超高效液相色谱-串联质谱法检测禽畜肉中头孢曲松钠药物残留.pdf

172023,Vol.37,No.7分析检测肉类研究MEAT RESEARCH中国肉类食品综合研究中心CHINA MEAT RESEARCH CENTER超高效液相色谱-串联质谱法检测禽畜肉中 头孢曲松钠药物残留黄美玲（广电计量检测（福州）有限公司，福建 福州 350001）摘 要：建立超高效液相色谱-串联质谱法测定禽畜肉中头孢曲松钠药物残留量的方法。禽畜肉样品经乙腈-水溶液（8 2，V/V）振荡涡旋，超声提取，QuEChERS法净化，通过BEH C18色谱柱进行分离，以0.1%甲酸和甲醇为流动相，采用多反应监测模式分析，电喷雾离子源正离子模式（ESI）扫描，外标法定量。结果表明：头孢曲松钠线性关系良好，相关系数（R2）大于0.999；检出限为3.0 g/kg，定量限为9.0 g/kg；头孢曲松钠在不同禽畜肉基质中进行高、中、低3 种添加水平的回收率实验，平均加标回收率为87.17%105.21%，相对标准偏差为3.14%6.13%。该方法简单、快捷、灵敏、准确、可操作性强，适用于监管机构快速检测禽畜肉中头孢曲松钠残留量。关键词：超高效液相色谱-串联质谱法；头孢曲松钠；禽畜肉；QuEChERSDetection of Ceftriaxone Sodium Residue in Livestock and Poultry Meat by Ultra-Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass SpectrometryHUANG Meiling(GRG Metrology and Test Fuzhou Co.Ltd.,Fuzhou 350001,China)Abstract:In this study,an analytical method for the determination of ceftriaxone sodium residues in meat using ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS)was established.The samples were homogenized with acetonitrile-water(8:2,V/V)using a vortex mixer and ultrasonically extracted,and the extract was cleaned up by the quick,easy,cheap,effective,rugged and safe(QuEChERS)method,and separated on a BEH C18 column using a mobile phase consisting of 0.1%formic acid and methanol.The analysis was performed under multiple reaction monitoring(MRM)in the positive electrospray ionization(ESI+)mode.The external standard method was used for quantification.The results showed that the calibration curve for ceftriaxone sodium had good linearity,with a correlation coefficient greater than 0.999.The detection limit was 3.0 g/kg,and the quantification limit was 9.0 g/kg.The average recoveries for different matrices spiked at three concentration levels were 87.17%105.21%with relative standard deviations(RSDs)ranging from 3.14%to 6.13%.This method is simple,rapid,accurate,sensitive,highly operable,and suitable for the rapid detection of ceftriaxone sodium in meat.Keywords:ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry;ceftriaxone sodium;meat;quick,easy,cheap,effective,rugged and safe(QuEChERS)DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20230505-037中图分类号：TS251.7 文献标志码：A 文章编号：1001-8123（2023）07-0017-05引文格式：黄美玲.超高效液相色谱-串联质谱法检测禽畜肉中头孢曲松钠药物残留J.肉类研究,2023,37(7):17-21.DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20230505-037.http:/HUANG Meiling.Detection of ceftriaxone sodium residue in livestock and poultry meat by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometryJ.Meat Research,2023,37(7):17-21.(in Chinese with English abstract)DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20230505-037.http:/收稿日期：2023-05-05作者简介：黄美玲（1983）（ORCID:0009-0009-5768-331X），女，工程师，硕士，研究方向为食品检测。