单细胞_单细胞核RNA测序分析心脏细胞转录谱推进心脏细胞类型和心脏发育研究.pdf

第5 2卷第4期第5 5 4页2 0 2 3年8月 华中科技大学学报(医学版)A c t aM e dU n i vS c iT e c h n o lH u a z h o n g V o l.5 2 N o.4 P.5 5 4A u g.2 0 2 3综 述*科技部国家重点研发计划项目(N o.2 0 2 1 Y F A 1 1 0 1 9 0 1);中国大学生创新创业训练项目基金(N o.HU S T:2 0 2 1 0 1 2 4)#共同第一作者文莉雅,女,2 0 0 1年生,本科生,E-m a i l:1 1 2 7 6 2 2 8 1 4q q.c o m;雅各布马西卡,男,1 9 8 8年生,医学博士,E-m a i l:j m a s i k a 2 0 0 5y a h o o.c o m通讯作者,C o r r e s p o n d i n ga u t h o r,E-m a i l:h l i a n gm a i l.h u s t.e d u.c n单细胞/单细胞核R NA测序分析心脏细胞转录谱推进心脏细胞类型和心脏发育研究*文莉雅1,2#,雅各布马西卡1,3#,王子赫1,2,王 松1,2,梁华敏1,21华中科技大学基础医学院生理学系,湖北省药物靶点研究与药效学评价重点实验室,武汉 4 3 0 0 3 02华中科技大学国家基础医学实验示范中心,武汉 4 3 0 0 3 03肯雅塔大学医学院生理学系,肯尼亚内罗毕 4 3 8 4 4-0 0 1 0 0摘要:以单细胞R NA测序(s i n g l ec e l lR NAs e q u e n c i n g,s c R NA-s e q)和单细胞核R NA测序(s i n g l e-n u c l e u sR NAs e-q u e n c i n g,s n R NA-s e q)进行单细胞/单细胞核转录组学分析,为组织在稳态维持或动态变化过程(如疾病的发展、分化和发育)中提供了一个全面的组织细胞统计可视图。与传统批量分析相比,单细胞/单细胞核为中心的转录组分析更准确地揭示组织内细胞的异质性和细胞内基因调控网络。该文总结了应用s c/s n R NA-s e q技术分析心脏细胞转录谱的新发现,以及心血管发育的重要新分子机制。关键词:单细胞R NA测序;单细胞核R NA测序;心肌细胞;心脏发育中图分类号:R 3 D O I:1 0.3 8 7 0/j.i s s n.1 6 7 2-0 7 4 1.2 0 2 3.0 4.0 2 0S i n g l eC e l l/N u c l e u sR N AS e q u e n c i n gP r o f i l e s t h eC a r d i a cA t l a sa n dI m p r o v e sR e s e a r c h i nH e a r tC e l l sa n dH e a r tD e v e l o p m e n tW e nL i y a1,2#,J a c o bM a s i k a1,3#,W a n gZ i h e1,2e t a l1D e p a r t m e n t o fP h y s i o l o g y,H u b e iK e yL a b o r a t o r yo fD r u gT a r g e tR e s e a r c ha n dP h a r m a c o d y n a m i cE v a l u a t i o n,S c h o o l o fB a s i cM e d i c i n e,H u a z h o n gU n i v e r s i t yo fS c i e n c ea n dT e c h n o l o g y,W u h a n4 3 0 0 3 0,C h i n a2N a t i o n a lD e m o n s t r a t i o nC e n t e rf o rE x p e r i m e n t a lB a s i cM e d i c a lE d u c a t i o n,H u a z h o n gU n i v e r s i t yo fS c i e n c ea n dT e c h n o l o g y,W u h a n4 3 0 0 3 0,C h i n a3D e p a r t m e n t o fM e d i c a lP h y s i o l o g y,S c h o o l o fM e d i c i n e,K e n y a t t aU n i v e r s i t y,B o x4 3 8 4 4-0 0 1 0 0G P O N a i r o b i,K e n y aA b s t r a c t S i n g l e-c e l l t r a n s c r i p t o m i c sa