HPLC法同时测定儿童化妆品中达克罗宁与新康唑的含量.pdf

药学与临床研究药学PharmaceuticalandClinical Research研究HPLC法同时测定儿童化妆品中达克罗宁与新康唑的含量吴旭,金鹏,刘洋,苏晶准安市食品药品检验所，准安2 2 3 3 0 0品*摘要目的：建立儿童化妆品中达克罗宁与新康唑含量测定的高效液相色谱方法。方法：采用Cis柱色谱柱(2 50 mm4.6mm,5m)或等效色谱柱；流动相A为0.0 2 moLL-1磷酸二氢钠水溶液（H,PO4调pH值至3.0），流动相B为甲醇，行梯度洗脱；流速：1.0 mLmin-；检测波长：2 8 0、202nm；柱温：3 0;进样量：10 L。结果：达克罗宁和新康唑在1 10 0 gmL-1范围内线性关系良好，提取效果、特异性、耐用性、准确度、精密度均符合要求。结论：该方法可同时测定儿童化妆品中达克罗宁和新康唑的含量，为违禁成分的检测提供参考。关键词儿童化妆品；新康唑；达克罗宁；含量测定中图分类号R927.2文献标志码A文章编号1673-7806(2023)04-313-04随着社会的发展和生活水平的提高，儿童化妆品的普及率越来越高,其安全性亦备受消费者关注。在某次江苏省化妆品省级监督抽检中，某公司生产的儿童用护肤品中检出了新康唑和达克罗宁两种未列人化妆品原料的物质。新康唑为酮康唑（）的衍生物，主体结构与酮康唑完全相同,是一种咪唑类新型广谱抗生素，可抑制真菌麦角甾醇生物合成，并改变细胞膜其它脂类化合物的组成。酮康唑不能用于个人护理品中2,而新康唑主要用以去屑、杀菌和调节皮肤油脂3 。达克罗宁多以盐酸盐形式存在，是一种新型处方类局部麻醉药,作用于皮肤及粘膜表面,具有镇痛、止痒及杀菌作用5。新康唑和达克罗宁在我国主要用于医学领域，在化妆品中属于禁用成分，不应在化妆品特别是儿童化妆品中使用。本研究建立了化妆品中新康唑和达克罗宁的检验方法，弥补了现行化妆品安全检测方法的不足，为行政监管打击个别企业非法添加违禁成分的行为提供了技术支撑。1仪器与药品、试剂1.1仪器与试剂Waters2695/2998高效液相色谱仪（美国沃特世公司）；岛津LC-2030高效液相色谱仪（日本岛津公*基金项目江苏省市场监督管理局科技计划项目(KJ21125111)作者简介吴旭，女，副主任药师E-mail:*通信作者苏晶，女，正高级工程师E-mail：2 58 0 7 6 6 53 q q.c o m收稿日期2023-03-16修回日期2 0 2 3-0 6-2 7司）;METTLERXS205电子天平（瑞士梅特勒-托利多科技有限公司），KH7200型超声波清洗仪（昆山禾创超声仪器有限公司）,Thermo MULTIFUCEX1R高速离心机（美国赛默飞世尔科技公司），XW-80A涡旋混合仪(上海驰唐电子有限公司),SevenCompactS220pH计（瑞士梅特勒-托利多科技有限公司）；Milli-QR型超纯水机（美国密理博公司）。甲醇、乙腈为色谱纯；甲酸、磷酸（8 5%,wlu），优级纯；磷酸二氢钠、氢氧化钠分析纯；水为GB/T6682规定的一级水。1.2材料盐酸达克罗宁对照品（中国食品药品检定研究院，批号10 0 4 2 3-2 0 110 2，10 5干燥3 小时后使用，按CisHz7NO2HCl计，含量为9 9.8%）；新康唑对照品(Cato Research Chemicals Inc，批 号 10 2 8-RC-0061,含量 9 9.8%)。儿童化妆品共17 批次，均来自江苏省化妆品监督抽检。2大方法与结果2.1色谱条件与系统适用性实验色谱柱：Diamonsil Cis柱（2 50 mm4.6mm,5 m)或等效色谱柱；流动相A为0.0 2 moLL-I磷酸二氢钠水溶液(H,PO4调pH值至3.0)，流动相B为甲醇，梯度洗脱（A:B）:0 m i n(4 0:6 0)9 m i n(4 0:60)13 min(30:70)30 min(30:70)30.1 min(40:60)34min（4 0:6 0)；流速1.0 mLminl；检测波长280、2 0 2 n m;柱温3 0;进样量10 L。3132023Aug;31(4)HPLC法同时测定儿童化妆品中达克罗宁与新康唑的含量2.2溶液的制备2.2.1混合标准储备溶液取达克罗宁对照品和新康唑对照品各适量，精密称定，加乙腈溶解并定量稀释制成每1mL中含达克罗宁1mg和新康唑1mg的溶液。2.2.2供试品溶液禾称取样品0.5g(精确到0.1mg)于2 5mL具塞比色管中，加入乙腈2 mL,涡旋分散均匀后，加入乙腈2 0 mL，涡旋3 0 s，冰浴超声提取30min，加入乙腈定容至刻度，置冰箱冷藏3 h，以5000rmin-l离心5min，取上清液经0.2 2 m滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。