2012-2020年江苏省...希菌O157_H7监测结果_袁义平.pdf

河南预防医学杂志2023 年 2 月第 34 卷第 2 期Henan J Prev Med，Feb.2023，Vol.34,No.22012-2020 年江苏省东台市大肠埃希菌O157:H7 监测结果袁义平，陈林江苏省东台市疾病预防控制中心，江苏 盐城 224200摘要：目的了解东台市肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157:H7 在不同来源标本（腹泻患者、食品、家畜、昆虫）中的分布情况，为 EHEC O157:H7 的防控提供科学依据。方法采集东台市四个乡镇腹泻病人及动物的粪便、生熟肉制品和苍蝇进行病原菌分离培养、鉴定、毒力基因检测。结果2012-2020 年共采集各类标本 6 129 份，检出 74 株 EHECO157:H7，检出率为 1.21%。其中四种动物粪便中共检出 71 株，牛羊猪鸡分别为 35、27、7、2 株，腹泻病人共检出 3 株，检出率分别为 4.86%、3.66%、0.96%、0.27%、0.13%，牛羊带菌率最高。各年份检出率差异有统计学意义（2=120.013，P0.01）。经毒力基因检测，stx2+eaeA+hly+31 株，eaeA+hly+41 株，另 2 株不带任何毒力基因，带毒率 97.30%。四种毒力基因检出率差异有统计学意义（P0.01）。结论肠出血性大肠埃希菌 O157:H7 在东台市不同宿主动物和腹泻患者中均有检出，牛、羊是东台市肠出血性大肠埃希菌 O157:H7 的主要宿主动物，应进一步加强对两种动物及粪便的管理。关键词：肠出血性大肠杆菌 O157:H7；带菌率；毒力基因中图分类号：R181.8文献标识码：B文章编号：1006-8414(2023)02-0148-05Monitoring results of Escherichia coli O157:H7 in Dongtai city,Jiangsuprovince,2012-2020YUAN Yiping,CHEN LinDongtai Center for Disease Control and Prevention,Dongtai City,Yancheng 224200,ChinaCorresponding author:CHEN Lin,E-mail:Abstract:Objective To understand the distribution of Enterohemorrhagic Escherichia coli（EHEC）O157:H7 in the samples ofdifferent sources(patients with diarrhea,food,livestock,insects)in Dongtai city,and provide a scientific basis for the preventionand control of EHEC O157:H7 in Jiangsu province.Methods The samples of feces,raw and cooked meat products and flies ofdiarrhea patients and animals in four townships of Dongtai city were collected for isolation,culture,identification and virulencegene testing of pathogenic bacteria.Results From 2012 to 2020,a total of 6 129 samples of various types were collected,and 74strains of Escherichia coli O157:H7 were detected,and the positive rate was 1.21%.Among them,a total of 71 strains weredetected in the feces of four animals,including cattle(35),sheep(27),pigs(7),and chickens(2),and in patients with diarrhea（3）,with the detection rates of 4.86%,3.66%,0.96%,0.27%,and 0.13%,respectively,and the bacteria carrying rates in cattleand sheep were the highest.The difference of positivity rates by year was statistically significant(2=120.013,P0.01).Thevirulence gene testing showed that 31 strains carried stx2+eaeA+hly+,41 strains carried eaeA+hly+,and the other 2 strains did notcarry any virulence genes,with a toxicity rate of 97.30%.There was a statistically significant difference in detection ratesbetween the four virulence genes(P0.01).Conclusion EHEC O157:H7 has been detected in different host animals andpatients with diarrhea in Dongtai city,and cattle and sheep are the main host animals