2023年介绍几种新的感染性标志物太工讲课（教学课件）.ppt

2023/3/19 1 讲者介绍 胡锡池，硕士，毕业于苏州大学病原生物学专业。无锡二院“青年人才库培养对象，长期从事微生物的鉴定与耐药性的监测工作。现为无锡市第二人民医院临床微生物室专业主管，同时也是无锡耐药监测平台主要成员。近三年在省级核心期刊上发表细菌耐药方面的专业论文近十篇，获省级新技术引进奖两项，在研市级立项课题一项。2023/3/19 2 介绍几种新的感染标志物 无锡二院 胡锡池 2023/3/19 4 几种新的感染标志物 1、降钙素原ProcalcitominPCT 2、内毒素 3、(13)-D-葡聚糖G试验 4、半乳甘露聚糖GM试验 5、呼吸道病毒7项检测直接免疫荧光法 2023/3/19 5 降钙素原降钙素原ProcalcitominPCT 2023/3/19 6 降钙素原概述 降钙素原是正常人血清中存在，含降钙素原是正常人血清中存在，含116个氨基酸组成的个氨基酸组成的糖蛋白，最初由甲状腺糖蛋白，最初由甲状腺C细胞产生细胞产生;在非感染或病毒性感染疾病时保持非常低的血清水平，在非感染或病毒性感染疾病时保持非常低的血清水平，在细菌性感染时含量升高，并与感染程度和预后呈正相在细菌性感染时含量升高，并与感染程度和预后呈正相关关;目前国外认为目前国外认为PCT为一种新的具有创新意义、可用于诊为一种新的具有创新意义、可用于诊断和监控严重细菌感染及脓毒血症、败血症等疾病的理断和监控严重细菌感染及脓毒血症、败血症等疾病的理想指标，具有高度的敏感性和特异性想指标，具有高度的敏感性和特异性;PCT含量的变化稳定，并出现在疾病的早期含量的变化稳定，并出现在疾病的早期3-4h。半衰期半衰期(24h);正常血清水平正常血清水平:100-150pg/ml。2023/3/19 7 哪些情况下降钙素原会升高 全身性细菌感染；严重休克、SIRS和MODS。真菌、寄生虫、立克次体、结核感染；病毒感染、肿瘤、过敏、自身免疫性疾病及局部感染患者中，PCT水平可轻度升高；2023/3/19 8 PCT的临床意义 早期诊断 在感染发生2-3h血浆PCT浓度就会升高.病情监测 在脓毒性休克时PCT含量最高，可达1000ng/ml，是正常人的2000倍。随着感染的恢复PCT也随着下降。PCT升高幅度依次为Sirs全身性炎症反响综合症+/，Sepsis败血症2+、Severe Sepsis严重败血症3+、Sepsis Shock 败血症休克4+预后判断 动物实验证明，PCT是一个潜在的致死因子，本身不会启动脓毒性反响，但可放大并加重脓毒性的病理反响，当PCT含量升高时死亡率也升高。鉴别诊断 细菌感染和非细菌性炎症反响自身免疫性疾病等的鉴别诊断 细菌感染和病毒感染的鉴别诊断脑脊膜炎等 器官移植术后鉴别诊断细菌感染、病毒感染、吸收热、排斥反响、真菌感 染等 脓毒性休克和非脓毒性休克的鉴别诊断 2023/3/19 9 PCT 的实验室检测 免疫发光法免疫发光法(ILMA)法国梅里埃公司、美国罗氏法国梅里埃公司、美国罗氏 该方法敏感性高该方法敏感性高,特异性强，此法测定的低限值为特异性强，此法测定的低限值为0.1ng/ml,检测耗时约检测耗时约2h。SPCT-Q-半定量快速实验半定量快速实验-德国评细替、武汉海特德国评细替、武汉海特 该方法操作简单、结果易观察的特点。其低限值为该方法操作简单、结果易观察的特点。其低限值为0.5ng/ml。检测耗时约。检测耗时约0.5h。无锡雷赛公司无锡雷赛公司 放射免疫学分析法放射免疫学分析法 透射免疫浊度法透射免疫浊度法 2023/3/19 10 不同人群中血浆PCT的值 2023/3/19 11 PCT 与其它感染性指标的比较。与其它感染性指标的比较。PCT PCT PSPS WBC WBC:特异性高特异性高：全身性感染既可导致白细胞升高,也可以引起白细胞减少。PCT PCT PSPS CRPCRP：灵敏度好：灵敏度好：PCT可在感染后2个小时后检测；CRP在炎症过程开始812h 后，才能从血清中检测出。PCT PCT PSPS ILIL-1 1、ILIL-6 6、TNFTNF-:稳定性好：稳定性好：PCT 的半衰期较长(2024h)；IL半衰期很短(数分钟至几小时)。