2.2.3空白基质溶液称取空白样品0.5g，按照“2.2.2项下方法处理，得空白基质溶液。2.2.4空白基质加标溶液称取空白样品0.5g，加人混合标准储备溶液，按照“2.2.2 项下方法处理，得空白基质加标溶液。2.3方法学考察2.3.1提取效果样品前处理的方法主要参考了化妆品安全技术规范2 0 15版中“2.1氟康唑等9种组分”的前处理方法，比较了乙腈和甲醇两种提取溶液的提取效率。达克罗宁和新康唑在乙睛中都有很好的溶解性，最终确定以乙腈作为提取剂，并加用超声波振荡。称取11号阳性样品0.5g于2 5mL具塞比色管中,加入乙腈2 mL,涡旋分散均匀后，定容至刻度，涡旋3 0 s，考察冰浴、室温、6 0 三个条件下，超声0、10、2 0、3 0、4 0 m i n 条件下乙的提取效果。结果达克罗宁在冰浴3 0 min时提取效果最好，新康唑在603 0 m in 时提取效果最好，考虑到达克罗宁易降解,且含量较新康唑少,所以选择冰浴3 0 min为提取条件。2.3.2特异性选择溶剂（乙腈）、空白基质溶液（2.2.3 ）、空白基质加标溶液（“2.2.4 ）按照“2.1 色谱条件进行分析，记录色谱图（图1）。结果表明达克罗宁和新康唑与相邻峰之间分离度均 1.5,溶剂和基质中存在的因子对被测目标因子均不存在干扰。0.4A达克罗宁20.20.001.溶剂色谱图；2.白基质色谱图；3.空白基质加标色谱图2.3.3耐用性为保证实验方法的适用性，结合本314实验室的实际情况，分别考察了流动相的比例(3 5:65、4 0:6 0、4 5:55）、流动相pH值（2.5、3.0 3.5）、检测波长（2 7 5、19 3 nm,280、2 0 2 n m,2 8 5、2 0 7 n m）、流速（0.9、1.0、1.1mLmin-l）、柱温（2 53 0、3 5）、不同品牌色谱柱(Diamonsil Cis、Wa t e r s Br i d g e Ci s、Ca p c e l lPak Cis)对实验的影响。结果实验条件在适当范围内变化时，新康唑和达克罗宁与相邻峰的分离度依旧 1.5,且含量没有变化，说明耐用性良好。2.3.4标准工作曲线称取空白样品0.5g（精确到0.1mg)6份，分别加人“2.2.1项下混合标准储备溶液适量，按2.2.2 项下方法处理，得基质标准工作溶液系列，浓度分别为1、2、5、10、50、10 0 gmL-l。量取乙睛2 mL6份,同法操作,得标准工作溶液系列。按“2.1 项下色谱条件检测,以浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标进行线性相关性分析(表1)。结果表明空白基质加标曲线相关系数更好，故本方法选择空白基质加标制作标准工作曲线。表1标准曲线的回归方程、相关系数和线性范围物质体系标准溶液Y=3.5510X+8.83103达克罗宁空白加标Y=3.5910X-7.53103标准溶液Y=6.61105X+3.141050.999 76新康唑空白加标Y=7.1710X-5.161050.999942.3.5准确度向空白基质中加人混合标准储备液，按“2.2.2”项下方法处理，制成方法定量限(LOQ）两倍方法定量限(2 LOQ)和十倍方法定量限(10LOQ)三种浓度的溶液，进行加标回收率实验，结果见表2，不同添加水平均符合回收率试验的要求。表2 回收率考察测定结果记录表（n=6）提取回收率物质加人量平均平均(g)RSD测得量回收率(%）(g)(%）达克罗宁25(LOQ)新康唑25(LOQ)达克罗宁50280nm0.4B30.2211020t/min图1达克罗宁(A）与新康唑(B)HPLC图线性范围回归方程(gmL-)0.999.90110030.999.99110011001100方法回收率平均平均RSD测得量回收率(%）(g)(%）23.8095.201.023.2893.122.023.9748.1196.220.4202m(2LOQ)新康唑新康唑5048.4596.892.248.64(2LOQ)达克罗宁250246.0398.410.6256.330.0(10LOQ)30026.1850.581020t/min104.701.095.863.0101.150.697.273.4102.530.830新康唑250245.4898.191.1246.38(10LOQ)2.3.6精密度选择5种典型的空白化妆品作为验证基质进行重复性试验，分别编号为空白样品A（爽肤水）、B（凝胶）C（润肤霜?）D（精华油）E（润98.550.8药学与临床研究药学Pharmaceutical and Clinical Research研究肤乳?），被测组分添加水平同准确度中回收率试验要求，结果均符合要求,见表3。