安徽省两栖动物新记录种——秉志肥螈.pdf

四川动物 Sichuan Journal of Zoology 2023，42（4）：420-427安徽省两栖动物新记录种秉志肥螈黄平倩，汪帆，鲁航，荣鹏，肖祥寅，张方，黄松，吴孝兵，李冰欣*，陈进民*（安徽师范大学生命科学学院，重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室，安徽芜湖241000）摘要：肥螈属Pachytriton是中国的特有两栖类群，目前，安徽省只记录费氏肥螈Pachytriton feii 1种。本研究在安徽省黄山市休宁县马金岭自然保护区进行野外调查时，采集到肥螈属动物标本，形态符合秉志肥螈Pachytriton granulosus的鉴别特征，基于线粒体cyt b基因片段的分子系统学分析显示，其与秉志肥螈有最近的进化关系，确认秉志肥螈为安徽省新记录。本次发现将秉志肥螈的分布区域拓展至白际山脉，为肥螈属的生物地理学研究提供了基础资料，对于皖南及其周边地区地质史与生物区系研究具有重要意义。此外，讨论了秉志肥螈和费氏肥螈的同域共存问题，安徽省肥螈属物种的分布格局需要开展进一步的研究。关键词：肥螈属；新记录；安徽省；白际山脉中图分类号：Q959.5 文献标志码：A 文章编号：1000-7083（2023）04-0420-08Pachytriton granulosus,a New Amphibian Record in Anhui ProvinceHUANG Pingqian，WANG Fan，LU Hang，RONG Peng，XIAO Xiangyin，ZHANG Fang，HUANG Song，WU Xiaobing，LEE Pingshin*，CHEN Jinmin*（Anhui Provincial Key Laboratory of the Conservation and Exploitation of Biological Resources，College of Life Sciences，Anhui Normal University，Wuhu，Anhui Province 241000，China）Abstract:The genus Pachytriton is an amphibian group endemic to China，and has received wide attention for its scientific research and conservation values.At present，only one species（Pachytriton feii）has been recorded in Anhui Province.A field study was conducted in the Majinling Nature Reserve（Xiuning County，Huangshan City，Anhui Province），and fresh specimens of Pachytriton were collected.The morphological characteristics of the specimens were consistent with the diagnostic features of P.granulosus.In addition，the result of phylogenetic analysis using mitochondrial cyt b gene fragments revealed that the specimens had the closest evolutionary relationship with P.granulosus.Therefore，a new amphibian record of P.granulosus was confirmed in Anhui Province.This study expands the recorded distribution area of P.granulosus to the Baiji Mountains and provides the first-hand basic information for the biogeography of the genus Pachytriton，which is important for the study of the geological history and biota of southern Anhui and its surrounding areas.Furthermore，the potential sympatric coexistence of P.granulosus and P.feii was discussed，and it is recommended that the diversity and distribution pattern of Pachytriton species in Anhui Province should be further investigated.Keywords:Pachytriton；new record；Anhui Province；Baiji MountainsDOI：10.11984/j.issn.1000-7083.20220364收稿日期：2022-10-13 接受日期：2023-04-13基金项目：国家自然科学基金项目（32001222；31900323）；重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室开放基金项目（692001）；国家级大学生创新创业训练计划项目（202210370142）；休宁县生物多样性调查与评估项目；黄山国家森林公园生物多样性调查项目作者简介：黄平倩，硕士，研究方向：两栖动物分类与保护，E-mail：pingqian_*通信作者Corresponding author，E-mail：；420黄平倩等：安徽省两栖动物新记录种秉志肥螈肥螈属 Pachytriton Boulenger，1878 隶属两栖纲Amphibian有尾目Caudata蝾螈科Salamandridae，是中国的特有类群，主要分布于我国长江以南的亚热带地区，包括浙江、江西、福建、安徽、湖南、广东、广西和贵州等，栖息于山区森林溪流中（中国两栖类，2022）。