2023年细菌感染的实验室检查（教学课件）.ppt

第八章第八章 细菌感染的检查方法与防治原那么细菌感染的检查方法与防治原那么 第一节第一节 细菌感染的细菌感染的诊断诊断 细菌学诊断细菌学诊断(bacteriological diagnosis)血清学诊断血清学诊断(serological diagnosis)检测病原菌及其抗原、核酸、代谢产物等检测病原菌及其抗原、核酸、代谢产物等 检测患者血清中特异抗体检测患者血清中特异抗体 细菌学诊断细菌学诊断(bacteriological diagnosis)标本的采集和运送标本的采集和运送 无菌采集：防止杂菌污染无菌采集：防止杂菌污染 注意运送、保存、检查等过程的标记注意运送、保存、检查等过程的标记 不同疾病不同疾病/不同病程采集不同标本不同病程采集不同标本 采集病变明显部位采集病变明显部位 早期采集早期采集:疾病早期疾病早期/用抗菌素以前用抗菌素以前 第一节第一节 细菌感染的细菌感染的诊断诊断 及时送检：标本必须新鲜及时送检：标本必须新鲜 细菌学诊断细菌学诊断(bacteriological diagnosis)细菌检查方法细菌检查方法 形态与结构的检查形态与结构的检查 别离培养与鉴定别离培养与鉴定 抗原物质的检测抗原物质的检测 其他检测方法其他检测方法 第一节第一节 细菌感染的细菌感染的诊断诊断 细菌学诊断细菌学诊断(bacteriological diagnosis)形态与结构的检查形态与结构的检查 细菌个体形态与结构的检查细菌个体形态与结构的检查 细菌的菌体形态、排列、染色性细菌的菌体形态、排列、染色性 染色染色 单染：单染：复染：复染：特殊染色：特殊染色：第一节第一节 细菌感染的细菌感染的诊断诊断 细菌学诊断细菌学诊断(bacteriological diagnosis)形态与结构的检查形态与结构的检查 革兰染色法革兰染色法（Gram stain）：方法：初染方法：初染 媒染媒染 脱色脱色 复染复染 原理：原理：1、G+菌等电点低于菌等电点低于G-菌，吸收带正电荷的碱性燃料多菌，吸收带正电荷的碱性燃料多 2、G+菌细胞壁肽聚糖层多，菌细胞壁肽聚糖层多，G-菌细胞壁脂质含量高菌细胞壁脂质含量高 3、G+菌含有多量核糖核酸镁盐与结晶紫、碘结合成大分子复合物菌含有多量核糖核酸镁盐与结晶紫、碘结合成大分子复合物 医学意义：医学意义：1、鉴定细菌、鉴定细菌 2、与致病性有关、与致病性有关 3、参考选择抗菌药物、参考选择抗菌药物 第一节第一节 细菌感染的细菌感染的诊断诊断 细菌学诊断细菌学诊断(bacteriological diagnosis)形态与结构的检查形态与结构的检查 抗酸染色抗酸染色acid-fast stain 方法：方法：1、石炭酸复红初染：加热、石炭酸复红初染：加热35min，水洗，水洗 2、3%5%盐酸酒精脱色盐酸酒精脱色30s，水洗，水洗 3、碱性美蓝复染、碱性美蓝复染30s，水洗。，水洗。4、干后镜检、干后镜检 结果：结果：抗酸杆菌抗酸杆菌 红色红色 非抗酸杆菌非抗酸杆菌 蓝色蓝色 原理：原理：分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，其中的分枝菌酸与分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，其中的分枝菌酸与 石炭酸复红结合成牢固的复合物，能抵抗脱色。石炭酸复红结合成牢固的复合物，能抵抗脱色。第一节第一节 细菌感染的细菌感染的诊断诊断 细菌学诊断细菌学诊断(bacteriological diagnosis)别离与鉴定别离与鉴定 别离：别离：固体平板固体平板 分区划线法分区划线法 单个菌落单个菌落 菌落形态：大小、光滑度、透明、溶血性菌落形态：大小、光滑度、透明、溶血性 鉴定：鉴定：形态特征形态特征 生化反响生化反响 血清学鉴定血清学鉴定 动物试验动物试验 药物敏感试验药物敏感试验 第一节第一节 细菌感染的细菌感染的诊断诊断 细菌学诊断细菌学诊断(bacteriological diagnosis)抗原的检测抗原的检测 优点：优点：别离、培养细菌困难的情况下；别离、培养细菌困难的情况下；已经使用了抗生素、细菌已被抑制已经使用了抗生素、细菌已被抑制/杀死；杀死；可检测微量的抗原可检测微量的抗原 常用方法：常用方法：沉淀反响沉淀反响 