HPLC法测定复元胶囊中五味子醇甲的含量_周凤盈.pdf

第 卷第 期 年 月广 州 化 工 .分析测试 法测定复元胶囊中五味子醇甲的含量周凤盈，王殿奎，耿春辉，孙 琛，王夏青（衡水市综合检验检测中心，河北 衡水）摘 要：建立复元胶囊中五味子醇甲的含量测定方法。采用高效液相色谱（）法对复元胶囊中五味子主要成分五味子醇甲（）进行含量测定；流动相为甲醇水（），检测波长为 。五味子醇甲（）在.范围内溶液浓度与峰面积存在良好的线性关系，定量限为.，检测限为.，平均回收率为.，为.（）；精密度试验、重复性试验、稳定性试验均良好。该方法灵敏度高、准确可靠，可以有效地控制复元胶囊的质量。关键词：复元胶囊；质量控制；定量检验；高效液相色谱法；五味子醇甲（）中图分类号：文献标志码：文章编号：（）基金项目：河北省衡水市科技计划项目（：）。第一作者：周凤盈（），女，本科，高级工程师，研究方向为食品药品检验、质量控制。通讯作者：王殿奎（），男，本科，高级工程师，研究方向为食品药品检验。，（，）：.（），（），（），.（）.，.，.，.，.（），.，.：；复元胶囊是由五味子、人参、黄芪、熟地黄、山茱萸等二十一味中药制成，该药具有健脾补肾，益气活血，祛湿醒脑等功效。临床上主要治疗脑供血不足、脑转耳鸣，痴呆等症。痴呆又称阿尔茨海默病（，），目前，美国已将 纳入无法预防、无法治愈的十大死亡病种之一。该药经多年应用于临床，疗效确切。五味子为木兰科植物五味子的干燥成熟果实，具有补肾养心、益气生津、收敛固涩等功效。五味子醇甲（）是从五味子的干燥成熟果实中提取出的一类木脂素类，据现代药物学分析研究发现五味子中所含的化学成分主要有木脂素类，也是发挥五味子多种功效的有效成分，五味子醇甲作为中药五味子的主要活性成分之一，在各个系统具有广泛的药理作用，尤其在中枢神经系统的作用最为显著，对神经退行性疾病 具有潜在的预防和治疗作用，中国药典 年版一部将五味子醇甲（）作为五味子的定量指标。复元胶囊目前的标准仅对何首乌、丹参、冰片进行定性鉴别，而无定量方法，不能有效地控制药品质量。为了更好地控制产品质量，经过反复实验确定采用高效液相色谱（）法对复元胶囊中五味子活性成分五味子醇甲（）的含量进行分析。此方法灵敏度高，专属性强，重复性好，操作简便，可作为复元胶囊的质量标准提升的依据。仪器与试药.仪 器 高效液相色谱仪（检测器：紫外检测器）；电子天平 梅特勒托利多科技（中国）有限公司精度：.；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。.试 药甲醇（色谱纯），默克股份两合公司；其他试剂均为分析纯；水为纯化水；五味子醇甲对照品（批号：纯度：.），中国食品药品检定研究院；复元胶囊，由河北省衡水 市 中 医 院 制 剂 室（批 号 分 别 为、，规格：.）。广 州 化 工 年 月 方法与结果.色谱条件色谱柱：柱（.，）；检测器型号：；流动相：甲醇水（），检测波长为 ；流速：.；柱温：；进样量：，按上述色谱条件照 中国药典 年版四部（通则）高效液相色谱法进行测定，理论板数按五味子醇甲峰计均高于；五味子醇甲峰与其前后相邻峰的分离度均大于.。.对照品贮备液的制备精密称取五味子醇甲对照品适量，置 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成每 含.的对照品贮备液。.对照品溶液的制备精密量取.项下对照品贮备液 ，置 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀备用。.