将不同实验室的数据浓度样品A物质(ug检出浓度RSD准确度检出浓度RSD准确度检出浓度RSD准确度检出浓度RSD准确度检出浓度RSD准确度(ugg)(%）达克罗宁5010050050新康坐1005002.3.7检出限和定量限以信噪比3:1为检出限，信噪比10:1为定量限，本方法对2 种物质的检出限情况及定量限见表4。表4定量限与检出限方法定量方法检定量限检出限物质体系(gmL-)(gmL-1)达克标准溶液罗宁空白加标新康标准溶液唑空白加标2.3.8样品含量测定对市售的14种样品共计2 0批次化妆品进行检验，检测结果见表5。结果有4种化妆品违规添加达克罗宁和新康唑。表5样品信息及测定结果测定结果（gkg)样品编号规格125g2.3、425g525g625g7.868g968g1025g11、1220g13、1450mL15.1610g1725g1825g1968g2068g3讨 论3.1检测波长的选择扫描新康唑和达克罗宁在19 0 40 0 nm处的紫进行统计分析，再现性的RSD指标同样符合要求。表3各空白样品中2 种待测物质的精密度（n=6）样品B(%）(g:g)(%)484.2953.95001.1493.9903.75003.51111批号LLXH0103LLXH1010L1265289L1336598LLZY1004LLFC1018LLQF0505LLJH0418JE001K202004LLXH1010LLXH1105LLZY1017LLZY0635样品C(%）(gg)(%）9554959510052597509090100520限浓度出浓度(ugg)(g:g)0.2500.2500.3500.350达克罗宁新康唑/0.692.490.652.492.3210.392.1110.30样品D（%）(ugg)(%）3.11082.3952.91054.61003.5903.1104551515样品E(%）(ugg)(%）484.51003.45151.5433.1953.55003.6外吸收情况，新康唑在2 0 2 nm有最大吸收,达克罗宁在2 8 0 nm有最大吸收。因新康唑在2 8 0 nm没有紫外吸收，且达克罗宁在2 0 2 nm吸收较小，所以选择双波长进行检测。经实际样品检测验证，可消除基质干扰，灵敏度满足方法检测需要。3.2仓色谱条件的选择3.2.1流动相的选择参考相关文献，在色谱柱相同，柱温30，流速1.0 mLmin-l的条件下，本实验分别选择乙腈-水（50:50）、甲醇-水（7 4:2 6）、水(0.02molL-1NaH,PO4,H,P04调pH值至3.0)-乙腈(40:6 0)、水(0.0 2 molL-lNaH,P04,H,PO4调pH值至3.0)-甲醇（40:6 0），进行液相分离，实验结果表明，选择乙腈-水(50:50)时,由于乙腈洗脱能力太强，达克罗宁在2.2 min出峰，新康唑19.1min出峰，与杂质峰分离度不符合要求，且峰形较差。甲醇-水（7 4:2 6)时，达克罗宁在7.3min出峰，新康唑31.1min出峰,其中达克罗宁响应低且峰形较差。以水(0.0 2 molL-lNaH,PO4,H,PO4调pH值至3.0)为水相时，峰形较好。以乙腈为有机相时，峰形存在拖尾,且与相邻杂质峰分离度不符合要求,以甲醇为有机相时，峰形较好，不存在拖尾现象，所以本方法选用甲醇作为有机相，以水(0.0 2 molL-1NaH,PO4,HPO4调pH值至3.0)为水相。3.2.2流动相pH的选择考虑色谱柱的耐受性，结合实验的实际情况，在相同液相色谱条件下，分别选择pH值为3.0、4.8、7.0 三个点作为考察对象，当pH=3.0时的分离效果和峰形最好，故选用水相pH值为3.0。3.2.3洗脱方式的选择本实验考察了等度条件和梯度条件对实验结果的影响。等度条件下水(0.02molL-lNaH,PO4,H,PO4调pH值至3.0):甲醇为30:7 0 时，达克罗宁在4.0 min出峰，新康唑在13.4min出峰，出峰时间较快，但与杂质峰分离度不315(%）964310090103490864395891004953.22.51.82.13.61.68690988689994410553045954900.53.73.53.13.53.3881051069095982023Aug;31(4)）H PLC 法同时测定儿童化妆品中达克罗宁与新康唑的含量符合要求；水(0.0 2 molL-lNaH,PO4,H,PO4调pH值至3.0)：甲醇为40:6 0 时，达克罗宁在6.9min出峰，新康唑在40.6 min出峰,虽然与杂质峰分离度符合要求，但是出峰时间较长。