QuEChERS-超高液相色谱_串联质谱法测定炒白术中甲拌磷亚砜残留的不确定度评定.pdf

472023 年 8 月QuEChERS-超高液相色谱/串联质谱法测定炒白术中甲拌磷亚砜残留的不确定度评定QuEChERS-超高液相色谱/串联质谱法测定炒白术中甲拌磷亚砜残留的不确定度评定邹艺荣1，洪家顺2（1.江西万拓环境检测有限公司，江西上饶，334000，2.江西省道地药材质量评价研究中心，江西南昌，330029）摘 要：目的：建立 QuEChERS-超高液相色谱/串联质谱法测定药材中农药残留，并评定其不确定度。方法：按照中国药典2020 版四部通则第五法测定药材中农药残留，评定不确定度。结论：对炒白术中农药残留不确定度评定影响最大的是农残对照品溶液配制，其次为仪器校准、回收率、样品重复性、样品称量、体积变化。通过对不确定度分量进行量化和合成，表明炒白术样品中甲拌磷亚砜残留为 0.081mg/kg，扩展不确定度为 0.005mg/kg（k=2），该方法为科学评价QuEChERS-超高液相色谱/串联质谱法测定药材中农药残留的测量结果的准确性提供参考。关键词：甲拌磷亚砜；炒白术；不确定度；超高液相色谱/串联质谱法中图分类号：O657.63；TS272.7 文献标志码：A 文章编号：1008-3103（2023）04-0047-05Evaluation of Uncertainty in Determination of Phorate Sulfoxide Residues in Stir Fried Rhizoma Atractylodis by QuEChERS-ultra-high Liquid Chromatography/tandem Mass SpectrometryZouYi-rong1，HongJia-shun2（1.JiangxiWantuoEnvironmentalTestingCo，Ltd.，ShangraoJiangxi334000，China；2.JiangxiProvinceevaluationandresearchcenterofdaodiherbs，NanchangJiangxi330029，China）Abastrct：Objective：toestablishaQUECHERS-UPLC/ms/msmethodforthedeterminationofpesticideresiduesinmedicinalmaterialsandtoevaluateitsuncertainty.Methods：accordingtothefifthmethodofChinesepharmacopoeia（2020edition），thepesticideresiduesinmedicinalmaterialsweredeterminedandtheuncertaintywasevaluated.Conclusion：themostinfluentialfactorontheuncertaintyofpesticideresiduesinfriedatractylodesmacrocephalaistheformulationofpesticidecontrolsolution，followedbyinstrumentcalibration，recovery，samplereproducibility，sampleweighing，volumechange.Byquantifyingandsynthesizingtheuncertaintycomponents，theresultsshowedthattheresidueofphoinChinesefriedatractylodesmacrocephalawas0.081mg/kg，andtheexpandeduncertaintywas0.005mg/kg（K=2），thismethodprovidesascientificreferenceforevaluatingtheaccuracyofQUECHERS-UPLC/msdeterminationofpesticideresiduesinmedicinalmaterials.Keywords：phoratesulfoxide；friedatractylodesmacrocephala；uncertainty；liquidchromatography-tandemmassspectrometry；作者简介：邹艺荣（1988），本科，研究方向为中药材质量评价与研究、土壤质量评价与研究；通讯作者：洪家顺（1987），本科，助理实验师，研究方向中药材质量评价与研究、土壤质量评价与研究。0 引言白 术（AtractylodesmacrocephaiaKoidz）是 菊 科植物白术的干燥根茎，为浙江道地药材“浙八味”之一，素有“南方人参”之称1，白术为喜阴好干爽的482023 年第 4 期（总第 168 期）菊科植物，怕高温干旱且不耐涝，抗逆性差，易发生病虫害2，目前药农使用于白术病虫害防治的药剂有30 多种，农药的使用不当易造成农药的残留3。甲拌磷有剧毒，是一种内吸性杀虫杀螨剂，用于防治刺吸式口器和咀嚼式口器害虫，在土壤或植物中常以甲拌磷亚砜，甲拌磷砜、氧甲拌磷、氧甲拌磷亚砜、氧甲拌磷砜等代谢物的形式存在4，在对白术进行检测时，发现甲拌磷属于农药残留易检出品种，检出农药多为杀菌剂，杀虫剂5。甲拌磷属于高毒农药，过量摄入会导致神经系统紊乱，呼吸衰竭等危险6。中国药典（2020 年版）规定甲拌磷不得超过 0.02mg/kg，所以保证检测结果的准确度非常重要。在样品检测过程中，当结果和标准限量值接近时，须对结果进行不确定度的评估来确保检验结果的准确性。不确定度是对检测结果的质量进行定量评价的关键参数，有助于判定检测结果是否超标4，5。气相色谱法和气相色谱-质谱法测定甲拌磷的不确定度评定已有报道6，7，且 QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定噻虫嗪、壬基酚、多菌灵等农药残留量的不确定度评定也已有报道7-10，但是具体方法均与中国药典（2020 年版）四部通则第五法有差异，而采用中国药典（2020 年版）测定药材中甲拌磷亚砜残留量的不确定度评定则未见报道。