TRPV1_TRPV4和CEACAM6共表达与结直肠癌患者总生存期的关系.pdf

：研究生园地 和 共表达与结直肠癌患者总生存期的关系刘世怡，华璐，黄俊星，郭卿（南京中医药大学附属泰州人民医院，南京；泰州人民医院肿瘤科，江苏泰州）摘要：目的 探讨辣椒素受体（）及瞬时性受体电位通道香草酸受体（）与癌胚抗原相关细胞黏附分子（）共表达对结直肠癌（）患者预后的影响。方法 使用 交互分析软件根据基因表达中值将 例 患者分为高表达和低表达两组（中值 例不入组），以设定阈值对 和 数据库中 和 基因的表达量进行（）转换及差异分析，采用 检验分析 和 基因共表达与 患者总体生存期（）的关系，采用基因组数据分析及免疫组化染色法对上述结果进行验证。结果 患者癌组织中 的表达量显著低于癌旁组织（，），而 显著高于癌旁组织（，）。和 双高表达组 患者的 显著高于 单高表达患者（中位：年 年，）。结论 检测 及 水平可有效评估 高表达 患者的预后。关键词：结直肠癌；总体生存期；辣椒素受体；瞬时性受体电位通道香草酸受体；癌胚抗原相关细胞黏附分子 中图分类号：文献标志码：生物信息学是用数学和计算机技术对生物数据库的信息加以检索、分类、加工、分析，从而获取具有特定意义的信息，其在肿瘤学研究中的应用日益广泛。结直肠癌（，）是死亡率较高的消化道恶性肿瘤之一。虽然传统的手术、化疗、放疗和免疫疗法不断进步，但总体的临床效果仍不理想。如何发现可用于疗效及预后评估的 生物学标志物，并为患者提供最佳的个体化治疗方案仍是临床急需解决的问题之一。瞬时受体电位通道亚家族（，）是位于细胞膜上的一类重要的阳离子通道，包含 共 个家族成员，在调控肿瘤细胞增殖和存活过程中具有重要的作用。癌胚抗原相关细胞黏附分子（，）属于免疫球蛋白超家族成员之一，其主要通过促进肿瘤的侵袭、转移、抗肿瘤细胞失巢凋亡、增强肿瘤药物抗性及逃避肿瘤免疫等机制，参与肿瘤的发生、发展。研究证实，在 患者癌组织中呈高表达，且高水平 常预示患者预后不良。本研究旨在通过生物信息学分析探讨、单独及与 共表达对 患者总体生存期（）的影响，以期为临床筛选新的 肿瘤标志物提供实验依据。材料与方法 生物信息学及 相关分析生物信息学分析采用北京大学开发的用于人类癌症基因表达分析和交互分析软件（：）对 （：）和（：）生物信息库中的 和 数据进行检索及采集，共收集 例 肿瘤组织数据，且均来自于美国国家癌症基因组研究所中心（）和国家人类基因组研究所（）。进一步对表达数据进行（）转 换 并 进 行 差 异 分 析，将 定义为中位数（肿瘤组织）中位数（癌旁组织）。结 果 判 读：具 有 比 预 设 阈 值 更 高 的 值和更低 值的基因被认为是差异表达基因。相关分析 在 的相关性分临床检验杂志 年 月第 卷第 期 ，基金项目：国家自然科学基金（）；江苏省卫健委科研项目（）；泰州市社发项目（）。作者简介：刘世怡，年生，女，硕士研究生，研究方向为消化道肿瘤。通信作者：黄俊星，主任医师，：；郭卿，主任医师，：。析模 块 中，对 于 非 正 态 分 布 的 变 量 数 据 使 用 相 关 分 别 分 析 与 以及 与 之间的相关性。以、相关系数（）作为显著相关的阈值。中位 分析分别以、和 为关键词，对 和 数据库进行检索及采集，根据基因表达中值，采用 软件通过单、双因素分析将 例样本分成高表达组和低表达组（中值 例不入组），其中单因素（）分析中，高表达组 例（剔除中值 例），低表达组 例。双因素（）分析中，双高表达组 例（剔除中值 例），双低表达组 例。采用 检验分析并比较 单高表达、双高表达或 双高表达 患者的中位。研究对象收集 年 月至 年 月泰州市人民医院肿瘤科初次手术切除的 患者的癌组织和癌旁组织标本各 例，其中男 例，女 例，年龄（）岁。纳入标准：符合中国结直肠癌诊疗规范（版）诊断标准，并经肠镜及病理组织学检查确诊为结肠癌或直肠癌；首次确诊且未经放化疗等治疗。排除标准：合并其他恶性肿瘤者；依从性差且无法配合完成治疗或随访者；存在心、脑、肾等基础疾病者；临床资料不完整者。本研究通过南京医科大学附属泰州人民医院医学 伦 理 委 员 会 审 核 批 准（批 准 文 号：），各研究对象均签署知情同意书。免疫组化染色 分别取 患者的癌组织及癌旁组织标本，用 中性甲醛固定、石蜡包埋，切成 厚切片，经二甲苯和梯度乙醇（无水乙醇，重复 次；乙醇 ，重复 次；乙醇 ；乙醇 ）脱蜡、脱水，洗涤 次，每次 ，过氧化氢 甲 醇 溶 液 浸 泡，以抑制内源性过氧化物酶活性。切片在 溶液（、）中煮沸 以修复抗原。洗涤 次，每次 ，与正常山羊血清（福州飞净生物科技公司）室温温育 以阻断非特异性反应。