of EHEC O157:H7 in Dongtai city,and themanagement of the two animals and feces should be further strengthened.Keywords:Enterohemorrhagic escherichia coli O157:H7;Carrier rate;Virulence gene作者简介：袁义平，本科，副主任技师，主要从事微生物检验工作通信作者：陈林，E-mail:肠出血性大肠埃希菌（EHEC）是携带一种或一种以上产志贺毒素的大肠埃希菌的总称，故又称产志贺DOI:10.13515/ki.hnjpm.1006-8414.2023.02.015 应用研究 148 河南预防医学杂志2023 年 2 月第 34 卷第 2 期Henan J Prev Med，Feb.2023，Vol.34,No.2表 1大肠埃希菌毒力基因的引物序列、退火温度及片段大小毒力基因引物序列退火温度（）片段大小（bp）stx1FCCATGACAACGGACAGCAGTT56779Stx1RCCTGTCAACTGAGCACTTTGstx2FACACTGGATGATCTCAGTGG56614stx2RCTGAATCCCCCTCCATTATGeaeAFAAGCGACTGAGGTCACT56450eaeARACGCTGCTCACTAGATGThlyFCACACGGAGCTTATAATATTCTGTCA56340hlyRAATGTTATCCCATTGACATCATTTGACT毒素大肠埃希菌，其可引起水样腹泻、出血性肠炎及溶血性尿毒综合征（HUS）等病死率高的疾病1-2。O157:H7 是 EHEC 的重要血清型，1999 年我国苏皖地区暴发了较大规模的 EHEC O157:H7 感染疫情，血清流行病学调查结果显示约 2 万人感染，HUS 住院病例 195 例，死亡 177 例。为此，2000 年卫生部发布了全国肠出血性大肠杆菌产志贺毒素大肠杆菌O157:H7 感染性腹泻监测方案（试行）3，加强我国安徽、江苏、河南及山东四省重点地区 O157:H7 的主动监测工作4。东台市和铜山市作为江苏省设立的两个EHEC O157:H7 的国家级监测哨点，已连续二十年为国家 EHEC O157:H7 主动监测项目提供数据。本研究对 2012-2020 年东台市基于该监测项目收集的O157:H7 数据进行分析，旨在为江苏省 EHEC O157:H7 的防控提供循证依据。1材料与方法1.1标本来源收集 2012-2020 年每年 5 月和 9 月东台市五烈、安丰、台南、四灶四个乡镇各一个村牛、羊、猪、鸡四种动物的新鲜粪便共 2 916 份，四个乡镇卫生院就诊的腹泻患者粪便标本 2 258 份。7 月份除采集腹泻患者粪便标本外，还采集腹泻患者家中苍蝇标本 450 份，并采集市售生熟牛、羊、猪、鸡肉 505 份（采集于不同菜场、零售点），四种动物粪便由东台市疾控中心急性传染病防制科工作人员经乡镇卫生院人员陪同农户家上门采样，腹泻病人由所在乡镇卫生院采样送检。东台市疾控中心检验科负责样本的分离培养、鉴定，江苏省疾控中心病原微生物所负责阳性标本的毒力基因检测。所有标本均冷藏保存，并及时送检。1.2主要仪器和试剂改良 EC 肉汤增菌培养基购自北京陆桥技术股份有限公司；E.coliO157 免疫磁珠购自挪威 DYnalA.SD；法国科玛嘉显色琼脂购自上海欣中生物工程有限公司；大肠杆菌 O157 诊断血清购自宁波天润生物药业有限公司；1%新生霉素购自杭州滨和微生物试剂有限公司；API20E 生化试剂购自梅里埃诊断产品（上海）有限公司；Taq DNA 聚合酶购自大连宝生物工程有限公司；琼脂糖为 BioAsia 分装品；引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。PCR 实验试剂由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。主要仪器包括 PCR 扩增仪 PTC-200（美国 MJ Research 公司）、凝胶成像系统 Gel Doc XR（美国 Bio-Rad 公司）。1.3方法1.3.1分离与鉴定按照 全国肠出血性大肠杆菌产志贺毒素大肠杆菌 O157:H7 感染性腹泻监测方案（试行）对收集的标本进行分离培养：将待检样品加入到改良 EC 肉汤（含 1%的新生霉素）中，经免疫磁珠富菌后，接种科玛嘉显色平板，挑取红色或紫红色可疑菌落，进行生化鉴定为大肠杆菌后，进行血清学鉴定。1.3.2毒力基因检测血清学鉴定为 O157 的菌株采用煮沸法提取细菌的基因组 DNA。应用 PCR 法检测 stx1、stx2、hly 和 eaeA 4 种毒力基因。毒力相关基因检测引物序列及扩增条件见表 1。毒力基因检测的阳性参考株为 EHEC O157：H7 EDL933。PCR 的反应条件为：94 预变性 7 min，94 变性 30 s，56 退火40 s，72 延伸 40 s，25 个循坏，72 延伸 5 min。对检出 的 74 株 EHEC O157：H7 检 测 stx1、stx2、hly 和eaeA 4 种毒力基因，对检测结果进行分析5。1.4统计分析使用 SPSS 19.0 软件进行统计分析，采用描述流行病学方法分析不同标本的 O157:H7 菌株检出率、毒力基因检出率和基因谱；率的比较采用2检验或 Fisher 确切概率法，检验水准=0.05。2结果2.1大肠埃希菌 O157:H7 菌株分离情况2012-2020 年收集东台市安丰、台南、五烈、四灶四乡镇家149 河南预防医学杂志2023 年 2 月第 34 卷第 2 期Henan J Prev Med，Feb.2023，Vol.34,No.2表 374 株 O157:H7 毒力基因检测结果样品类型送检数检出数检出率(%)stx1stx2eaeAhly检出数检出数检出数检出数检出率(%)牛粪720354.8600.00233.19354.86354.86羊粪7