n a l y s i sw i t hs i n g l ec e l l a n ds i n g l e-n u c l e u sR NAs e q u e n c i n g(s c/s n R NA-s e q)p r o v i d e sag l o b a l a n du n b i a s e dv i e wo f t i s s u e s c e l l u l a rd e m o g r a p h i c sb o t ha t s t e a d y-s t a t ea n d i nd y n a m i cp r o c e s s e s s u c ha sd e v e l o p m e n t,d i f f e r e n t i a t i o n,a n dp r o g r e s s i o no fd i s e a s e s.S i n g l ec e l l/n u c l e u s t r a n s c r i p t o m ea n a l y s i sr e v e a l st h ec e l lh e t e r o g e n e i t ym o r ea c c u-r a t e l y t h a n t h e t r a d i t i o n a l b a t c ha n a l y s i s,a sw e l l a s t h e r e g u l a t i o nn e t w o r k i nc e l l s.I n t h i s r e v i e w,w e s u mm a r i z e t h e r e c e n t f i n d-i n g s i nt h ec a r d i a c c e l l u l a r a t l a s f r o mv a r i o u s s c/s n R NA-s e qp l a t f o r m s a n dd e s c r i b e t h e l a t e s t p r o g r e s s i nm o l e c u l a rm e c h a n i s m so f c a r d i o v a s c u l a rd e v e l o p m e n t a n dc a r d i a cr e g e n e r a t i o n.K e yw o r d s s i n g l e-c e l lR NAs e q u e n c i n g;s i n g l e-n u c l e u sR NAs e q u e n c i n g;c a r d i o m y o c y t e;c a r d i a cd e v e l o p m e n t 单细胞R NA测序(s i n g l e-c e l lR NAs e q u e n-c i n g,s c R NA-s e q)分析单细胞转录谱以发现细胞内基因调控网络并揭示细胞间通讯,而这些重要信息往往在批量分析中被掩盖1。单细胞核测序技术(s i n g l e-n u c l e u sR NA-s e q u e n c i n g,s n R NA-s e q)对单个细胞核进行转录组测序,是s c R NA-s e q技术的修订或替代方案2,该技术提取心肌细胞核用于单细胞核转录组学分析成年心肌细胞,可以弥补成年动物心肌细胞太大导致无法应用液滴仪捕获单细胞的不足3-5。心脏的第1个单细胞基因表达分析是利用单细胞q P C R(q u a n t i t a t i v ep o l y m e r a s ec h a i nr e-a c t i o n)技术完成的,而s c R NA-s e q技术应用于心脏研究则相对滞后6-7。在最近的T a b u l aM u r i s研究中8,作者通过分析来自2 0个小鼠组织的1 0 0 0 0 0个细胞,利用流式细胞分选(f l u o r e s c e n c ea c t i v a t e dc e l l s o r t e r,F A C S)技术分选出大约4 0 0 0个心脏细胞后结合S m a r t-s e q 2(s w i t c h i n g m e c h a n i s ma t5 e n do f t h eR NAt r a n s c r i p t),并使用液滴微流控细胞分离法获得几百个心肌细胞,实现了更高通量的3 端 短 读 测 序。迄 今 为 止,大 型 数 据 集T a b u l aM u r i sS e n i s已有超过3 5 0 0 0 0个细胞的转录谱分析,其中包括约1 8 2 8 2个心脏细胞。s c/s n R NA-s e q技术已经成功鉴定出心脏中的主要细胞类型,包括心肌细胞、成纤维细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞、脂肪细胞和免疫细胞,并准确阐释了这些细胞的异质性3,9-1 1。