分别加入兔抗人（）、（）抗体（上海艾比玛特医药科技公司，稀释）置于湿盒中 过夜，洗涤 次，加入 标记的羊抗兔（美国 公司，稀释）室温温育 ，洗涤 次，滴加，二氨基联苯胺（）显色液，苏木素复染、透明、常规脱水、封片。以 替代一抗作为阴性对照。在 光学显微镜（日本奥林巴斯公司）下每张切片选取 个高倍镜视野（），使用 图像分析软件（美国 公司）分析并计算。公式：平均光密度值 积分光密度值（）区域面积。结果判读：高倍镜视野下随机选择每张切片中 个区域（），评估染色阳性细胞的百分比（：分，：分，：分，：分）及染色强度（阴性：分，弱阳性：分，阳性：分，强阳性：分）。病理读片由两位高年资病理科医生分别独立完成，两者计算出的总分取平均值计作为最终总分，其中 分为低表达，分为高表达。结果 组织中 基因的表达水平 基因组数据分析结果显示，例 患者肿瘤组织中 基因的相对表达量显著低于癌旁组织（，），而 基因显著高于癌旁组织（，）。相关性分析结果 相关性分析结果显示，与（，）和（，）之间，以及 与（，）之间表达水平的相关性均无统计学意义。各组中位 分析结果 和 双高表达 患者的中位 显著高于 单高表达组（年 年，），而 单高表达组中位 与 和 双高表达 患者间的差异无统计学意义（年 年，）。见图。临床检验杂志 年 月第 卷第 期 ，注：，单 高 表 达 组 患 者 中 位；，和 双高表达 患者的中位；，和 双高表达 患者的中位。图 各组中位 分析结果 免疫组化染色分析结果 患者癌组织中 蛋白呈高表达者的比例显著低于癌旁组织（）（），而癌组织中 蛋白呈高表达者的比例亦显著高于癌旁组织（）（），。见图。讨论 既往关于 肿瘤标志物的研究多侧重于筛查和诊断方面，对于 患者预后相关的标志物研究偏少。血清 水平被认为与 的复发和预后密切相关，但其在临床实际应用中具有一定的滞后性。赵芳等认为通过建立 患者预后列线图预测模型，能更好地预测 患者术后 年和 年无病生存率（，），然而，由于缺乏更高效的标志物纳入列线图，其临床应用仍受到一定程度的限制。近年来，与恶性肿瘤发生、发展的关系逐渐成为研究热点。可介导辣椒素，抑制人胃癌细胞系 和结肠癌细胞系 的生长，并通过调节、等蛋白的表达以诱导细胞凋亡。另有研究表明，在肿瘤细胞的增殖、分化、迁移和抗凋亡中起重要作用。图 免疫组化染色检测 癌组织及癌旁组织中 和 蛋白的表达 本研究通过基因组数据分析（基因表达量）和免疫组织化学染色（蛋白质表达量）均证实 肿瘤组织中 及蛋白质的表达量显著低于癌旁组织，与 等和付俊文等通过免疫组化染色法证实与癌旁组织相比，在 癌组织中的表达量显著降低的结果相一致，表明是 细胞凋亡的促进因子，对 的进展起到抑制作用。本研究通过基因组数据分析和免疫组织化学染色同样显示，与癌旁组织相比，癌组织中 及蛋白质的表达量显著升高，与 等通过 和免疫组化染色以及 等通过对 数据库分析发现 癌组织中 的表达量显著高于癌旁组织相一致，表明高水平 可能通过促进肿瘤血管生 成，促 进 进 展。笔 者 进 一 步 通 过 相关性分析证实，与、与 以及 与 之间的表达水平均无显著无相关性，表明其可以作为 的独立影响因素。生物信息分析显示，单因素分析中 高、低表达组的 患者中位 分别为 年 和 年；双 因 素 分 析 中 双高 双低表达组的 患者中位 分别为 年和 年，双高表达临床检验杂志 年 月第 卷第 期 ，组的 患 者 中 位 为 年，而 双低表达组的 患者中位 高于所观察时间，表明对于 高表达的 患者，若同时伴有升高，则患者预后较好，中位数较高；而如果伴有 升高，则患者预后不良，中位数较低。本研究存在以下不足之处：首先，本研究通过 软件收集的数据的分组依据为 和 样本的表达中值，而非表达量的绝对值。其次，本研究收集的 例样本量偏少，观察时间也不足以对 进一步分析。水平能否作为 患者疗效及预后的标志物尚需更多的临床研究证实。笔者在今后的研究中将继续增加样本量，通过实时荧光定量 检测癌组织和癌旁组织中、和 基因的表达水平，并结合免疫组化染色评分进行分组，同时延长 的观察时间，以期更加客观地阐述 水平对高表达 的 患者预后的影响。参考文献，：，：国家卫生计生委医政医管局，中华医学会肿瘤学分会 中国结直肠癌诊疗规范（版）中华胃肠外科杂志，（）：章维维，邹红，杨蓉，等 常规临床检验指标与结直肠癌临床病理参数的关联分析及诊断预测价值 临床检验杂志，（）：赵芳，徐斌，蒋敬庭，等 未转移结直肠癌患者术后转移风险预测列线图的构建 临床检验杂志，（）：，：，（）：付俊文，何雪铼，侯能易，等 瞬时受体电位香草酸亚型 在结肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞生物学行为的影响实用医院临床杂志，（）：，（）：，：，（）：（收稿日期：）（本文编辑：许晓蒙）临床检验杂志 年 月第 卷第 期 ，