供试品溶液的制备取供试品内容物约 ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 ，密塞，称定重量，超声处理（功率 ，频率 ），放冷，再次称定，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。.阴性对照溶液制备按复元胶囊的处方比例和工艺手法制成不含五味子的阴性样品，按.项下的方法制成阴性对照溶液。.检测限与定量限精密量取.项下对照品溶液，用甲醇稀释至浓度依次由高到低的溶液，将对照品各色谱峰测出的信号与空白样品测出的信号比较，以测得五味子醇甲（）的检测限（）和定量限（），结果见表。.线性关系的考查精密量取.项下对照品贮备液各，.，.，分别置 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀；按.项下的色谱条件测定，进样量 ；对照品溶液浓度（，）为横坐标，以峰面积（）为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，得回归方程。结果表明：五味子醇甲（）在.线性范围内，所测对照品溶液的浓度与被测组分峰面积均存在良好的线性关系。结果见表。表 线性关系、检测限及定量限测定结果 ，取样量 浓度（）峰面积回归方程相关系数 线性范围（）检测限（）定量限（）.精密度试验精密吸取.项下对照品溶液 ，按.项下的色谱条件连续进 样 测 定 次，记 录 峰 面 积 值 分 别 为、，平 均 值 为，为.（）。结果表明仪器具有良好的精密度。.重复性试验取供试品（批号：），照.项下供试品溶液制备方法配制 份供试品溶液，按.项下的色谱条件测定，以外标法计算五味子醇甲（）的含量分别为.、.、.、.、.、.，平均含量为.，为.（）。结果表明方法重复性良好。.稳定性试验精密吸取.项下供试品溶液（批号：），分别在、测定峰面积值的变化，结果峰面积值分别为、，平均值为，为.（）。结果表明供试品在 内稳定性良好。.加样回收率试验精密称取已知五味子醇甲（）含量的供试品（批号：）内容物 份，每份称重约为.，分别精密加入.项下的对照品贮备液 ，照.项下的方法制备供试品溶液，按.项下的色谱条件测定，计算平均回收率，结果见表。表 加样回收试验结果 成分取样量 样品含量 加入量 测得总量 回收率 平均回收率 五味子醇甲（）.第 卷第 期周凤盈，等：法测定复元胶囊中五味子醇甲的含量 .样品的测定表 五味子醇甲（）的含量测定结果 （）批号含量（）平均含量（）相对平均偏差.取.项下三批样品按.项下的方法制成供试品溶液，按.项下色谱条件测定，精密量取供试品溶液、对照品溶液各 ，注入液相色谱仪中记录峰面积，按外标法计算五味子醇甲（）的含量，测定结果见表。讨 论.专属性分别取.、.、.项下的溶液，照.项下的色谱条件测定，对照品主峰与供试品相应位置峰的保留时间分别为.、.，阴性对照溶液在相应位置无杂质峰干扰，供试品主峰能达到很好的分离，结果见图。图 高效液相色谱图.系统适用性色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性五个参数，要使上述参数均达到规定的要求，色谱条件的选择尤为重要。在色谱条件中合适的流动相组成及比例是色谱条件的重要因素，在实验中参照 中国药典 版一部及参考文献测定方法，采用下列不同流动相进行洗脱：甲醇水（）、甲醇水（）、甲醇水（）、乙腈：水（）及乙腈：.磷酸（），对比了使用上述流动相进行洗脱的分离情况，以理论板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性等参数进行考察，优化选择以甲醇水（）进行洗脱，能达到有效分离，被测成分峰形好，分离效果最佳。.供试品溶液制备方法选择参照 中国药典 版一部及参考文献测定方法，供试品制备时取同一供试品分别以 甲醇、甲醇、甲醇、乙醇、乙酸乙酯作为提取溶剂，超声提取 后，照.