这些研究体现出单细胞研究在确定心脏发育和心脏再生途径方面的独特价值。因此,本文将着重介绍s c R NA-s e q及s n R NA-s e q技术对揭示心脏发育过程中心脏细胞异质性,及其在心脏发育和心脏再生研究中的作用;总结这些技术如何显著改变我们对心脏研究的理解和实验策略。1 s c/s n R N A-s e q分析成人心脏中的心肌细胞图谱s c R NA-s e q或s n R NA-s e q技术将研究范围缩小到心脏中的亚结构或功能特异性细胞2,4,1 2。通过人类心脏的2 8 7 2 6 9个心肌细胞核的转录组测序结果发现心脏中的9种主要细胞种类和2 0种细胞亚群。其中4个心肌细胞亚群是心房或心室来源,分别显示出心室特异性和性别相关的转录组学特征3,它们分别是:心房肌细胞,ANK R D 1h i g h心室细胞,心室肌细胞和心室肌细胞。该研究还描述了左心房和左心室之间的2 0 5 8个差异表达基因(d i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e dg e n e s,D E G s),以及右心房和右心室之间的1 1 3 4个D E G s。在这些D E G s中,HE Y 2和MYH 7在心室中高度表达,N P P A和MY L 4在心房中高度表达。这些基因差异更准确地阐释了心肌细胞的多样性。除了腔室特异性心肌细胞图谱,s c R NA-s e q或s n R NA-s e q技术还鉴定出许多其他特殊的心肌细胞亚型。通过将窦房结与非窦房结心房组织的定量蛋白质组学数据相结合,小鼠窦房结的s n R NA-s e q分析鉴定出窦房结细胞富集的离子通道蛋白4;这些细胞的显著特点之一是细胞外基质(e x t r a c e l l u l a rm a t r i x,E CM)含量高并具有特殊代谢状态,即脂质代谢,从而揭示出窦房结作为心脏起搏点的重要分子基础。由于细胞形状影响基因异质性、生物信号通路以及多种生物学过程,从而改变细胞的转录谱1 2,细胞形状变化显著上调氧化磷酸化、蛋白激酶A和心脏-肾上腺素能信号通路的相关基因;形状异常的方形病理性细胞表达更多参与心肌细胞凋亡和坏死过程的基因。独特的增殖性心肌细胞亚群高表达有丝分裂和细胞分裂相关标记M k i 6 7、驱动蛋白样运动蛋白中心体相关蛋白E(C E N P E)和驱动蛋白酶家族成员2 3号(K i f 2 3);这种增殖的单细胞核心肌细胞亚群在细胞周期的G2期积累5。此外,D E G分析通过高表达与低表达基因来鉴定传导系统不同区域的分子特征1 3;也鉴定出心脏内存在一组以内皮和心肌标记物为特征的“内皮样心肌细胞”3,1 0。尽管这类细胞的功能不明,但为后续的进一步研究提供了新的潜在研究对象。2 s c/s n R N A-s e q分析成人心脏中的非心肌细胞图谱心脏成纤维细胞是心脏中至关重要的非心肌细胞(n o n-c a r d i o m y o c y t e,N CM)细胞类型,它们在正常和功能失调的心脏中作用复杂。s c R NA-s e q技术在成人心脏中鉴定出具有不同功能和特征的成纤维细胞3,1 1。在小鼠中1 1,心脏成纤维细胞被聚类成5个亚群:肌成纤维细胞(表达 S MA),活化成纤维细胞(表达P o s t n),S c a 1-高成纤维细胞,S c a 1-低成纤维细胞和表达Wn t成纤维细胞。在人类3只发现静息成纤维细胞(无P o s t n表达),并被聚类成3个亚群。3个亚群的特殊特征分别是心房标志物N P P A、纤维化相关基因NO X 4和促纤维化标志物A D AMT S 4。这些成纤维细胞在发育过程中可以发生适应9,并随疾病进展发生变化1 1。心肌损伤会伴随活化成纤维细胞增殖能力增加,因而促进瘢痕形成而心肌收缩能力下降1 4。使用s c R NA-s e q或s n R NA-s e q3,1 0-1 1,1 5-1 6跨多个组织1 7(心脏,肝脏,肺和血液)对免疫细胞群进行分析比较,已确定特定组织或特定细胞群的特定基因表达模式。D i c k等1 8鉴定出4个巨噬细胞亚群:T i m d 4亚群,C C R 2-MHC-h i g h亚群,C C R 2+亚群和I s g亚群。其中,在小鼠1 1,1 8和人类3,1 8心脏中均鉴定出特征性的C x 3 c r 1h i g hA d g r e 1(F 4/8 0)h i g hH 2-A a(MHC-)+I t g a m(C D 1 1 b)l o wL y 6 c 2l o wC c r 2-心脏常驻巨噬细胞。T I MD 4+L YV E 1+MHC-l o wC C R 2-心脏常驻巨噬细胞为可再生细胞群,有助于维持巨噬细胞的稳态;心肌损伤后这类细胞持续存在1 1,1 8。人类心脏中的两个巨噬细胞亚群都表达M 2极化相关 基因(R B P J和F 1 3 A 1)和跨膜胶原C O L 2 3 A 13。伴随衰老,这些抗炎性M 2巨噬细胞显著高表达H P G D S,该基因可编码前列腺素的产555文莉雅等.