在分离度符合要求的基础上，选择梯度条件来缩短分析时间。3.3利稳定性考察选择空白基质加标溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12 h 时进样，于0 h比较峰面积变化 2%，说明新康唑和达克罗宁在12 h内稳定；分别在0、1、2、3d时进样，于0 h比较峰面积变化，发现新康唑3d时峰面积变化2%，说明达克罗宁易降解。将空白基质加标溶液进行冷藏(2 10)分别在10、2 0、30 d时进样，于0 h比较峰面积变化均 2%，说明新康唑和达克罗宁在冷藏条件下可保存30 d。含有达克罗宁的样品建议在12 h内完成进样,或者选择样品盘可以控温的高效液相色谱仪进行检测。参考文献】文彬，隆艳，毛振民.HPLC 法测定噻康唑的含量和有关物质 J.中国抗生素杂志，2 0 0 7，32(3)：16 3-5.2 国家食品药品监督管理总局.化妆品安全技术规范 S北京：2 0 15.3 PIERARD GE,RIES G,CAUWENBERGH G.Newinsight into the topical management of excessive sebumflow at the skin surface J.Dermatology(Basel,Switzerland),1998,196(1):126-9.4】张少华，杨木泽，张昌盛，等。盐酸达克罗宁胶浆用于门诊消化内镜手术全麻插管时的表面麻醉效果 .武警医学,2 0 2 1,32(9):7 58-6 1.5林颖苹，朱伟文，邹璇复方盐酸达克罗宁乳膏佐治瘙痒性皮肤病的临床疗效分析 J.中国实用医药，2 0 11,6(26):135-6.HPLC Method for Simultaneous Determination of Dyclonine and Elubiol inChildrens Cosmetics*WU Xu,JIN Peng,LIU Yang,SU JingHuaian Institute for Food and Drug Control,Huaian 223300,ChinaABSTRACT Objective:To establish an HPLC method for the determination of dyclonine and elubiol incosmetics for children.Methods:HPLC analysis was performed on a Cis column(250 mm 4.6 mm,5 m)or equivalent column,with the mobile phase containing 0.02 molL-1 sodium phosphate monobasic aqueoussolution(adjust pH to 3.0 with H,PO4)and methanol in a gradient elution at 1.0mLmin-l.The detectionwavelengths were set at 280 nm and 202 nm.The column temperature was 30C.The injection volume was10 L.Results:The detection of dyclonine and elubiol were linear within the range of 1-100 gmL-1.The extraction efficacy,specificity,durability,accuracy and precision were all in accordance with therequirements.Conclusion:This method can simultaneously determine the contents of dyclonine and elubioin pediatric cosmetics,providing technical support for the detection of prohibited ingredients.KEY WORDS Childrens cosmetics;Elubiol;Dyclonine;Content determination316