激光生物学报ACTALASERBIOLOGYSINICAVol.32No.3June.2023第32卷第3期2023年6月收稿日期：2023-03-13；修回日期：2023-05-16。基金项目：广东省人民医院院内博士后进站启动项目（BY01202204）；湖南省研究生科研创新项目（CX20210479）；国家自然科学基金面上项目（31872315）；国家重点研发计划项目（2018YFA0108700，2017YFA0105602）；国家自然科学基金重点国际（地区）合作与交流项目（81720108004）。作者简介：游诗琦，硕士研究生。*通信作者：李永青，教授，主要从事心脏发育和疾病的分子机制的研究。E-mail:liyongqing2002cn@aliyun.com。斑马鱼wbp11基因敲除品系的建立游诗琦1，陈宇2，3，杨雪婷1，李韵璇1，乔卿1，罗莹1姚梅英1，高罗晴1，刘欣1，王跃群1，吴秀山1，3，李永青1∗（1.湖南师范大学省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室，心脏发育研究中心，长沙410081；2.广东省心血管病研究所，广东省人民医院，广州510100；3.广东省心脏病发病机制与精准防治重点实验室，广州510100）摘要：WBP11是WW结构域结合蛋白家族的一员，参与前体mRNA剪接过程，是重要的剪接因子。斑马鱼作为重要的模式生物之一，其基因组中含有人类WBP11的同源基因wbp11。为了研究WBP11在脊椎动物早期发育过程中的作用机制，利用CRISPR/Cas9技术构建了斑马鱼wbp11基因敲除品系。首先，在wbp11基因的第二个外显子上设计基因敲除靶位点，体外转录合成sgRNA，通过显微注射技术对斑马鱼进行基因敲除，得到F0代嵌合体斑马鱼。随后，将嵌合体斑马鱼与野生型斑马鱼杂交，所得到的F1代斑马鱼进行基因型鉴定，筛选出其中的杂合子斑马鱼，并对杂合子斑马鱼的缺失条带进行测序，结果显示其为wbp11基因的2种缺失突变。让同种突变的F1代杂合子斑马鱼自交，对得到的后代F2进行基因型鉴定，筛选获得了纯合子斑马鱼，表明wbp11基因敲除品系构建成功。经显微镜白光成像观察发现，受精后48h的斑马鱼出现心包水肿、心脏线性化、骨骼弯曲畸形，这可能是由于wbp11基因突变引起剪接机制异常所导致的。此研究为探究WBP11基因在脊椎动物的早期发育中的作用机制开辟了道路。关键词：斑马鱼；wbp11；CRISPR/Cas9；基因敲除；杂合子中图分类号：Q341；Q812文献标志码：ADOI：10.3969/j.issn.1007-7146.2023.03.004ConstructionofZebrafishwbp11GeneKnockoutLineYOUShiqi1,CHENYu2,3,YANGXueting1,LIYunxuan1,QIAOQing1,LUOYing1,YAOMeiying1,GAOLuoqing1,LIUXin1,WANGYuequn1,WUXiushan1...