目前，肥螈属已知10种，除秉志肥螈P.granulosus和黑斑肥螈P.brevipes外，其他8种均为近10余年发表的新物种（Li et al.，2018；Frost，2022；中国两栖类，2022）。安徽省的肥螈属目前已知费氏肥螈P.feii 1种（Frost，2022；中国两栖类，2022），其是2011年根据安徽黄山标本命名的新物种，目前分布于安徽南部及其相邻的江西东北部地区（Nishikawa et al.，2011；Wu&Murphy，2015）。本研究在安徽省黄山市休宁县马金岭自然保护区发现秉志肥螈，为安徽省两栖类新记录，此次发现为进一步探讨肥螈属同域物种分化提供了素材。此外，本研究将秉志肥螈的分布区域拓展至白际山脉，为肥螈属的生物地理学研究提供了基础资料，对皖南及其周边地区生物区系与地质史研究具有重要意义。1材料与方法1.1材料6 号肥螈标本（33）于 2022 年 78 月采自 安 徽 省 黄 山 市 休 宁 县 马 金 岭 自 然 保 护 区（11818 28.42 E，2931 56.33 N，海拔 445 m）。经安乐死后，取肝脏组织保存于95%乙醇溶液中；整体标本以10%甲醛溶液固定后，清水冲洗，75%乙醇溶液保存。标本及组织样品现均保存于安徽师范大学（ANU）。1.2形态鉴定与测量形态测量指标和外部形态描述主要参考费梁等（2012）、Wu 等（2012）、Yuan 等（2016）、Li 等（2018）的方法。用电子游标卡尺测量标本的24个形态指标（精度 0.1 mm）：头体长、尾长、头长、头宽、头高、吻长、眼径、眼间距、鼻眼距、鼻间距、肩宽、前肢长、后肢长、尾宽、尾高、第一指长、第二指长、第三指长、第四指长、第一趾长、第二趾长、第三趾长、第四趾长和第五趾长。1.3DNA提取、扩增及测序使 用 常 规 酚/氯 仿 抽 提 法（Sambrook et al.，1989）提取样品基因组 DNA 后，20 保存备用。参照 Wu 等（2010）的方法进行 cyt b 基因片段的PCR扩增和测序。PCR反应体系为25 L，反应程序：94 2 min；94 30 s，52 45 s，72 90 s，35个循环；72 5 min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后，送安徽通用有限公司双向测序。1.4分子系统发育研究使 用 DNASTAR LASERGENE 7.0（Burland，2000）的SeqMan对测序获得的双向序列峰图进行正反链互补和人工校对。将获得的新序列在GenBank上进行BLAST分析，然后搜索序列同源性，确保新获得的序列是目标DNA片段。确认后在GenBank 中下载肥螈属所有物种 cyt b 基因的代表序列，并以东方蝾螈 Cynops orientalis 和棕黑疣螈Tylototriton verrucosus 为外群（表 1），使用 MEGA 7（Kumar et al.，2016）比对序列。使用贝叶斯法（BI法）和最大似然法（ML法）同时构建系统发育树。利用JModelTest 0.1.1（Posada，2008）基于AIC标准选择最适核苷酸替代模型。运用MRBAYES 3.2（Ronquist&Huelsenbeck，2003）构建 BI 系统发育树，共运行 2 000万代，每 1 000代进行 1次抽样。通过Tracer 1.7（Rambaut et al.，2018）中的有效样本量判断结果是否收敛。基于收敛的情况，舍弃前25%代 数。运 用 RaxML（Stamatakis&Hoover，2008）构建ML系统发育树，进行1 000 bootstrap重抽样分析。肥螈属物种间的遗传距离采用MEGA 7基于P-distances距离模型进行计算。421四川动物 2023 年 第 42 卷 第 4 期Sichuan Journal of Zoology Vol.42 No.4 20232结果2.1形态描述标本经形态测量（表2）和检视，均符合秉志肥螈的鉴定特征。体型肥壮；头呈椭圆形、扁平，侧面无棱脊，头宽小于头长；吻部较长，端圆；鼻孔小且距离吻端极近，吻长大于鼻间距、鼻眼距；咽喉部有纵褶肤，颈部有明显的褶皱；唇褶发达，上下颔有细齿，犁骨齿列呈“”形，枕部有“V”形隆起，但不明显。皮肤光滑，躯干至尾基部呈圆柱状；背腹略扁平，脊背部位没有隆起而略成纵沟；肋沟11条左右，部分个体身体两侧有细的横皱纹，腹部有横皱沟。头体、四肢背面褐色，无黑色斑点；头体腹面橘红色，有少数不规则的褐色短纹或呈蠕虫状斑；四肢腹面、肛孔，以及尾巴下缘、尾巴腹面橘红色（图1）。尾基部宽厚，后半段逐渐侧扁，末端呈钝圆状，尾部有细的横皱纹，尾背鳍褶达体背前方；雄性肛部有明显隆起，肛孔纵长，内壁有乳突；雌性肛部隆起不显著，肛孔较短，内壁无乳突。四肢粗短，前肢比后肢短且细。指长顺序为3241，第一指较其他指短小；趾长顺序为34251，第一趾和第五趾较其他趾短小；指趾末端均具缘膜，无角质鞘（图2）。2.2分子系统发育分析cyt b基因序列长1 107 bp。基于BI法和ML法构建的系统发育树拓扑结构基本一致（图3）。本次采自安徽省黄山市休宁县马金岭自然保护区表1样品信息表Table 1Information of samples used in this study序号ID123456789101112131415161718192021物种Species秉志肥螈Pachytriton granulosus瑶山肥螈Pachytriton inexpectat