单细胞/单细胞核R NA测序分析心脏细胞转录谱推进心脏细胞类型和心脏发育研究生,因此与心脏衰老过程中的免疫内环境失调密切相关1 9。C D 1 1 9+心脏B细胞是循环B细胞的一个亚群2 0,它 们 被 聚 类 为4个 亚 群:C D 1 1 b+C D 5+I g Mh i g h,C D 1 1 b+C D 5-I g Mh i g h,C D 1 1 b-C D 2 1+C D 2 3+和C D 1 1 b-C D 2 1-C D 2 3-1 6,2 0。在发育过程中这些心脏B细 胞 的 转 录 谱 发 生 变 化 并 处 于 动 态 平衡1 6,2 0。第3类被深入研究的N CM细胞类型是内皮细胞。利用s c R NA-s e q技术已经成功鉴定出人类的血管和非血管内皮细胞3,包括表达P R O X 1、F L T 4和P D P N的淋巴内皮细胞以及表达BMX的动脉特异性内皮细胞。除这两个内皮细胞亚群外,在小鼠心脏中还发现了微血管内皮细胞(L y 6 a+)、静脉内皮细胞(r N r 2 f 2+和Vw f+)和循环内皮细胞群1 1。此外,还鉴定出一些同时高表达两种细胞谱系标记物的杂交细胞,例如成纤维细胞-内皮细胞杂交群体和巨噬细胞-内皮细胞杂交群体。3 s c/s n R N A-s e q分析关键心肌谱系及其在小鼠心脏发育过程中的细胞命运 细胞命运映射实验已经证实,小鼠N k x 2-5+和I s l-1+心脏祖细胞(c a r d i a cp r o g e n i t o rc e l l,C P C)起源于M e s p 1+C P C,它们在原肠胚形成期间引导中胚层分化发育为第一心区(f i r s th e a r tf i e l d,F H F)和第二心区(s e c o n dh e a r t f i e l d,S H F),此后N k x 2-5+和I s l 1+C P C s具有心肌细胞、平滑肌细胞和内皮细胞的多系分化潜力2 1。s c R NA-s e q或s n R NA-s e q在此基础上揭示出小鼠心脏发育过程中C P C细胞命运的更多详细信息。L e s c r o a r t等2 2通过s c R NA-s e q技术揭示出心脏谱系分化的最早步骤。他们发现5个M e s p 1+C P C亚群,每 个亚 群 对 应 不 同 谱 系 细 胞 的 分 化:D C T 1表达内皮或心内膜谱系标志物S o x 7、E t v 2和T a l 1,D C T 2表 达 心 脏 标 志 物H a n d 1、B m p 4和T n n c 1等,D C T 3和D C T 4表达第二心区(S H F)标志物T b x 1、F o x c 2、H o x b 1和H o x a l,D C T 5表达内皮标志物S o x 1 7和F o x a 2。M e s p 1+C P C异质性解释了原肠胚形成阶段心脏发育过程中的早期细胞限制和区域分离。除此之外,M e s p 1K O小鼠心脏中外胚层细胞标志物基因上调,而心脏谱系分化相关的基因下调。这表明M e s p 1对于C P C退出多能状态及诱导心血管细胞谱系分化是必要的。针对 纯 化 的 心 肌 细 胞 或 腔 室 心 肌 细 胞 的s c R NA-s e q分析,不仅证实N k x 2-5+和I s l-1+C P C对心脏发育的贡献,还提供了其功能差异的更多详细信息,并鉴定出一些新的基因/转录因子2 3-2 4或腔室特异性基因2 3-2 5。H a n d 2为流出道细胞特异性基因且与右心室细胞无关2 5。I s l-1+C P C和N k x 2-5+C P C与心脏腔室发育密切相关:S H F起源于I s l-1+C P C;心 室 肌 细 胞 起 源 于N k x 2-5+C P C,因 为N k x 2-5-/-细胞表现出与左心房心肌细胞最相似的转录谱2 3。基于发现的差异最显著的5 0 0个腔室特异性基因,研究人员成功建立基于解剖结构的转录图谱(a n a t o m i c a l t r a n s c r i p t i o n-b a s e d l e g e n df r o ma n a l y s i so fs i n g l e-c e l lR NA s e q u e n c i n g,AT L A S-s e q),以9 1%的准确度推断出单个CM的解剖起源。N k x 2-5+亚群显示出发育特征,而I s l-1+亚群则没有。此外,s c R NA-s e q技术发现内皮细胞也表达腔室特异性基因,这有利于追踪来自不同腔室的内皮细胞的起源2 3。通过s c R NA-s e q分析纯化的E 7.5、E 8.5和E 9.5心肌细胞的发育轨迹,揭示出不同C P C在心脏发育过程中的不同功能:发育早期表达高水平N k x 2-5的N k x 2-5+C P C主要向心肌细胞分化;然而,N k x 2-5+C P C的长期高表达N k x 2-5会向非心肌细胞分化。