E66851108 2023/3/19 12 内毒素检测内毒素检测 2023/3/19 13 内毒素研究背景内毒素研究背景 1.据据统计统计，我，我国国每年各每年各种种感染病人到感染病人到达达2亿亿人次，人次，发热发热病人到病人到达达3亿亿人次，其中人次，其中G-菌感染占很大比菌感染占很大比例。例。由革兰氏阴性菌所引起的内毒素血症及脓毒由革兰氏阴性菌所引起的内毒素血症及脓毒血症是目前临床上的主要死亡原因之一。血症是目前临床上的主要死亡原因之一。早期的数小时内作为临床上抢救感染性休克的关早期的数小时内作为临床上抢救感染性休克的关键，因此，早期体液中内毒素的正确、快速定量键，因此，早期体液中内毒素的正确、快速定量检测及相应的对症治疗就显得格外重要。检测及相应的对症治疗就显得格外重要。内毒素的快速定量测定有助于对内毒素的快速定量测定有助于对G-菌感染的早期菌感染的早期诊断、治疗方法的选择及疗效的判断。诊断、治疗方法的选择及疗效的判断。2.3.4.2023/3/19 14 定义 细菌内毒素细菌内毒素 Endotoxin Endotoxin 是是G G-菌细胞壁上的特有结构，内毒素菌细胞壁上的特有结构，内毒素为外源性致热原，它可激活中性为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。内毒素的主要化学成引起发热。内毒素的主要化学成分为脂多糖分为脂多糖LPSLPS中的类脂中的类脂A A。2023/3/19 15 Shwartzman现象现象 5 内毒素的生物学效应 发热反应发热反应 1 白细胞反应白细胞反应 2 内毒素血症（内毒素血症（ETMETM）与内毒素休克（）与内毒素休克（ETSETS）3 弥漫性血管内凝血（弥漫性血管内凝血（DICDIC）4 2023/3/19 16 内毒素血症与临床疾病的相关性内毒素血症与临床疾病的相关性 内毒素检测内毒素检测 革兰阴性菌败血症的诊断革兰阴性菌败血症的诊断 呼吸道感染呼吸道感染 肝脏感染及肝硬化肝脏感染及肝硬化 胆道疾病胆道疾病 急性胰腺炎急性胰腺炎 溃疡性结肠炎溃疡性结肠炎 细菌性感染的辅助性诊细菌性感染的辅助性诊 断、治疗和预后判断断、治疗和预后判断 原因不明的发热原因不明的发热 外源性输注的内毒素血症外源性输注的内毒素血症的诊断的诊断 2023/3/19 17 体液内毒素水平增高是严重细菌性感染体液内毒素水平增高是严重细菌性感染尤其是革尤其是革兰染色阴性菌兰染色阴性菌的一个重要的特异性指标，而且，也是的一个重要的特异性指标，而且，也是脓毒血症和全身炎症反响综合症的可靠指标。内毒素水脓毒血症和全身炎症反响综合症的可靠指标。内毒素水平不仅可用于感染类别的鉴别诊断，也可用于感染控制平不仅可用于感染类别的鉴别诊断，也可用于感染控制和病情转归的参数。因此，建议在适当的时候可对内毒和病情转归的参数。因此，建议在适当的时候可对内毒素的水平作一系列连续动态的监测。素的水平作一系列连续动态的监测。内毒素检测的临床意义内毒素检测的临床意义 2023/3/19 18 (13)-D-葡聚糖葡聚糖(G试验试验)半乳甘露聚糖半乳甘露聚糖(GM试验试验)2023/3/19 19 当前侵袭性真菌感染当前侵袭性真菌感染(IFI)检测的现状检测的现状 发病率呈逐年上升趋势，且漏诊率居高不下。据尸检研究发现，75%的IFI病例在生前漏诊，主要原因是IFI的临床表现不典型易被根底疾病所掩盖，导致诊断困难。目前常规微生物学检查直接涂片镜检和真菌培养耗时长，干扰因素多。而分子生物学检查真菌DNA的检测门槛过高，且不能提示现症感染。病理检查常因患者的病情所限难以实施。因此寻找有效的感染性标志物对于快速诊断侵袭性真菌感染、制定正确的治疗方案、争取最正确治疗时间，意义重大。2023/3/19 20 真菌感染的诊断真菌感染的诊断 深部真菌感染的临床表现 深部真菌感染影像学特征 微生物学检查 主要包括两方面:直接涂片镜检和真菌培养.