E-mail:182023,Vol.37,No.7分析检测肉类研究MEAT RESEARCH中国肉类食品综合研究中心CHINA MEAT RESEARCH CENTER头孢曲松钠有较强的杀菌作用，在头孢菌素类抗生素中属第3代，治疗革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性球菌的效果均较好，属于广谱抗生素，在兽医临床和禽畜养殖中较常使用；但时常存在禽畜养殖场户不按规定用药、滥用抗生素、违规使用禁用药物等现象，导致在动物源性食品中残留大量兽药，危害人类健康1-2，严重的甚至会引起死亡。人们生活中最主要的动物蛋白质来源是畜禽肉，但我国化学和生物污染问题非常严重，是影响禽肉类食品安全最主要的因素，特别是禽畜肉中的兽药残留，严重危害人类健康、生活环境及动物疾病防控等。畜禽肉类兽药残留也是严重影响畜禽肉类食品出口的主要因素。我国畜禽肉类产量连续多年位居世界首位，但2022年畜禽肉类出口量占比不到0.5%，兽药残留是制约出口的重要因素之一。目前我国GB 316502019食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量3和GB 31650.12022食品安全国家标准 食品中41 种兽药最大残留限量中未见头孢曲松钠的限量要求4。因此，开展禽畜肉中头孢曲松钠药物残留研究具有十分重要的意义，能为我国头孢曲松钠等药物残留检测提供方法借鉴和技术指导。头孢类抗生素检测有多种方法，已报道的主要有液相色谱法5-8、气相色谱法9、胶体金免疫检测法10和超高效液相色谱-串联质谱（ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）法等11-14，前处理方法主要有固相微萃取15、免疫亲和色谱16、液-液萃取17和固相萃取18-23等；但目前对于禽畜肉中头孢曲松钠残留量的检测报道较少，且未见禽畜肉中头孢曲松钠残留量检测的相关检测标准，大部分兽药残留量检测方法也均较复杂，流程较繁琐，检测耗时长24-29；QuEChERS（quick,easy,cheap,effective,rugged,safe）法溶剂用量少，毒性小，无需繁琐的活化、过柱、洗脱、浓缩等前处理步骤，已广泛应用于农药和兽药残留的检测30-35，但QuEChERS法用于禽畜肉中头孢曲松钠残留检测的研究较少。因此本研究建立一种采用乙腈-水溶液（8 2，V/V）提取、QuEChERS法净化、UPLC-MS/MS 法检测禽畜肉中头孢曲松钠的方法，该方法与常见的兽药残留量检测方法相比，摒弃了操作繁琐的前处理方法，采用简单、快速的QuEChERS法净化。1 材料与方法1.1 材料与试剂牛肉、鸡肉、羊肉、猪肉和鸭肉等样品购自福州市仓山区盛景农贸市场。头孢曲松钠标准品（纯度98%）北京振翔科技有限公司；乙腈（色谱纯）、甲酸（色谱纯）、甲醇（色谱纯）德国默克公司；氯化钠（分析纯）国药集团化学试剂有限公司；C18、N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA）、NH2吸附剂、石墨化炭黑（graphitized carbon blacks，GCB）净化剂 青岛普瑞邦生物工程有限公司；0.22 m有机滤膜 北京中检维康技术有限公司。1.2 仪器与设备UPLC-Xevo TQ-S micro UPLC-MS/MS仪、ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm50 mm，1.7 m）美国Waters公司；LC-Vortex MF多模块旋涡混合器 湖南 力辰仪器科技有限公司；TG16-WS高速离心机 湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；FJD-822超声波清洗仪 深圳市富嘉达超声波设备有限公司；ME204E电子天平 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。1.3 方法1.3.1 溶液配制标准溶液配制：准确称取头孢曲松钠适量（精确至0.001 mg）至容量瓶（10 mL）中，用乙腈溶解，并定容，最终标准溶液质量浓度为1 000 mg/L，于20 保存。1.3.2 样品提取及净化准确称取匀浆后的禽畜肉样品2 g（精确到0.01 g）于离心管（50 mL）中，加入10 mL乙腈-水溶液（8 2，V/V），高速涡旋振荡15 min，超声提取10 min，加入1 g NaCl振荡1 min，4 000 r/min离心5 min，取上清液于15 mL离心管中，加入100 mg NH2吸附剂、100 mg C18、100 mg PSA，立即振荡1 min，过有机滤膜（0.22 m），上机测定。1.3.3 UPLC条件BEH C18色谱柱（2.1 mm50 mm，1.7 m），色谱柱温度30，进样量5 L，流速0.4 mL/min，流动相组成及梯度洗脱程序见表1。表 1 UPLC洗脱程序Table 1 UPLC gradient elution procedure时间/min甲醇体积分数/%0.1%甲酸体积分数/%0.05950.35951.09553.09553.15954.05951.3.4 质谱条件离子源类型：电喷雾离子源（electron spray ionization，ESI），正离子模式扫描；离子源温度150；毛细管电压3.5 kV；脱溶剂气温度500；脱溶剂气流速900 L/h；锥孔气流速20 L/h；监测模式：多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）；质谱参数见表2。192023,Vol.37,No.7分析检测肉类研究MEAT RESEARCH中国肉类食品综合研究中心CHINA MEAT RESEARCH CENTER表 2 目标物的质谱参数Table 2 Mass spectrometric parameters for ceftriaxone sodium目标物扫描模式母离子（m/