I s l-1+C P C比N k x 2-5+C P C更倾向于多谱系分化2 4。不仅如此,N k x 2-5+I s l-1+C P C被聚 类 为I s l-1+C P C亚 群。对 于 这 两 种C P C,引物基因(C P C发育过程中下降)和从头起源基因(C P C发育期间增加)截然不同2 4。4 s c/s n R N A-s e q分析小鼠心脏发育过程中细胞-细胞间通讯的重要作用 细胞微环境通过生物物理因素和生化因素对心脏细胞命运起着关键作用2 6。W a n g等9将从新生第1天(p o s t n a t a ld a y1,P 1)到第5 6天(P 5 6)心脏细胞的主要细胞类型聚类为未成熟和成熟细胞。他们确定这些未成熟和成熟单细胞之间的信号转导相互作用,并发现成纤维细胞的亚群转变与心肌细胞的成熟密切相关。免疫细胞也很重要,因为趋化作用M I F(巨噬细胞迁移抑制因子)-C X C R 2(C-X-C基序趋化因子受体2)介导了F H F和S H F中C P C之间的谱系间通讯2 7。5 s c/s n R N A-s e q分析多能干细胞诱导的心肌细胞或重编程产生的心肌细胞 由于技术缺陷和样本不足,使用s c R NA-s e q技术分析人类心脏样本的工作相对不足。诱导的多能干细胞2 8或重新编程的心肌细胞2 9是一个关键的生物学模型。在人诱导的多能干细胞的心脏分化第1 4天和第1 5天3 0,心肌细胞表达腔室特异性基因,655华中科技大学学报(医学版)2 0 2 3年8月第5 2卷第4期并在3个心脏分化阶段鉴定出6个心肌细胞亚群:高表达N R 2 F 2和I s l-1的分化早期阶段细胞亚群,高表达T B X 5的中间分化状态,以及高表达HE Y 2和HO P X的晚期分化阶段。这表明不同心肌细胞亚群可能与相反的转录调节因子介导的心脏成熟有关。s c R NA-s e q分析还有益于促进心肌细胞重编程效率3 1:研究发现G a t a 4、M e f 2 c和T b x 5足以重编程新生小鼠心脏成纤维细胞为心肌细胞。6 临床应用与未来展望迄今,心脏的s c R NA-s e q和s n R NA-s e q研究已经建立再生和非再生小鼠心脏中的单细胞基因表达全面的数据库。已揭示的细胞组成特征、潜在的细胞间信号通讯关系、基因表达模式和顺式调控机制将为新生儿心脏再生研究提供重要基础。这些数据立足于单细胞,为研究心脏发育、稳态维持、疾病发生及病程进展的转录调节有重要价值。然而,当前的s c/s n R NA-s e q技术仍存在一定的缺陷,例如无法可靠地检测单细胞/单细胞核低水平表达的基因,从而掩盖了一些潜在的生物变异3 2。这些技术缺陷被攻克后可以更好促进该技术在各个领域的应用。参 考 文 献1 L a f z iA,M o u t i n h oC,P i c e l l iS,e ta l.T u t o r i a l:g u i d e l i n e sf o rt h ee x p e r i m e n t a l d e s i g no f s i n g l e-c e l l R N As e q u e n c i n g s t u d i e sJ.N a tP r o t o c,2 0 1 8,1 3(1 2):2 7 4 2-2 7 5 7.2 S l y p e rM,P o r t e rCBM,A s h e n b e r gO,e t a l.As i n g l e-c e l l a n ds i n g l e-n u c l e u sRNA-S e qt o o l b o xf o rf r e s ha n df r o z e nh u m a nt u m o r sJ.N a tM e d,2 0 2 0,2 6(5):7 9 2-8 0 2.3 T u c k e rN R,C h a f f i n M,F l e m i n gSJ,e ta l.T r a n s c r i p t i o n a la n d c e l l u l a rd i v e r s i t y o ft h eh u m a n h e a r tJ.C i r c u l a t i o n,2 0 2 0,1 4 2(5):4 6 6-4 8 2.4 E s f a h a n iPH,E l b e c kZ,S a g a s s e rS,e ta l.C e l l s h a p ed e t e r m i n e sg e n ee x p r e s s i o n:C a r d i o m y o c y t em o r p h o t y p i ct r a n s c r i p t o m e sJ.B a s i cR e sC a r d i o l,2 0 1 9,1 1 5(1):7.5 T a b u l aM u r i sC o n s o r t i u m,O v e r a l l c o o r d i n