山东农业科学２０２３ꎬ５５(７):１４５~１５１ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＤＯＩ:１０.１４０８３/ｊ.ｉｓｓｎ.１００１－４９４２.２０２３.０７.０２０收稿日期:２０２２－１０－０９基金项目:山东省高校中药质量控制与全产业链建设协同创新中心项目(ＣＹＬＸＴＣＸ２０２１－０６)ꎻ山东省创新公共服务平台计划中药分子鉴定公共服务平台项目(２０１８ＪＧＸ１１１)ꎻ山东省农业科学院齐鲁农科英才工程(创新类)项目作者简介:朱桐杉(１９９７—)ꎬ女ꎬ山东临沂人ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向:中药资源与质量控制研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｚｔｓ０１１６＠１６３.ｃｏｍ通信作者:张永清(１９６２—)ꎬ男ꎬ山东平邑人ꎬ教授ꎬ主要从事中药资源与质量控制研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｚｙｑ６２２００３＠１２６.ｃｏｍ张全芳(１９７８—)ꎬ女ꎬ甘肃酒泉人ꎬ副研究员ꎬ主要从事中药资源开发与利用ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｚｈｑｕａｎｆａｎｇ＠１６３.ｃｏｍ３种常见金银花致病菌多重实时荧光定量ＰＣＲ检测方法研究朱桐杉１ꎬ刘艳艳２ꎬ谭晴晴２ꎬ刘国霞２ꎬ陈雪燕２ꎬ步迅２ꎬ王文博３ꎬ于子涵１ꎬ４ꎬ张全芳２ꎬ张永清１(１.山东中医药大学药学院ꎬ山东济南２５０３５５ꎻ２.山东省农业科学院农作物种质资源研究所ꎬ山东济南２５０１００ꎻ３.山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所ꎬ山东济南２５０１００ꎻ４.山东中医药大学附属医院ꎬ山东济南２５００１３)摘要:为了建立可同时检测炭疽病病原菌(Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ)、白粉病病原菌(Ｅｒｙｓｉｐｈｅｌｏｎｉｃｅｒａ)和褐斑病病原菌(Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａｒｈａｍｎｉ)３种金银花重要叶部病原菌的多重实时荧光定量ＰＣＲ快速检测方法ꎬ本试验基于３种病原菌ＩＴＳ片段序列分别设计特异引物和ＴａｑＭａｎ荧光探针ꎬ并制备重组质粒建立标准曲线ꎻ对建立的多重实时荧光定量ＰＣＲ检测方法进行特异性、灵敏度、准确性验证ꎮ结果表明ꎬ本研究建立的多重实时荧光定量ＰＣＲ快速检测方法仅针对金银花炭疽病、白粉病和褐斑病病原菌有特异性扩增ꎻ最低检测限为２.９４×１０２ｃｏｐｉｅｓ/μＬꎬ比普通ＰＣＲ法高１００倍ꎻ利用本方法检测１５份有叶部病害症状的金银花病叶ꎬ与ＤＮＡ测序结果完全一致ꎮ综之ꎬ本研究建立的多重实时荧光ＰＣＲ检测方法特异性强、灵敏度高ꎬ为金银花炭疽病、白粉病和褐斑病的早期诊断提供了技术支持ꎮ关键词:金银...