协同凝结试验协同凝结试验 免疫荧光法免疫荧光法 对流免疫电泳对流免疫电泳 酶免疫法酶免疫法 免疫印迹法免疫印迹法 第一节第一节 细菌感染的细菌感染的诊断诊断 细菌学诊断细菌学诊断(bacteriological diagnosis)病原菌核酸的检测病原菌核酸的检测 优点：优点：别离、培养细菌困难的情况下；检测病原菌的特异性基别离、培养细菌困难的情况下；检测病原菌的特异性基因及序列因及序列 常用方法：常用方法：核酸杂交技术核酸杂交技术 PCR技术技术 基因芯片技术基因芯片技术 第一节第一节 细菌感染的细菌感染的诊断诊断 标记序列的核酸单链作为探针 序列一对特异寡核苷酸作为引物 血清学诊断血清学诊断(serological diagnosis)抗体的检测抗体的检测 原理：用的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性原理：用的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性 抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。原那么：原那么：双份血清；双份血清；与该地区的抗体效价的正常值比较；与该地区的抗体效价的正常值比较；恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高4倍倍者者 第一节第一节 细菌感染的细菌感染的诊断诊断 血清学诊断血清学诊断(serological diagnosis)抗体的检测抗体的检测 常用方法：常用方法：凝集试验：凝集试验：补体结合试验：补体结合试验：中和试验：中和试验：肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等 抗“抗“O试验等试验等 Q热柯克斯体抗体检测等热柯克斯体抗体检测等 第一节第一节 细菌感染的细菌感染的诊断诊断 人工免疫两种人工免疫两种 自然免疫自然免疫 主要指机体感染病原体后建立的特异性免疫，也包括胎儿或主要指机体感染病原体后建立的特异性免疫，也包括胎儿或新生儿经胎盘或乳汁从母体获得抗体。新生儿经胎盘或乳汁从母体获得抗体。是人为地使机体获得特异性免疫，是免疫预防的重要手段。是人为地使机体获得特异性免疫，是免疫预防的重要手段。人工主动免疫人工主动免疫 人工被动免疫人工被动免疫 第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防 第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防 人工主动免疫人工主动免疫(artificial active immunization)是用疫苗接种机体是用疫苗接种机体，使之产生特异性免疫使之产生特异性免疫，从而预防感染的措施从而预防感染的措施。而国际上把细菌性制剂而国际上把细菌性制剂、病毒性制剂以及类毒素统称为病毒性制剂以及类毒素统称为 疫苗疫苗(vaccine)。国内常将用细菌制作的人工主动免疫用生物制品称为菌苗国内常将用细菌制作的人工主动免疫用生物制品称为菌苗，而将用病毒而将用病毒、立克次体立克次体、螺旋体等制成的称为疫苗螺旋体等制成的称为疫苗。第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防 人工主动免疫人工主动免疫(artificial active immunization)灭活疫苗灭活疫苗(inactivated vaccine)第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防 选用免疫原性强的病原体，经人工大量培养后，用理化方法灭活制成。选用免疫原性强的病原体，经人工大量培养后，用理化方法灭活制成。死疫苗主要诱导特异抗体的产生，为维持血清抗体水平，常需屡次接种。死疫苗主要诱导特异抗体的产生，为维持血清抗体水平，常需屡次接种。由于灭活的病原体不能进入宿主细胞内增殖，难以通过内源性抗原加工提由于灭活的病原体不能进入宿主细胞内增殖，难以通过内源性抗原加工提呈，缺乏以诱导呈，缺乏以诱导CD8+T细胞成为效应细胞成为效应CTL，免疫效果有一定局限性。，免疫效果有一定局限性。