本实验按照中国药典一部和四部通则第五法测定炒白术中的 33 种禁用农药残留14，15，依据化学分析测量不确定度评定（JJF 11352005）13和测量不确定度评定与表示（JJF 1059.12012）16建立其不确定度评定方法和模型，分析了炒白术样品测试的试验过程中影响不确定度的来源，为第三方检测机构报告的准确性提供了科学可靠的依据，同时为测定其他农药残留量的不确定度评定提供了参考。1 实验部分1.1 仪器与试剂XevoTQ-S 超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用仪（沃特世中国有限公司）；X1R 高速冷冻离心机（赛默飞世尔科技中国有限公司）；XSR205DU/A 精密电子天平（梅特勒-托利多国际贸易上海有限公司）；MILLI-IQ7005 超纯水机（密理博中国有限公司）。农 残 对 照 品 溶 液：55PesticideMixSolution（编号：1ST29907-B_ALT097019_V01，天 津 阿 尔 塔 科 技有限公司）；乙腈、甲醇（色谱纯，赛默飞公司）；QuEChERS 萃取盐包、QuEChERS 净化盐包（上海安谱）；炒白术样品来自送检样品。1.2 农残对照品溶液的配制精密移取 1.00mL 禁用农药混合对照品溶液置于5.00mL 容量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，即得。1.3 供试品制备（QuEChERS 法）称取已过三号筛炒白术供试品粉末 3.0g，精密称定，置于 50mL 聚苯乙烯具塞离心管中，加入 1%浓度的冰醋酸溶液 15.0mL，涡旋使炒白术粉充分浸润，放置 30 分钟后，精确加入乙腈 15mL，涡旋混匀，置高速振荡器上剧烈振荡（1500 次/分）5 分钟，加入QuEChERS 萃取盐包 7.5g，立即涡旋摇匀，再置于高速振荡器上剧烈振荡（1500 次/分）3 分钟，于冰浴中冷却 10 分钟，离心（每分钟 6000 转）5 分钟，取上清液 9mL，加入 QuEChERS 净化盐包中，涡旋使充分混匀，置于高速振荡器上剧烈振荡（500 次/分）5分钟使净化完全，于赛默飞离心机离心（每分钟6000转）5 分钟，使用移液枪精密吸取上清液 5mL，置于氮吹仪上于 40水浴浓缩至约 0.4mL，加乙腈稀释至1.0mL，涡旋混匀，滤过，取续滤液，即得。1.4 仪器条件色谱柱：X BridgeBEHC18Column，130，2.5m，3mm100mm，1/pk；流动相 A：0.1%甲酸溶液（含 5mmol/L 甲酸铵），流动相 B：乙腈-0.1%甲酸溶液（含 5mmol/L 甲酸铵）（95：5）；柱温：40；流速：0.3mL/min；进样体积：1L。离子源电离模式：电喷雾电子（ESI），正离子模式；干燥器温度：550；雾化气流速：2.5L/min；碰撞气类型：Ar；扫描模式：多反应监测（MRM）2 数学模型本例采用外标法测定农药残留量，计算公式如下：x（mg/kg）=AVAM样标样对样?x 样品中农药的质量分数，mg/kg；M样样品质量，g；A样样品溶液中农药残留物的峰面积；标农残对照品溶液中农药残留物的浓度，g/L；V样供试品溶液最终定容体积，mL。492023 年 8 月QuEChERS-超高液相色谱/串联质谱法测定炒白术中甲拌磷亚砜残留的不确定度评定 3 不确定度来源按照本文第 2 项数学模型评估分析整个试验过程，确定并列出影响农残测定结果的各不确定度分量（图 1），主要包括农残对照品溶液的配制过程、样品的重复测定、方法的回收率、称量样品、仪器设备的校准、试验过程中的体积变化引入的不确定度等环节。图 1 农药残留量各组分测定的不确定主要影响因素4 不确定度评定4.1 称量样品引入的相对标准不确定度Urel（m）天平最小刻度值为 0.1mg，按均匀分布最小刻度值不确定度：Um2=0 1 23.=0.02887mg，称量样品引入的相对标准不确定度：Urel（m）=0.02887/3=0.009624.2 体积变化引入的相对标准不确定度4.2.1 量筒引入的不确定度U（V量）依据 JJG 196200617，100mL 量筒的体积允差为 1.0mL。量筒读数在溶液凹液面读取，按三角分布（采用 B 类评定方法）：U（V量）=0 16.=0.0408mL4.2.2 温度对体积的影响引入的不确定度实验室室温温度在 205，20时乙腈溶剂的热膨胀系数为 0.00137-1，实验过程中精密加入15.0mL 乙腈，假设温度变化是矩形分布：U（V1）=（150.001375）/3=0.059mL综合上述结论，由体积引入的合成不确定度：U（V）=()221()U VU V+量=0.0717则由体积变化引入的相对标准不确定度：Urel（V）=U VV?=0.00484.3 农残对照品溶液引入的相对标准不确定度根据标准物质证书信息（有效期为 2022.06.252023.03.25），各农药残留物不同浓度下的扩展不确定度见表 1，当包含因子k=2 时，由标准物质溶液引入的相对标准不确定度如下式：Urel（标 1）=UncC.%?2表 1对照品各组分浓度对应的扩展不确定度残留物名称实际浓度 C（g/mL）不确定度Unc.（%）标准物质引入的相对标准不确定度Urel（标 1）甲拌磷亚砜（Phorate-sulfoxide）450.006254.4 农残对照品溶液配制过程引入的标准不确定度U（x配）对照品溶液配制时所产生的不确定度主要来自移液枪的允差、容量瓶的允差和试验环境温度引起的体积变化。根据 JJG 1962006 和送检仪器的校准证书查询容量瓶、移液枪的允差 a17，采用 B 类评定方法，服从三角分布，则 U（x体）=a/6。实验室温度在 205，乙腈的热膨胀系数为0.00137-1（20），则温度引起的乙腈体积的变化b=（V0.00137