a t i o n,L o g i s t i c a l c o-o r d i n a t i o n.S i n g l e-c e l lt r a n s c r i p t o m i c so f2 0 m o u s eo r g a n sc r e a t e saT a b u l a M u r i sJ.N a t u r e,2 0 1 8,5 6 2(7 7 2 7):3 6 7-3 7 2.6 L iG,P l o n o w s k aK,K u p p u s a m yR,e t a l.I d e n t i f i c a t i o no f c a r-d i o v a s c u l a rl i n e a g ed e s c e n d a n t sa ts i n g l e-c e l lr e s o l u t i o nJ.D e v e l o p m e n t,2 0 1 5,1 4 2(5):8 4 6-8 5 7.7 H uP,L i uJ,Z h a oJ,e ta l.S i n g l e-n u c l e u st r a n s c r i p t o m i cs u r-v e yo fc e l ld i v e r s i t ya n df u n c t i o n a lm a t u r a t i o ni np o s t n a t a lm a mm a l i a nh e a r t sJ.G e n e sD e v,2 0 1 8,3 2(1 9/2 0):1 3 4 4-1 3 5 7.8 T a b u l a M u r i sC o n s o r t i u m.As i n g l e-c e l lt r a n s c r i p t o m i ca t l a sc h a r a c t e r i z e sa g e i n gt i s s u e si nt h em o u s eJ.N a t u r e,2 0 2 0,5 8 3(7 8 1 7):5 9 0-5 9 5.9 W a n gY,Y a oF,W a n gL,e ta l.S i n g l e-c e l l a n a l y s i so fm u r i n ef i b r o b l a s t s i d e n t i f i e sn e o n a t a lt oa d u l ts w i t c h i n gt h a tr e g u-l a t e sc a r d i o m y o c y t em a t u r a t i o nJ.N a tC o mm u n,2 0 2 0,1 1(1):2 5 8 5.1 0 W o l f i e nM,G a l o wA M,M l l e rP,e ta l.S i n g l en u c l e i s e q u e n-c i n go fe n t i r e m a mm a l i a nh e a r t s:s t r a i n-d e p e n d e n tc e l l-t y p ec o m p o s i t i o na n dv e l o c i t yJ.C a r d i o v a s cR e s,2 0 2 0,1 1 6(7):1 2 4 9-1 2 5 1.1 1 F a r b e h iN,P a t r i c kR,D o r i s o nA,e ta l.S i n g l e-c e l le x p r e s s i o np r o f i l i n gr e v e a l sd y n a m i c f l u xo f c a r d i a c s t r o m a l,v a s c u l a r a n di mm u n ec e l l s i nh e a l t ha n d i n j u r yJ.E l i f e,2 0 1 9,8:e 4 3 8 8 2.1 2 L i n s c h e i dN,L o g a n t h aSJRJ,P o u l s e nPC,e ta l.Q u a n t i t a-t i v ep r o t e o m i c sa n ds i n g l e-n u c l e u st r a n s c r i p t o m i c so ft h es i-n u sn o d ee l u c i d a t e s t h e f o u n d a t i o no f c a r d i a cp a c e m a k i n gJ.N a tC o mm u n,2 0 1 9,1 0(1):2 8 8 9.1 3 G o o d y e rWR,B e y e r s d o r fBM,P a i kDT,e t a l.T r a n s c r