项下的色谱条件进行测定，测得复元胶囊中的五味子醇甲（）的含量分别为.、.、.、.、.，供试品中五味子醇甲（）含量测定结果最高的提取溶剂是甲醇，由此确定甲醇为提取溶剂；同时考察了不同的超声时间对提取效率的影响，分别对同一供试品超声提取、及，照.项下的色谱条件进行测定，测得复元胶囊中的五味子醇甲（）的 含 量 分 别 为.、.、.和.，结果表明，供试品超声提取，五味子醇甲（）可被提取完全。.耐用性试验耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。根据 中国药典 年版四部（通则）的要求，本试验主要考察不同品牌色谱柱、柱温、流动相的组成等变动因素对测定结果的影响。.色谱柱的考察取同一供试品溶液，按照.项下色谱条件，采用不同品牌的色谱柱 柱（.，）、柱（.，）、柱（.，）测定供试品中五味子醇甲（）的含量，结果见表。表 不同色谱柱测得五味子醇甲（）的含量测定结果 （）色谱柱含量（）平均含量（）柱.柱.柱.实验结果表明，不同品牌的色谱柱对测定五味子醇甲（）的含量没有影响。.柱温的考察表 不同色谱柱温度测得五味子醇甲（）的含量测定结果 （）色谱柱温度 含量（）平均含量（）.广 州 化 工 年 月取同一供试品溶液，采用 柱（.，），按照.项下的色谱条件，分别在、条件下测定供试品中五味子醇甲（）的含量，结果见表。实验结果表明在 范围内可准确测定五味子醇甲（）的含量。.流动相比例的考察取同一供试品溶液，分别选择甲醇水（）、甲醇水（）、甲醇水（）三种比例流动相，按.项下的色谱条件测得五味子醇甲（）的含量分别为.、.、.，平均含量为.，为.（）。本实验通过对不同品牌色谱柱、柱温、流动相的组成比例的考察，表明在色谱条件有微小变化时，供试品中五味子醇甲（）的含量测定结果无明显变化，测定结果表明本实验方法耐用性良好。结 论本文通过大量的试验，采用高效液相色谱（）法定量测定五味子主要成分五味子醇甲（）的含量，通过方法学验证实验表明此检验方法专属性强，准确度高，重现性好、耐受性良好，建立复元胶囊中五味子醇甲的含量测定方法，可以有效控制复元胶囊的质量，为质量标准的提升提供依据。参考文献 ，.，（）：.史红星，李洪梅，郭洋，等.复元胶囊联合醒脑开窍针刺治疗血管性痴呆的疗效及对血管内皮生长因子、同型半胱氨酸和脑源性神经营养因子的影响.世界中西医结合杂志，（）：.史建钢，史晓璇.活血复元胶囊异病同治临床观察.甘肃医药，（）：.曲艳.五味子化学成分及药理研究进展.黑龙江科技信息，（）：.茹意，樊慧杰，柴智，等.五味子醇甲对中枢神经系统药理作用研究进展.中华中医药学刊，（）：.中国药典 年版一部.中国药典四部.：，.薛雅光，薛雅峰，闫小钧，等.法测定养阴镇静丸中五味子醇甲的含量.智慧健康，（）：.王艳，刘光斌，何苗苗，等.法同时测定参贝补肺丸中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量.中兽医医药杂志，（）：.许京红.桂灵片中五味子醇甲含量的 法测定.黑龙江医药，（）：.张强，冯华，王世俊，等.高效液相色谱法测定妇科止血灵中五味子醇甲的含量.甘肃中医药大学学报，（）：.林园园，周从辉.高效液相色谱法测定益生元胶囊中五味子醇甲的含量.湖北中医杂志，（）：.（上接第 页），.，（）：.，.，（）：.陈思鸿，陈淇，罗时荷，等.基于三苯胺的荧光探针设计、合成与应用研究进展有机化学，（）：.褚彬，黑笑涵，郭丽萍.三苯胺衍生物荧光凝胶体系的合成与性能研究山东化工，（）：.，.，：.，.，.，（）：.，.，：.，.：，：.蔡丰泽，徐永玲，周乐，等.一种红光发射的粘度荧光探针应用化学，（）：.，.，：.