分子生物学检测-真菌DNA的检测 真菌细胞壁组分检测(1,3)-D-葡聚糖(G试验)真菌抗原检测 半乳甘露聚糖(GM试验)，分布于大多数曲霉属真菌胞壁中 2023/3/19 21 1-3-葡聚糖的检测葡聚糖的检测(G试验试验)真菌在自然界中分布很广真菌在自然界中分布很广,其细胞壁主要成分其细胞壁主要成分为为(1(1-3)3)-D D-Glucan(Glucan(葡聚糖葡聚糖).).当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理，胞的吞噬、消化等处理，1 1-3 3-D D葡聚糖可从葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液如如尿、脑脊液，腹水，胸水等尿、脑脊液，腹水，胸水等中中1 1-3 3-D D葡葡聚糖含量增高。聚糖含量增高。浅部真菌感染中，浅部真菌感染中，1 1-3 3-D D葡聚糖未被释放葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。出来，故其在体液中的量不增高。2023/3/19 22 快速检测血液等体液中酵母菌、丝状真菌等细胞快速检测血液等体液中酵母菌、丝状真菌等细胞壁成分，不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、壁成分，不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属。镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属。另据文献报道，检测葡聚糖含量不能用于隐球菌另据文献报道，检测葡聚糖含量不能用于隐球菌感染的诊断，可能因为隐球菌在免疫缺陷患者体感染的诊断，可能因为隐球菌在免疫缺陷患者体内生长缓慢，并形成厚荚膜。有体外实验说明，内生长缓慢，并形成厚荚膜。有体外实验说明，新生隐球菌产生的新生隐球菌产生的1-3-D葡聚糖量比念珠菌葡聚糖量比念珠菌和曲霉菌少。和曲霉菌少。是早期真菌感染的敏感生物标志是早期真菌感染的敏感生物标志 可鉴别致病菌和定植菌可鉴别致病菌和定植菌 1-3-葡聚糖的临床意义葡聚糖的临床意义 2023/3/19 23 1-3-葡聚糖葡聚糖G试验试验-北京金山川北京金山川 酵母菌、丝状真菌细胞壁成分；不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属；不能检测：隐球菌和接合菌；美国FDA已批准，欧洲局部国家已注册；敏感性、特异性：90左右 2023/3/19 24 半乳甘露聚糖半乳甘露聚糖(GM试验试验)半乳甘露聚糖半乳甘露聚糖galactomannangalactomannan，GMGM是曲霉菌细胞壁是曲霉菌细胞壁的组成成分，当曲霉在组织生长时可释放进入血循环。的组成成分，当曲霉在组织生长时可释放进入血循环。检测的是半乳甘露聚糖，主要适于侵袭性曲霉菌感染检测的是半乳甘露聚糖，主要适于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断。当菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的的早期诊断。当菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原。菌丝顶端释放，是最早释放的抗原。GMGM释放量与菌量释放量与菌量成正比，可以反映感染程度。连续检测成正比，可以反映感染程度。连续检测GMGM可作为治疗可作为治疗疗效的监测。疗效的监测。2023/3/19 25 GM检测的临床意义检测的临床意义 GMGM检测有助于检测有助于IPAIPA的早期诊断，而且还有助于抗曲霉治的早期诊断，而且还有助于抗曲霉治疗的疗效以及疾病转归的判断疗的疗效以及疾病转归的判断 血清中血清中GMGM的量伴随的量伴随IPAIPA的进展会增加，也会随着药物的的进展会增加，也会随着药物的有效治疗而下降。如果在有效治疗而下降。如果在IPAIPA的治疗期间，其的治疗期间，其GMGM抗原血抗原血症持续保持较高水平者，其预后那么较差，此时试着症持续保持较高水平者，其预后那么较差，此时试着更改治疗方案。相反，更