i p t o m-i cp r o f i l i n go f t h e d e v e l o p i n g c a r d i a c c o n d u c t i o ns y s t e ma t s i n-g l e-c e l l r e s o l u t i o nJ.C i r cR e s,2 0 1 9,1 2 5(4):3 7 9-3 9 7.1 4 J a n b a n d h uV,T a l l a p r a g a d aV,P a t r i c kR,e ta l.H i f-1as u p-p r e s s e sR O S-i n d u c e dp r o l i f e r a t i o no fc a r d i a cf i b r o b l a s t sf o l-l o w i n gm y o c a r d i a l i n f a r c t i o nJ.C e l lS t e mC e l l,2 0 2 2,2 9(2):2 8 1-2 9 7,e 1 2.1 5 W o l f i e n M,G a l o w A M,M l l e rP,e ta l.S i n g l e-n u c l e u ss e-q u e n c i n go f a ne n t i r em a mm a l i a nh e a r t:C e l l t y p e c o m p o s i t i o na n dv e l o c i t yJ.C e l l s,2 0 2 0,9(2):3 1 8.1 6 R o c h a-R e s e n d eC,Y a n gW,L iW,e ta l.D e v e l o p m e n t a l c h a n-g e s i nm y o c a r d i a lBc e l l sm i r r o rc h a n g e s i nBc e l l sa s s o c i a t e dw i t hd i f f e r e n to r g a n sJ.J C I I n s i g h t,2 0 2 0,5(1 6):e 1 3 9 3 7 7.1 7 S k e l l yD A,S q u i e r sG T,M c L e l l a n M A,e ta l.S i n g l e-c e l lt r a n s c r i p t i o n a lp r o f i l i n gr e v e a l sc e l l u l a rd i v e r s i t ya n di n t e r-c o mm u n i c a t i o n i n t h em o u s eh e a r tJ.C e l lR e p,2 0 1 8,2 2(3):6 0 0-6 1 0.1 8 D i c kSA,M a c k l i nJA,N e j a tS,e ta l.S e l f-r e n e w i n gr e s i d e n tc a r d i a cm a c r o p h a g e s l i m i t a d v e r s e r e m o d e l i n g f o l l o w i n gm y o-c a r d i a l i n f a r c t i o nJ.N a t I mm u n o l,2 0 1 9,2 0(1):2 9-3 9.1 9 M aS,S u nS,L i J,e t a l.S i n g l e-c e l l t r a n s c r i p t o m i ca t l a so fp r i-m a t ec a r d i o p u l m o n a r ya g i n gJ.C e l lR e s,2 0 2 1,3 1(4):4 1 5-4 3 2.2 0 A d a m oL,R o c h a-R e s e n d eC,L i nCY,e t a l.M y o c a r d i a l Bc e l l sa r eas u b s e to fc i r c u l a t i n gl y m p h o c y t e sw i t hd e l a y e dt r a n s i tt h r o u g ht h eh e a r tJ.J C I I n s i g h t,2 0 2 0,5(3):e 1 3 4 7 0 0.2 1 M e i l h a cSM,L e s c r o a r tF,B l a n p a i nC,e t a l.C a r d i a c c e l l l i n e a-g e s t h a t f o r mt h eh e a r tJ.C o l dS p r i n gH a r bP e r s p e c tM e d,2 0 1 4,4(9):a 0