垦大学生物技术中心）摘要：猪圆环病毒2型是一种常见的猪感染性病毒，Cap蛋白为猪圆环病毒2型的核衣壳蛋白，也是该病毒最主要的结构蛋白，是目前猪圆环病毒2型基因工程疫苗研制的关键蛋白。研究构建了Cap蛋白原核表达质粒pET28a-His-Cap，转化Transetta（DE3）表达菌株，IPTG诱导表达，经SDS-PAGE及蛋白免疫印迹试验验证，重组蛋白主要以可溶性形式表达，少数为包涵体蛋白。以Ni-NTA树脂进行蛋白纯化，纯化后蛋白浓度为629μg·mL-1，采用透析袋浓缩将重组蛋白浓缩，浓缩后蛋白终浓度为1.8mg·mL-1。将重组蛋白与弗氏佐剂等体积混合，充分乳化后制备抗原，免疫兔子采集全血，分离血清。经蛋白免疫印迹试验，该多抗与重组蛋白存在免疫反应性，ELISA检测抗体效价可达1∶32000，IFA试验证明该多抗能够特异性识别猪圆环病毒2型。Cap蛋白多克隆抗体的成功制备，为后续猪圆环病毒2型基因工程疫苗制备过程中验证Cap体外蛋白表达提供了材料。关键词：PCV2Cap蛋白；原核表达；多克隆抗体中图分类号：S828；S852.65+1文献标识码：A文章编号：1002-2090（2023）01-0078-06ProkaryoticExpressionandPurificationofPCV2CapProteinandPreparationofPolyclonalAntibodyLiYuchang1，ZhengLiang1，2，ZhangHua1，2，3，WuZhijun1，2，3，XiaoLijie1，2，3，CaoHongwei1，2，3（1.CollegeofLifeScienceandTechnology，HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity，Daqing163319；2.CollegeofAnimalScienceandTechnology，HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity；3.BiotechnologyCenter，HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity）Abstract：Porcinecircovirustype2wasacommonporcineinfectiousvirus.TheCapproteinwasthenucleocapsidproteinofporcinecircovirustype2，andalsothemost...