人工主动免疫人工主动免疫(artificial active immunization)减毒活疫苗减毒活疫苗live-attenuated vaccine 第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防 用减毒或无毒力的活病原微生物制成。用减毒或无毒力的活病原微生物制成。活疫苗接种类似隐性感染或轻症感染，病原体在体内有一定的生长繁殖能活疫苗接种类似隐性感染或轻症感染，病原体在体内有一定的生长繁殖能力，一般只需接种一次。力，一般只需接种一次。多数活疫苗的免疫效果良好、持久，除诱导机体产生体液免疫外，还可产多数活疫苗的免疫效果良好、持久，除诱导机体产生体液免疫外，还可产生细胞免疫，经自然感染途径接种还形成黏膜局部免疫。生细胞免疫，经自然感染途径接种还形成黏膜局部免疫。其缺乏之处是疫苗在体内有回复突变的危险。免疫缺陷者和孕妇一般不宜其缺乏之处是疫苗在体内有回复突变的危险。免疫缺陷者和孕妇一般不宜接受活疫苗接种。接受活疫苗接种。人工主动免疫人工主动免疫(artificial active immunization)类毒素类毒素(toxiod)第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防 用细菌的外毒素经用细菌的外毒素经0.3%0.4%甲醛处理制成甲醛处理制成。因其已失去外毒素的毒性，但保存免疫原性，接种后能因其已失去外毒素的毒性，但保存免疫原性，接种后能诱导机体产生抗毒素。诱导机体产生抗毒素。人工被动免疫人工被动免疫artificial passive immunization 第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防 是给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，是给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。以治疗或紧急预防感染的措施。因这些免疫物质并非由被接种者自己产生，缺乏主动补充的因这些免疫物质并非由被接种者自己产生，缺乏主动补充的来源，而且维持时间短暂，一般约来源，而且维持时间短暂，一般约23周。周。人工被动免疫人工被动免疫artificial passive immunization 抗毒素抗毒素(antitoxin)细胞因子与单克隆抗体细胞因子与单克隆抗体 人免疫球蛋白制剂人免疫球蛋白制剂 破伤风抗毒素、白喉抗毒素破伤风抗毒素、白喉抗毒素 人免疫球蛋白制剂是从大量混合血浆或胎盘人免疫球蛋白制剂是从大量混合血浆或胎盘血中别离制成的免疫球蛋白浓缩剂。血中别离制成的免疫球蛋白浓缩剂。第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防 人工被动免疫本卷须知人工被动免疫本卷须知 人工被动免疫人工被动免疫artificial passive immunization 第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防 防治超敏反响防治超敏反响:注射动物免疫血清前，应询问病史，做皮试，注射动物免疫血清前，应询问病史，做皮试，在注射免疫球蛋白制剂时应注意观察，防治超敏反响发生。在注射免疫球蛋白制剂时应注意观察，防治超敏反响发生。早期足量使用：抗毒素只与游离毒素反响，一旦毒素与组织细早期足量使用：抗毒素只与游离毒素反响，一旦毒素与组织细胞结合，抗毒素便失去其中和作用。胞结合，抗毒素便失去其中和作用。不滥用丙种球蛋白：屡次注射丙种球蛋白容易引起超敏反响。不滥用丙种球蛋白：屡次注射丙种球蛋白容易引起超敏反响。第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防 第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防 新型疫苗及其开展新型疫苗及其开展 亚单位疫苗亚单位疫苗(subunit vaccine)合成肽疫苗合成肽疫苗(synthetic peptide vaccine)重组抗原疫苗重组抗原疫苗(recombinant antigen vaccine)重组载体疫苗重组载体疫苗(recombinant vector vaccine)DNA疫苗疫